2.85mg/ml的溶 液，置4°C冰箱保存，備用。
[0040] (2)對照品貯備液：
[00411 a.稱取丁苯酞對照品適量，無水乙醇稀釋成濃度為10.72mg/ml的溶液，置4 °C冰箱 保存，作為對照品貯備液A;
[0042] b .稱取藁本內(nèi)酯對照品適量，無水乙醇稀釋成濃度為1.75mg/ml的溶液，現(xiàn)用現(xiàn) 配，作為對照品貯備液B。
[0043] (3)對照品溶液:將對照品貯備液A( 丁苯酞）、對照品貯備液B(藁本內(nèi)酯)和內(nèi)標(biāo)品 貯備液混合，用無水乙醇稀釋定容，制得對照品溶液;所述對照品溶液中，丁苯酞、藁本內(nèi)酯 和內(nèi)標(biāo)品的濃度分別為0.2148mg/ml、0.70mg/ml和0.085mg/ml，用于系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)。 [0044] (4)供試品溶液:稱取按2.2項(xiàng)提取的川芎揮發(fā)油約O.Olg，加無水乙醇稀釋定容至 lml，搖勻，精密量取100μΙ，加入30μ1內(nèi)標(biāo)品貯備液，用無水乙醇稀釋定容至lml棕色量瓶 中，搖勻。
[0045] (5)系列丁苯酞對照品溶液：
[0046] 取對照品貯備液A適量，用無水乙醇稀釋成丁苯酞濃度為0.0064，0.0268，0.0536， 0. 2148，0.4288，0.8576，1.7152mg/ml的系列對照品溶液，在稀釋過程中加入內(nèi)標(biāo)品貯備液 適量，使所配制的系列對照品溶液中內(nèi)標(biāo)品的濃度均為〇.〇85mg/ml，制得系列丁苯酞對照 品溶液，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0047] 2.4系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)
[0048] 精密吸取對照品溶液、供試品溶液各?μL進(jìn)樣，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果 見圖1和圖2。內(nèi)標(biāo)品鄰苯二甲酸二乙酯、對照品丁苯酞和藁本內(nèi)酯的保留時間分別是 18.54min、19.94min和21.89min，由圖1可見，基于同種類化合物有相似的結(jié)構(gòu)，在色譜上出 峰的位置相近的原理，通過丁苯酞和藁本內(nèi)酯對照品確認(rèn)，確定了保留時間在19.94min-21.89min之間一段為苯酞內(nèi)酯類出峰時間，而且通過與相關(guān)文獻(xiàn)（曾志，謝潤乾，譚麗賢，張 濤.川芎水蒸氣蒸餾和超臨界C0 2提取物化學(xué)成分的GC-MS分析鑒別[J].應(yīng)用化學(xué)，2011，28 (8): 956-962)中苯酞內(nèi)酯的質(zhì)譜裂解碎片進(jìn)行比對，發(fā)現(xiàn)保留時間為20.40min和21.50min 的色譜峰分別為丁烯基苯酞和洋川芎內(nèi)酯A(如圖2所示），因此也證明了選擇丁苯酞和藁本 內(nèi)酯時間區(qū)間的合理性。
[0049] 2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
[0050] 精密吸取系列濃度的對照品溶液各ΙμL，采用2.1項(xiàng)下的色譜條件下測定，記錄內(nèi) 標(biāo)品和丁苯酞的峰面積。以丁苯酞與內(nèi)標(biāo)品峰面積比值y為縱坐標(biāo)，丁苯酞濃度X為橫坐標(biāo)， 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y=11.76x-0.172(R = 0.9990，n = 7)，方程表明丁苯酞在0.0064~ 1.7152mg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
[0051 ] 2.6相對校正因子確定
