°C~45 °C之間。
[0035] 實(shí)施例2、5_烯-去甲斑蝥素單酸芐酯3的制備:
[0036] 稱取5g原料2溶于40ml二氯甲烷中，形成懸浮液。然后向懸浮液中逐滴加入苯甲醇 4.7ml，以及DMAP 366mg.室溫下攪拌3天，旋蒸除去溶劑，得到5，6-雙脫氫去甲斑蝥素單甲 酯2粗產(chǎn)品。將得到的粗產(chǎn)品溶解于25ml二氯甲烷中，用7ml的1N鹽酸洗滌一次，留下有機(jī) 相，再用l〇ml飽和食鹽水洗滌一次，留下有機(jī)相，加入適量無(wú)水MgS0 4干燥15-30分鐘，抽濾， 濾餅用二氯甲烷沖洗2-3次，留下濾液，將濾液旋蒸，得到5-烯-去甲斑蝥素單酸芐酯3的白 色固體（4.08 8)，收率為50%。1顯]\?(〇15〇-(16):312.43(8，1!〇,7.30-7.35(111，5!〇,7.38(111， 5H)，6.43((1, J = 4Hz，2H) ,4.92-5.10(m，4H); 13CNMR(DMS〇-d6) :δ173·07,171.93,137.15， 136.97,128.79,128.40,80.49,80.16,66.31,47.14,46.41.
[0037] 實(shí)施例3.喜樹堿(2-芐氧羰基-5-烯)去甲斑蝥素酸酯4的制備
[0038]
[0039] 往反應(yīng)瓶中加入喜樹堿(60mg，0.17mmol)和10ml二氯甲燒，然后依次加入5-稀-去 甲斑蝥素單酸芐酯（3,93.211^，0.34111111〇1，26911.)30(：1(161.311^，0.84111111〇1)以及01^? (13.4mg，0.1 lmmol)。反應(yīng)液加熱回流24小時(shí)。加入二氯甲烷(30ml)稀釋反應(yīng)液，依次用水、 飽和碳酸鈉溶液和飽和食鹽水洗滌。有機(jī)相用無(wú)水MgS(k干燥。溶劑旋干后，剩余物柱層析 純化得到一黃色固體的偶聯(lián)產(chǎn)物(化合物4，73.5mg)，收率71.6 %。Rf = 0.44 (DCM/MeOH = 95/5).1HNMR(CDCl3)：58.39(s,lH),8.20(d,J = 8Hz,lH),7.94(d,J = 8Hz,lH) ,7.84(d,J = 8Hz,lH),7.81(s,lH),7.67(t ,J = 8Hz,lH),7.38(m,5H),7.18(s,lH),6.99(d ,J = 4Hz,lH), 5.71(d,J = 8Hz,lH) ,5.42(d,J = 8Hz,lH) ,5.27(d,J=12Hz,lH) ,2.18-2.34(m,2H) ,1.01 (t，J = 8Hz，3H)，0.87-0.88(m，4H) .13C匪R(CDC13) :δ165·84，163·27，162·53，156·27， 151.16,147.82,145.41,144.22,134.38,133.94,131.22,130.19,129.61,128.43,127.66， 127.57,127.39,127.17,127.16,127.07,119.26,108.97,94.74,66.31,66.12,48.95， 36.07,30.81,28.68,21.67,13.40,6.58.
