利用堿法提取技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于黃芪藥物提取技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及利用堿法提取技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝。
【背景技術(shù)】
[0002]黃芪為豆科植物的，味甘，性微溫，歸肺、脾經(jīng)，具有補氣升陽、益味固表、利尿消月中、生津養(yǎng)血、托毒排膿、斂瘡生肌等功效。黃芪總黃酮是黃芪生長過程中形成的次級代謝產(chǎn)物之一，具有多種生物學(xué)活性;近年來，食品安全和保健性食品備受人們的青睞，黃芪總黃酮也逐漸成為被研究的熱點。黃芪的化學(xué)成分分析表明主要含有黃酮類和皂甙類，而研究表明總黃酮對人體生理代謝有益的調(diào)節(jié)功能，為其開發(fā)利用展示了廣闊前景。隨著社會壓力的增加，心腦血管疾病的急劇爆發(fā)，而黃酮有抑制腫瘤，抗炎消腫，降低血脂等功能，因此逐漸被人們所重視和研究。
[0003]目前水提法是提取中藥黃酮的傳統(tǒng)方法，水提法方法簡單，操作簡便易行，但是能耗較大，提取方法不穩(wěn)定，提取得到的黃酮純度不高，多含有蛋白質(zhì)、核酸、淀粉等雜質(zhì)。本發(fā)明為了解決上述的水提法提取到的黃芪黃酮得率不高、提取能耗大問題，根據(jù)黃芪總黃酮中大部分有效成分的理化特性及為了節(jié)約成本，引入澄清劑除雜過程和多級分離吸附作用，有效除去藥物成分中的雜質(zhì)，降低提取過程因需要高溫過程產(chǎn)生的能耗，并使提取技術(shù)工藝流程趨于穩(wěn)定，方法重復(fù)性好。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有藥用提取黃芪總黃酮純度、提取率低等缺點，提供一種利用水提技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝。
[0005]本發(fā)明的實現(xiàn)技術(shù)方案為，一種利用堿法提取技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝，以黃芪為原料，其特征在于，該方法步驟包括:
1)粗提液獲取:干燥黃芪根原料Ikg，清洗、干燥、粉碎后，加入2?3倍堿解液，40-50V條件下恒溫浸泡2?3小時后，重復(fù)提取3次，合并堿解液液靜置放涼，得到粗提液；
2)濃縮蒸發(fā):在步驟I)得到的粗提液中加入加入天然植物提取液澄清劑KBT-ZTC，加入量為5?10g/L，靜置20~30min后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮粗提液，得到浸膏粗品；
3)溶解除雜:在步驟2)得到的浸膏粗品中加入乙醇，攪拌浸膏進行溶解，靜置沉淀，離心去除上清液得到沉淀物，沉淀物再加入乙醇進行攪拌后靜置，離心收集沉淀物；
4)大孔吸附樹脂柱分離純化:將步驟3)得到的沉淀物上大孔吸附樹脂柱，用乙醇水溶液進行洗脫，收集洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物I;
5)硅膠柱分離純化:將步驟4)烘干得到的粗提物I用乙醇溶解后上硅膠柱，用含甲醇的氯仿溶液進行洗脫，收集黃綠色洗脫液并風(fēng)干，得到粗提物Π ;
6)用ODS開放柱分離純化:將步驟5)得到的粗提物Π用乙醇溶解后上ODS開放柱，用乙醇水溶液進行洗脫，收集黃綠色洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物m; 7)用中壓柱分離純化:將步驟6)得到的粗提物m上中壓柱，用乙醇水溶液洗脫，從出峰開始收集洗脫液，至峰下降后停止收集，洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物IV;
8)過濾結(jié)晶:將步驟7)得到的粗提物IV用甲醇溶解，用濾膜過濾后緩慢加入水進行結(jié)晶，邊加入邊攪拌至出現(xiàn)黃色絮狀物時停止攪拌，靜置20-50min，濾紙過濾，將留在濾紙上的黃色藥物揮干，收集揮干后的黃色藥物既為黃芪總黃酮。
[0006]作為本發(fā)明的進一步限定條件，所述的清洗為用清水清洗2?3次;所述的粉碎為黃芪粉碎至50?100目。
[0007]作為本發(fā)明的進一步限定條件，所述的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮為將粗提液蒸發(fā)至水比重d為1.0?1.50的浸膏。
[0008]作為本發(fā)明的進一步限定條件，所述的步驟3)中乙醇的加入量為浸膏的2?5倍體積。
[0009]作為本發(fā)明的進一步限定條件，所述的堿解液為碳酸鈉、亞硫酸氫鈉、氯化鈣的混合溶液，碳酸鈉、亞硫酸氫鈉、氯化鈣在浸取溶液中的含量分別為15?30%、15?30%、1?40%。
[0010]作為本發(fā)明的進一步限定條件，所述的天然植物提取液澄清劑KBT-ZTC為由科立爾生物科技有限公司生產(chǎn)的澄清劑。