[0052]取丁苯酞標(biāo)準(zhǔn)曲線中丁苯酞峰面積、丁苯酞濃度、內(nèi)標(biāo)品峰面積和內(nèi)標(biāo)品濃度，按 公式fis = fi/fs= (CiXAs)/(CsXAi)(其中i為丁苯酞，S為內(nèi)標(biāo)品，C為濃度，A為峰面積)計算 丁苯酞的相對校正因子，fis為1 .〇436(n = 7)。
[0053] 2.7精密度試驗(yàn)
[0054]精密吸取供試品溶液ΙμL，連續(xù)進(jìn)樣5次和每日進(jìn)樣1次，連續(xù)5日，分別記錄內(nèi)標(biāo)品 鄰苯二甲酸二乙酯、對照品丁苯酞和藁本內(nèi)酯之間所有組分的峰面積，總苯酞內(nèi)酯的日內(nèi)、 日間RSD為2.6%和3.1%。
[0055] 2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)
[0056] 精密吸取按"2.3"項(xiàng)下供試品溶液配制方法制備的供試品溶液?μL，于配制后的0、 1、 2、4、6、8小時測定內(nèi)標(biāo)品鄰苯二甲酸二乙酯、對照品丁苯酞和藁本內(nèi)酯之間所有組分的 峰面積，計算總苯酞內(nèi)酯RSD為2.4 %。
[0057] 2.9重復(fù)性試驗(yàn)
[0058]取同一批川芎揮發(fā)油，按"2.3"項(xiàng)下供試品溶液配制方法分別制備6個供試品溶 液，平行測定內(nèi)標(biāo)品鄰苯二甲酸二乙酯、對照品丁苯酞和藁本內(nèi)酯之間所有組分的峰面積， 計算總苯酞內(nèi)酯RSD為2.2 %。
[0059] 2.10加樣回收率試驗(yàn)
[0060] 取已知總苯酞內(nèi)酯含量的川芎揮發(fā)油，分別加入不同濃度的丁苯酞標(biāo)準(zhǔn)品溶液適 量，按"2.3"項(xiàng)下供試品溶液配制方法制備供試品溶液9份，測定總苯酞內(nèi)酯含量，計算加樣 回收率，結(jié)果見表1。
[0061] 表1加樣回收率結(jié)果(n = 9)
[0062]
[C
[0064] 3、川芎揮發(fā)油中總苯酞內(nèi)酯含量測定
[0065] 分別取3批川考藥材樣品，按"2.2"項(xiàng)下提取方法得川考揮發(fā)油，再按"2.3"項(xiàng)下供 試品溶液配制方法制備供試品溶液。精密吸取供試品溶液?μL，在"2. Γ項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣， 記錄內(nèi)標(biāo)品鄰苯二甲酸二乙酯、對照品丁苯酞和藁本內(nèi)酯之間所有組分的峰面積。按公式 Ct = fisXCsXAt/As求得總苯酞內(nèi)酯濃度，其中f is為丁苯酞相對校正因子1.0436，Ct為總苯 酞內(nèi)酯濃度，At為丁苯酞和藁本內(nèi)酯之間所有組分的峰面積之和，結(jié)果見表2。
[0066] 表2測定川；揮發(fā)油中總苯酞內(nèi)酯的含量(n = 3)
[0067]
[0068] 以上已對本發(fā)明創(chuàng)造的較佳實(shí)施例進(jìn)行了具體說明，但本發(fā)明創(chuàng)造并不限于所述 實(shí)施例，熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不違背本發(fā)明創(chuàng)造精神的前提下還可作出種種的等同的 變型或替換，這些等同的變型或替換均包含在本申請權(quán)利要求所限定的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種川芎揮發(fā)油中總苯酞內(nèi)酯的質(zhì)量控制方法，包括： 以鄰苯二甲酸二乙酯為內(nèi)標(biāo)品，以丁苯酞和藁本內(nèi)酯為對照品，采用氣相色譜GC-質(zhì)譜 MS分離分析法，分別測定被測樣品中內(nèi)標(biāo)品的峰面積As以及丁苯酞和藁本內(nèi)酯之間所有組 分的峰面積之和A t，根據(jù)內(nèi)標(biāo)的濃度匕，用丁苯酞相對校正因子fls按下述公式計算被測成 分總苯酞內(nèi)酯濃度C t: Ct = fis XCS XAt/As 其中，丁苯酞相對校正因子fls=l.0436,丁苯酞相對校正因子fls按下式計算得到： fis=(CiXAs)/(CsXAi) 式中，G為丁苯酞的濃度，仏為丁苯酞的峰面積。