[0040] 實(shí)施例5、新型喜樹堿衍生物的活性測(cè)試
[0041 ]細(xì)胞株和溶劑
[0042] 人肝癌細(xì)胞HEPG2;
[0043] 人胃癌細(xì)胞BGC803;
[0044] 人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480;
[0045] 細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清的RPMI 1640中培養(yǎng)基；
[0046] 溶劑:二甲亞砜(簡(jiǎn)稱為DMS0)。
[0047] CCK-8染色法檢測(cè)細(xì)胞抗腫瘤活性實(shí)施方案
[0048] 選用待測(cè)腫瘤活細(xì)胞比例達(dá)90 %以上的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)采用 EnoGeneCell?Counting Kit-8(簡(jiǎn)稱為CCK-8)細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒。細(xì)胞消化、計(jì)數(shù)、制成 濃度為1 X 105個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，96孔板中每孔加入100yL細(xì)胞懸液(每孔1 X 104個(gè)細(xì)胞）； 96孔板置于37°C，5%⑶2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí);每孔加入100yL相應(yīng)的含藥物的培養(yǎng)基，作 用濃度為50yMol/L(即：微摩爾/升），同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組，溶媒對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組（陽(yáng)性 對(duì)照分別選用斑蝥素和喜樹堿），每組5復(fù)孔;96孔板置于37°C，5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí) 后;每孔加入10yL CCK-8溶液，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育4小時(shí)，用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的 吸光值(簡(jiǎn)稱0D值），計(jì)算各個(gè)化合物對(duì)人肝癌細(xì)胞HEPG2、人胃癌細(xì)胞BGC803和結(jié)腸癌細(xì)胞 SW480的抑制率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果詳見表1-3。
[0049]表1:對(duì)人肝癌細(xì)胞HEPG2的體外增殖活性的抑制率 [0050]
[00511表2:對(duì)人胃癌細(xì)胞BGC803的體外增殖活性的抑制率
[0052]
[0053]表3:對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480的體外增殖活性的抑制率
[0054]
[0055]~表1-3實(shí)驗(yàn)結(jié)果看出，本發(fā)明化合物
4具有很好體外抗腫瘤活性，其50yMol/L作用 濃度對(duì)于人胃癌細(xì)胞BGC803和結(jié)腸癌細(xì)胞SW480的體外抑制率高達(dá)70%以上，與陽(yáng)性對(duì)照 藥物喜樹堿和斑蝥素的抑制活性相當(dāng)；而對(duì)于人肝癌細(xì)胞HEPG2,也有一定的抑制活性。
[0056]此外，相對(duì)于陽(yáng)性對(duì)照藥品喜樹堿和斑蝥素，由于引入帶氧橋環(huán)的去甲斑蝥素類 似結(jié)構(gòu)，其對(duì)于酸較為敏感，易于水解，從而可增強(qiáng)藥代動(dòng)力學(xué)效力。因此，化合物4是一種 適合的抗腫瘤候選藥物，尤其是作為抗胃癌、抗結(jié)腸癌及抗肝癌的候選藥物，最優(yōu)選是作為 抗胃癌和抗結(jié)腸癌的候選藥物。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 喜樹堿-20位醋衍生物，其結(jié)構(gòu)式如式4所示，2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的喜樹堿-20位醋衍生物4的合成方法，包括：1 )、側(cè)鏈化合物3與 喜樹堿在有機(jī)溶劑中，在禪合劑及有機(jī)堿催化劑作用下反應(yīng)得到偶聯(lián)產(chǎn)物4,反應(yīng)式見W 下：3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的合成方法，其特征在于，步驟1)所述的禪合劑選自1-(3-二甲 氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽或二環(huán)己基碳二亞胺。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的合成方法，其特征在于，步驟1)所述的所述有機(jī)堿選自=乙 胺、二異丙基胺或4-二甲氨基化晚。5. 根據(jù)權(quán)利要求2中所述的用于合成喜樹堿-20位醋衍生物4的側(cè)鏈化合物3。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的側(cè)鏈化合物3的制備方法，包括:a)、W巧喃為原料，與化合物1 在有機(jī)溶劑中反應(yīng)得到化合物2，b)、化合物2在有機(jī)溶劑中與苯甲醇反應(yīng)得到化合物3,合 成路線見W下：7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的喜樹堿-20位醋衍生物4用于制備抗腫瘤藥物的用途。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于，所述腫瘤包括胃癌、結(jié)腸癌或肝癌。9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于，所述腫瘤包括胃癌或結(jié)腸癌。
【專利摘要】本發(fā)明提供了結(jié)構(gòu)式如4所示的喜樹堿-20位酯衍生物、其制備方法及其抗腫瘤應(yīng)用?；钚詼y(cè)試證明，本發(fā)明設(shè)計(jì)并合成得到的如4所示喜樹堿-20位酯衍生物是一種適合的抗腫瘤候選藥物，尤其是作為抗肝癌、抗胃癌以及抗結(jié)腸癌的候選藥物。相對(duì)于陽(yáng)性對(duì)照藥品喜樹堿和斑蝥素，提高了水溶解性，穩(wěn)定性；對(duì)于酸較為敏感，易于水解。此外，本發(fā)明的喜樹堿去甲斑蝥素酯衍生物的合成方法，原料易得，合成路線收率高，非常易于操作實(shí)施。
【IPC分類】A61K31/4745, A61P35/00, C07D519/00
【公開號(hào)】CN105646546
【申請(qǐng)?zhí)枴?br>【發(fā)明人】王先恒, 趙長(zhǎng)闊, 楊福紅, 賈佳, 吳昆侖
【申請(qǐng)人】遵義醫(yī)學(xué)院
【公開日】2016年6月8日
【申請(qǐng)日】2015年12月29日