天麻頭風靈膠囊的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及藥品的檢測方法，特別涉及天麻頭風靈膠囊的檢測方法，屬于藥品的
技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】：
[0002] 天麻頭風靈膠囊收載于衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第五冊、第十六冊，具有滋 陰潛陽、祛風、強筋骨的功效，用于頑固性頭痛、長期手足麻木、慢性腰腿酸痛。現(xiàn)有質(zhì)量標 準中，僅對藥品的性狀、鑒別、檢查項進行控制，對其中藥材如天麻、槲寄生的有效成分缺乏 含量測定手段，使得天麻頭風靈膠囊產(chǎn)品的質(zhì)量難以得到有效控制，進而影響產(chǎn)品療效。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0003] 本發(fā)明提供一種天麻頭風靈膠囊的檢測方法，包括性狀、鑒別、檢查和含量測定； 該檢測方法能全面有效地控制天麻頭風靈膠囊的質(zhì)量，從而確保該藥物的臨床療效和用藥 安全性。
[0004] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：天麻頭風靈膠囊的檢測方 法，這種膠囊這樣制備：天麻50g、牛膝50g、玄參50g、地黃150g、當歸215g、杜仲43g、川芎 5〇g、槲寄生215g、野菊花50g、鉤藤50g，以上十味，天麻粉碎成細粉，其余玄參等九味加水 煎煮三次，每次1. 5~2小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至稠膏狀，加入天麻粉混勻，干 燥，粉碎，分裝成1000粒，即得；該檢測方法由性狀、鑒別、檢查和含量測定組成，其中鑒別 是對槲寄生的TLC鑒別，含量測定是對膠囊中天麻素、齊墩果酸的含量測定。
[0005] 上述天麻頭風靈膠囊的檢測方法，具體是這樣的：
[0006] 性狀：本品為膠囊劑，內(nèi)容物為黃棕色粉末；氣清香，味微苦；
[0007] 鑒別：取本品10粒，加乙醇20-30ml，加熱回流30-40分鐘，靜置；取上清液 10-15ml，加鹽酸l-2ml，加熱回流0. 5-2小時后濃縮至5ml，加水10ml，用沸程為60~90°C 的石油醚20-30ml提取，提取液蒸干，殘渣加乙醇lml使溶解，作為供試品溶液；另取齊墩果 酸對照品，加乙醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗， 吸取上述兩種溶液各2 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿：甲醇=40:1為展開劑， 展開，取出，晾干，噴以5%磷鉬酸乙醇溶液，在110°C烘約10分鐘，供試品色譜中，在與對照 品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0008] 檢查：符合中國藥典2010年版一部附錄膠囊劑項下有關(guān)的各項規(guī)定；
[0009] 含量測定：
[0010] ⑴天麻素
[0011] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈：〇. 2% 磷酸=1-10 :90-99為流動相，檢測波長為220nm，流速為1.0ml/min，理論板數(shù)按天麻素峰 計，應(yīng)不低于3000 ;
[0012] 對照品溶液的制備：取天麻素對照品適量，精密稱定，加流動相制成每lml含 〇· 2mg的溶液，即得；
[0013] 供試品溶液的制備：取裝量差異項下的內(nèi)容物，研細，取1. 0g，精密稱定，置100ml 具塞錐形瓶中，精密加入50ml流動相，超聲處理30分鐘，放冷，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液 用0. 45 μ m的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0014] 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，進行 檢測；
[0015] (2)齊墩果酸：
[0016] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇：0. 2% 磷酸=80-90 :10-20為流動相，檢測波長為210nm，流速為1.0ml/min，理論板數(shù)按齊墩果酸 計，應(yīng)不低于3000 ;
[0017] 對照品溶液的制備：取齊墩果酸對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1ml含 〇· lmg的溶液，即得；
[0018] 供試品溶液的制備：取本品內(nèi)容物，研細，取2. Og，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶 中，精密加入20ml無水乙醇，稱定重量，加熱回流30分鐘；放冷，用無水乙醇補足減失的重 量，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液用微孔濾膜（〇.45um)濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0019] 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀進行 測定。
[0020] 上述含量測定中，天麻頭風靈膠囊每粒含天麻以天麻素計，不得少于0. 10mg ;每 粒含槲寄生以齊墩果酸計，應(yīng)不少于0. l〇mg。
