除正丁醇后，得到正丁醇萃取物，即為所述野芋提取物。
[0046] 實施例8
[0047] 本發(fā)明所述野芋提取物的一種實施例，所述野芋提取物是由以下方法制備而成： [0048] 取野芋藥材，用體積濃度為80 %的乙醇水溶液在60 °C提取2小時，提取3次，得到提 取液，其中乙醇水溶液的體積用量與野芋的重量之比為2ml: lg，減壓濃縮去除提取液中的 乙醇，得到浸膏，將浸膏用正丁醇萃取，萃取3次，正丁醇的體積用量與浸膏的重量之比為 lml: lg，將萃取液減壓濃縮去除正丁醇后，得到正丁醇萃取物，即為所述野芋提取物。
[0049] 實施例9
[0050]本發(fā)明所述野芋提取物的一種實施例，所述野芋提取物是由以下方法制備而成： [00511取野芋藥材，用體積濃度為60 %的乙醇水溶液在80 °C提取2小時，提取3次，得到提 取液，其中乙醇水溶液的體積用量與野芋的重量之比為6ml: lg，減壓濃縮去除提取液中的 乙醇，得到浸膏，將浸膏用正丁醇萃取，萃取3次，正丁醇的體積用量與浸膏的重量之比為 4ml: lg，將萃取液減壓濃縮去除正丁醇后，得到正丁醇萃取物，即為所述野芋提取物。
[0052] 實施例10
[0053]本發(fā)明所述中藥組合物的一種實施例，所述中藥組合物的制備方法包括以下步 驟：
[0054] (1)稱取野芋、玄參、南沙參和黨參，所述野芋、玄參、南沙參和黨參的重量比為1: 1: 1:1，用體積濃度為45 %的乙醇水溶液在60°C下回流提取，其中所述乙醇水溶液的體積用 量與野芋、玄參、南沙參和黨參的總重量之比為IOml: Ig，得到提取液；
[0055] (2)去除提取液中的乙醇和水，得到浸膏；
[0056] (3)取步驟(2)中獲得的浸膏，用正丁醇萃取，其中所述正丁醇的體積用量與浸膏 的重量之比為8ml: Ig，得到正丁醇萃取液，去除正丁醇萃取液中的正丁醇，得到所述中藥組 合物。
[0057] 實施例11
[0058]本發(fā)明所述中藥組合物的一種實施例，所述中藥組合物的制備方法包括以下步 驟：
[0059] (1)稱取野芋、玄參、南沙參和黨參，所述野芋、玄參、南沙參和黨參的重量比為2: 1: 1:1，用體積濃度為80 %的乙醇水溶液在80°C下回流提取，其中所述乙醇水溶液的體積用 量與野芋、玄參、南沙參和黨參的總重量之比為6ml: Ig，得到提取液；
[0060] (2)去除提取液中的乙醇和水，得到浸膏；
[0061] (3)取步驟(2)中獲得的浸膏，用正丁醇萃取，其中所述正丁醇的體積用量與浸膏 的重量之比為4ml: Ig，得到正丁醇萃取液，去除正丁醇萃取液中的正丁醇，得到所述中藥組 合物。
[0062] 實施例12
[0063] 本發(fā)明所述中藥組合物的一種實施例，所述中藥組合物的制備方法包括以下步 驟：
[0064] (1)稱取野芋、玄參、南沙參和黨參，所述野芋、玄參、南沙參和黨參的重量比為5: 2:3 :2，用體積濃度為60 %的乙醇水溶液在100 °C下回流提取，其中所述乙醇水溶液的體積 用量與野芋、玄參、南沙參和黨參的總重量之比為2ml: lg，得到提取液；
[0065] (2)去除提取液中的乙醇和水，得到浸膏；
[0066] (3)取步驟(2)中獲得的浸膏，用正丁醇萃取，其中所述正丁醇的體積用量與浸膏 的重量之比為lml: Ig，得到正丁醇萃取液，去除正丁醇萃取液中的正丁醇，得到所述中藥組 合物。
[0067]實施例13:本發(fā)明所述野芋提取物的抗腫瘤效果
[0068]以相應(yīng)溶劑作陰性對照，選擇乳腺癌細胞MCF-7、胃癌細胞SGC-7901，用MTT法對本 發(fā)明所述野芋提取物進行了體外抗腫瘤活性測試，具體實驗操作如下：取生長對數(shù)期的癌 細胞加入〇. 25%胰蛋白酶消化液，消化使貼壁細胞脫落，以含10%胎牛血清的RPMI 1640為 培養(yǎng)液稀釋為2 X IO4~3 X IO4個/mL細胞懸液后接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔180yL;于37°C， 5%C02,細胞培養(yǎng)箱中孵育至細胞貼壁(約24h)，加入濃度為500yg · mL'SOyg · mL'Syg · mL-'OJyg · mL-'O.OSyg · mL-1的本發(fā)明實施例1-9所述野芋提取物，每孔180yL(經(jīng)PBS緩 沖液稀釋使DMSO含量低于1% );培養(yǎng)48h后將20μ!7孔MTT的PBS溶液(質(zhì)量濃度為0.05g · L 一1)加入96孔板中，37 °C、5 % CO2細胞培養(yǎng)箱反應(yīng)4h。吸去上清液，加入DMSOl50μ!7孔，平板搖 床上振搖lOmin。用酶聯(lián)免疫檢測儀在波長為493nm處測定每孔的吸光度(A)，根據(jù)所得的A 計算抑制率。細胞抑制率的計算公式為:細胞抑制率=(陰性對照組A-測試物組A)/陰性對 照組A X 100 %，IC5q值通過SPSS13.0軟件計算得到，其結(jié)果為，實施例1-3野芋提取物、實施 例4-6野芋提取物（乙酸乙酯部位）、實施例7-9野芋提取物(正丁醇部位)對SGC-7901的IC50 分別為：18 · 5mg/L、95 · 8mg/L和218 · 6mg/L。實施例1-3野芋提取物、實施例4-6野芋提取物 (乙酸乙酯部位）、實施例7-9野芋提取物(正丁醇部位)對MCF-7的IC50分別為:230.1mg/L、 91.5mg/L和226.3mg/L。說明本發(fā)明所述野芋提取物具有良好的抗腫瘤作用。