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種川芎揮發(fā)油中總苯酞內(nèi)酯的質(zhì)量控制方法，其特征在于： 所述氣相色譜的條件為：1)載氣為高純氦氣;2)流速為1.0ml/min; 3)程序升溫:起始溫 度60°C，以6°C/min的速度升溫至170°C，然后以1.5°C/min的速度升溫至180°C，最后以25 °C/min的速度升溫至250°C，保持2min; 4)進(jìn)樣口溫度250°C，檢測器溫度280°C，分流比30: 1，進(jìn)樣量Ι.ΟμΙ; 所述質(zhì)譜的條件為:ΕΙ離子源，溫度230°C，電子能量70eV，電子倍增器高壓1100V，溶劑 不延遲。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種川芎揮發(fā)油中總苯酞內(nèi)酯的質(zhì)量控制方法，其特征在于： 所述內(nèi)標(biāo)品、對照品和被測樣品的溶液配制具體如下： (1) 內(nèi)標(biāo)品貯備液:取鄰苯二甲酸二乙酯，無水乙醇稀釋成濃度為2.85mg/ml的溶液，置 4°C冰箱保存，備用； (2) 對照品貯備液： a. 取丁苯酞，無水乙醇稀釋成濃度為10.72mg/ml的溶液，置4°C冰箱保存，作為對照品 貯備液A; b. 取藁本內(nèi)酯，無水乙醇稀釋成濃度為1.75mg/ml的溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配，作為對照品貯備 液B; (3) 對照品溶液:將對照品貯備液A、對照品貯備液B和內(nèi)標(biāo)品貯備液混合，用無水乙醇 稀釋定容，制得對照品溶液;所述對照品溶液中，丁苯酞、藁本內(nèi)酯和內(nèi)標(biāo)品的濃度分別為 0·2148mg/ml、0·70mg/ml和0·085mg/ml; (4) 被測樣品溶液:稱取川芎揮發(fā)油O.Olg，加無水乙醇稀釋定容至lml，搖勻，量取100μ 1，加入30μ1內(nèi)標(biāo)品貯備液，用無水乙醇稀釋定容至lml棕色量瓶中，搖勻。
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥質(zhì)量控制方法技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種川芎揮發(fā)油中總苯酞內(nèi)酯的質(zhì)量控制方法。該方法以鄰苯二甲酸二乙酯為內(nèi)標(biāo)品，以丁苯酞和藁本內(nèi)酯為對照品，采用氣相色譜GC-質(zhì)譜MS分離分析法，分別測定被測樣品中內(nèi)標(biāo)品的峰面積As以及丁苯酞和藁本內(nèi)酯之間所有組分的峰面積之和At，根據(jù)內(nèi)標(biāo)的濃度Cs,用丁苯酞相對校正因子fis按下述公式計算被測成分總苯酞內(nèi)酯濃度Ct：Ct＝fis×Cs×At/As，其中，丁苯酞相對校正因子fis＝1.0436。本發(fā)明的質(zhì)量控制方法準(zhǔn)確度、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性等均滿足含量測定要求，有較強(qiáng)的實(shí)際操作性，為川芎揮發(fā)油的質(zhì)量控制提供了一種新思路。
【IPC分類】G01N30/06, G01N30/02
【公開號】CN105651889
【申請?zhí)枴?br>【發(fā)明人】宋洪杰, 王曉君
【申請人】中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年1月12日