[0021] 為了研究天麻頭風靈的檢測方法，申請人進行了大量的實驗以篩選最佳方案，具 體如下：
[0022] 1、天麻素含量測定：
[0023] 1. 1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙 腈-〇.2%磷酸（2.5:97.5)為流動相；檢測波長為22〇11111;流速為 ：1.〇1111/1^11;理論板數(shù)按 天麻素峰計，應(yīng)不低于3000。
[0024] 2. 2線性關(guān)系考察：精密稱取天麻素對照品21. 08mg，置50ml容量瓶中，加流動 相溶解并稀釋定容至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。再分別精密吸取不同體積的對照品 儲備液，加流動相稀釋成濃度為：〇· 04216mg/ml、0. 08432mg/ml、0. 16864mg/ml、0. 2108mg/ ml、0. 25296mg/ml的溶液。分別精密吸取上述對照品溶液和對照品儲備液各lOul注入液相 色譜儀，測定其峰面積，并以峰面積值（A)對進樣量（C)進行回歸，得標準曲線方程為：A = 1705526. 1496C+47554. 3182, r = 0. 9999。以峰面積值（A)對進樣量（C)作圖，得一直線， 結(jié)果表明在0. 4216ug~4. 216ug范圍內(nèi)，天麻素線性關(guān)系良好。
[0025] 2. 3重復(fù)性試驗：取同一批（批號080202)樣品，分別精密稱取6份，每份約1. 0g， 照質(zhì)量標準草案含量測定項下供試品溶液方法制備，分別精密吸取l〇ul進樣，記錄色譜 圖，計算含量，6份樣品天麻素含量測定平均值為0. 9220mg/g，RSD為0. 6%，說明重復(fù)性良 好。見表1。
[0026] 表1重復(fù)性試驗結(jié)果
[0027]
[0028] 2· 4準確度試驗：取已知含量的樣品（批號080202,含量0· 9220mg/g)6份，每份 約0. 5g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，分別精密添加天麻素對照品溶液（0. 2108mg/ ml) 2ml，照質(zhì)量標準草案含量測定項下供試品溶液方法制備，制作加樣回收供試品液。測定 天麻素含量，測得平均加樣回收率為97. 56%，RSD為2. 3%，結(jié)果表明，本法具有良好的加 樣回收率。見表2。
[0029] 表2回收率試驗結(jié)果
[0030]
[0032] 2. 5重現(xiàn)性試驗：取三批（批號分別為：061103、070104、070804)樣品，分別在 質(zhì)研室和檢驗科實驗室由不同的人照質(zhì)量標準草案含量測定項下供試品溶液方法進行制 備，分別精密吸取l〇ul進樣，記錄色譜圖，計算含量，三個批號的天麻素含量平均值分別為 1.2933mg/g、l. 1661mg/g、l. 1878mg/g，RSD%分別為 0·3%、0· 1%、0.0%，說明重現(xiàn)性良好。 見表3。
[0033] 表3重現(xiàn)性試驗結(jié)果
[0034]
[0035] 2· 6耐用性試驗：
[0036] 2. 6. 1穩(wěn)定性實驗：將批號為080202的天麻頭風靈膠囊，照質(zhì)量標準草案含量測 定項下供試品溶液方法制備供試品溶液，分別于〇, 2,4,6,8,12, 24h精密吸取10ul注入液 相色譜儀，測定樣品中天麻素峰面積值。結(jié)果樣品峰面積的RSD%為1. 0%，表明樣品溶液 在24h內(nèi)穩(wěn)定。
[0037] 2. 6. 2不同柱溫比較：將同一樣品在35°C、40°C、45°C不同柱溫下測定其含量進行 比較，結(jié)果顯示在35-45°C范圍內(nèi)，樣品含量平均值為0. 9256mg/g，RSD%為0. 4%，符合要 求。
[0038] 2. 6. 3不同流速比較：將同一樣品在0. 9、1.0ml/min不同流速下測定其含量進行 比較，結(jié)果顯示樣品含量分別為0. 9403、0. 9295mg/g，RSD%為0. 6%，符合要求。
[0039] 2. 7樣品含量測定：
[0040] 用質(zhì)量標準草案含量測定項下供試品溶液方法制備10批，共20份樣品，測其天麻 素含量，結(jié)果見表4。
[0041] 表4樣品天麻素的測定結(jié)果
[0042]
[0043] 2. 8樣品含量限度確定：
[0044] 根據(jù)實驗結(jié)果，成品中天麻素的含量在0. 07373%~0. 12891 %之間，因此制定 成品中天麻素的含量下限為：0.07373% X1000X0.2g/粒X80%=0. 1179mg/粒；故暫定 本品每粒含天麻以天麻素（C13H1807)計應(yīng)不少于0. 10mg/粒。
[0045] 2、齊墩果酸含量測定：
[0046] 2. 1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：
[0047] 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（250*4. 6mm 5um);以甲醇-0. 2%磷酸（82. 5 : 17. 5)為流動相；檢測波長為210nm ;流速為：1.0ml/min ;理論板數(shù)按齊墩果酸計，應(yīng)不低 于 3000。
[0048] 2. 2線性關(guān)系考察：精密稱取齊墩果酸對照品10. 34mg，置25ml容量瓶中，加無 水乙醇溶解并稀釋定容至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。再分別精密吸取不同體積的 對照品儲備液，加無水乙醇