[0069] 實施例14
[0070] 本實施例研究了本發(fā)明所述中藥組合物對小鼠移植性腫瘤S180實體瘤生長的抑 制作用、瘤重抑制率及其對免疫器官的影響，以進一步驗證本發(fā)明所述中藥組合物的抗腫 瘤作用。同時通過觀察顯微鏡下瘤細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)，初步探討其抑瘤機制。
[0071] 1、實驗材料
[0072] 1.1試驗藥物
[0073]將本發(fā)明實施例10-12所述中藥組合物用含吐溫-80的蒸餾水配成0.33g/ml、 0.66g/ml、1.33g/ml濃度的口服液，供實驗用，其中將所述野芋、玄參、南沙參和黨參的混合 物稱為生藥。
[0074] 1.2試劑與器材
[0075] 注射用環(huán)磷酰胺(CTX)，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司產(chǎn)品，批號02111222,200mg/ 支;氯化鈉注射液，浙江康樂藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號03040503;吐溫80，上海申宇醫(yī)藥化工 有限公司產(chǎn)品，批號960918;其他試劑均為市售分析純和化學(xué)純；電子天平BSIIOS型，北京 塞多利斯天平有限公司；恒溫磁力攪拌器$23-2型，上海司樂儀器廠;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀ZVQ-85A上 海醫(yī)械專機廠；切片機（820-Reichert Histo STATROTARY MIXR0T0ME) ,OLYMPUS生物顯微 鏡BX-41型，日本;醫(yī)用凈化臺，蘇州凈化設(shè)備公司。
[0076] 1.3受試動物
[0077]健康ICR小鼠，共130只，體重20 ± 2g，7周齡，雌雄兼用，同一次實驗選用的性別相 同，由浙江省醫(yī)科院實驗動物中心提供，浙醫(yī)動字20030530號。飼養(yǎng)溫度15-20Γ，相對濕度 40-60%，12小時明12小時暗，以清潔固體飼料飼養(yǎng)，自由飲水，實驗前飼養(yǎng)2天，以適應(yīng)飼養(yǎng) 環(huán)境。
[0078] 1.4瘤株
[0079]實體型移植肉瘤S180瘤源小鼠，購自浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所，擴種備用。
[0080] 2、方法與結(jié)果
[0081] 2.1體內(nèi)抑瘤實驗
[0082] 2.1.1瘤株接種
[0083]荷瘤小鼠模型復(fù)制參照文獻方法，以無菌操作從瘤源小鼠腹腔抽取S180瘤細胞 液，以預(yù)冷的無菌生理鹽水按1:4稀釋調(diào)整細胞數(shù)至3.5 X IO7個HiIT1，計活細胞>95 %，于健 康ICR小鼠右前肢腋窩皮下接種0.2ml/只，制成實體型荷瘤小鼠模型（整個過程30min內(nèi)完 成)。
[0084] 2.1.2給藥與觀察
[0085] 分兩批實驗，于接種24h后將小鼠按體重隨機分成5組(第1批50只）和6組(第2批70 只），每組10只（第1批)和12只（第2批），灌胃給藥1次/d，連續(xù)7d，每日觀察小鼠存活及腫瘤 生長情況。上述制備的中藥組合物低、中及高劑量分別按4g生藥/kg、8g生藥/kg、16g生藥/ kg給藥，陽性對照以20mg/kg劑量的環(huán)磷酰胺給藥，陰性對照給以等量的生理鹽水，聯(lián)合用 藥組間隔Id分別給予高劑量上述制備的中藥組合物及20mg/kg劑量的環(huán)磷酰胺，停藥次日 斷椎處死，稱體重，解剖剝離皮下瘤體，觀察瘤體形態(tài)及出血壞死情況，精密稱瘤重和測瘤 周徑，對照組平均瘤重Ig以上可進行結(jié)果分析，按下式計算抑瘤率。抑瘤率2 30%即判斷為 有一定抗腫瘤作用。同時剖取胸腺和脾臟，稱其重量，測量脾臟體積。
[0086] 抑瘤率（％ )=(對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/對照組平均瘤重X 100%
[0087] 脾臟(胸腺)指數(shù)=脾臟(胸腺)重量(mg)/體重(g)
[0088] 腫瘤或脾臟周徑=長+寬+高(mm)。
[0089] 2 · 1 · 3組