[0011]作為本發(fā)明的進一步限定，所述的步驟5)中含甲醇的氯仿溶液為含1~5%甲醇的氯仿溶液。
[0012]作為本發(fā)明的進一步限定，所述的步驟4)、步驟6)、步驟7)中的乙醇水溶液為60?80%的乙醇水溶液。
[0013]作為本發(fā)明的進一步限定，所述的步驟9)中的濾膜孔徑為0.35?0.5μπι。
[0014]本發(fā)明取得了以下實質(zhì)性進步和突出效果:
以藥用黃芪開始，經(jīng)過一系列工序提取優(yōu)質(zhì)黃芪總黃酮，在加堿提提醇沉法的基礎(chǔ)上，引入植物中藥澄清技術(shù)實現(xiàn)高品質(zhì)黃芪總黃酮的提取純化，引入的澄清除雜過程能夠高效去除黃芪總黃酮中的蛋白質(zhì)、核酸、淀粉等大分子雜質(zhì)，并結(jié)合大孔吸附樹脂柱、硅膠柱、ODS開放柱、中壓柱分離純化技術(shù)，提高黃芪總黃酮中有效成分提取產(chǎn)率，改進后的方法黃芪總黃酮提取率為1.3?1.9mg/g以上，得到的黃芪總黃酮可用于獸醫(yī)臨床中對動物免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗菌方面等藥物預(yù)防治療。
[0015]本發(fā)明黃芪總黃酮按照一定的比例拌入動物的喂養(yǎng)飼料中，一日三餐中喂養(yǎng)一餐，可以顯著提高動物的免疫力，發(fā)病率從最初的32%降低到了 20.5%，實現(xiàn)動物的健康飼養(yǎng)，減少抗生素、激素藥物的治療，實現(xiàn)生態(tài)飼養(yǎng)，提高畜牧養(yǎng)殖經(jīng)濟價值。
【具體實施方式】
[0016]以下實施例描述本發(fā)明利用堿法提取技術(shù)生產(chǎn)黃芪總黃酮的工藝，這些描述并不是對本
【發(fā)明內(nèi)容】
作進一步的限定，以下實施例中所用到的所有試劑均可通過商業(yè)手段購買。
[0017]實施例1
本實施例以干燥黃芪為原料，制備方法步驟包括:
I)粗提液獲取:干燥黃芪根原料I kg，清洗、干燥、粉碎后加入5倍水(清洗為用清水清洗3次，粉碎為黃芪粉碎至50目)，加入2倍堿解液，50 °(:條件下恒溫浸泡2小時后濾出堿解液，重復(fù)提取3次，合并提取液靜置放涼，得到粗提液;堿解液為碳酸鈉、亞硫酸氫鈉、氯化鈣的混合溶液，碳酸鈉、亞硫酸氫鈉、氯化鈣在浸取溶液中的含量分別為30%、15%、40%。
[0018]2)濃縮蒸發(fā):在步驟I)得到的粗提液中加入由科立爾生物科技有限公司生產(chǎn)的天然植物提取液澄清劑KBT-ZTC，加入量為5g/L，靜置30min后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮粗提液，至水比重d為1.50的浸膏，得到浸膏粗品；
3)溶解除雜:在步驟2)得到的浸膏粗品中加入乙醇，乙醇的加入量為浸膏的5倍體積，攪拌浸膏進行溶解，靜置沉淀，離心去除上清液得到沉淀物，沉淀物再加入乙醇進行攪拌后靜置，離心收集沉淀物，得純品黃芪總黃酮；
4)大孔吸附樹脂柱分離純化:將步驟3)得到的沉淀物上大孔吸附樹脂柱，用乙醇水溶液進行洗脫，收集洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物I;
5)硅膠柱分離純化:將步驟4)烘干得到的粗提物I用乙醇溶解后上硅膠柱，用含甲醇的氯仿溶液為含15%甲醇的氯仿溶液進行洗脫，收集黃綠色洗脫液并風(fēng)干，得到粗提物Π ;
6)用ODS開放柱分離純化:將步驟5)得到的粗提物Π用乙醇溶解后上ODS開放柱，用乙醇水溶液進行洗脫，收集黃綠色洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物m;
7)用中壓柱分離純化:將步驟6)得到的粗提物m上中壓柱，用乙醇水溶液洗脫，從出峰開始收集洗脫液，至峰下降后停止收集，洗脫液并減壓濃縮烘干，得到粗提物IV;
8)f過濾結(jié)晶:將步驟7)得到的粗提物IV用甲醇溶解，用濾膜過濾后緩慢加入水進行結(jié)晶，邊加入邊攪拌至出現(xiàn)黃色絮狀物時停止攪拌，靜置20min，濾紙過濾，將留在濾紙上的黃色藥物揮干，收集揮干后的黃色藥物既為黃芪總黃酮。
[0019]步驟4)、步驟6)、步驟7)中的乙醇水溶液為60%的乙醇水溶液，步驟8)中的濾膜孔徑為 0.4μηι。
[0020]本是實施例黃芪總黃酮的提取率為1.3mg/go
[0021]實施例2
I)粗提液獲取:干燥黃芪根原料Ikg，清洗、干燥、粉碎后加入10倍水(清洗為用清水清洗2次，粉碎為黃芪粉碎至100目)，加入3倍堿解液，40°C條件下恒溫浸泡3小時后濾出堿解液，重復(fù)提取3次，合并提取液靜置放涼，得到粗提液;堿解液為碳酸鈉、亞硫酸氫鈉、氯化鈣的混合溶液，碳酸鈉、亞硫酸氫鈉、氯化鈣在浸取溶液中的含量分別為15%、30%、10%。
[0022]2)濃縮蒸發(fā):在步驟I)得到的粗提液中加入由科立爾生物科技有限公司生產(chǎn)的天然植物提取液澄清劑KBT-ZTC，加入量為10g/L，靜置20min后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮粗提液，至水比重d為1.0的浸膏，得到浸膏粗品；
3)溶解除雜:在步驟2)得到的浸膏粗品中加入乙醇，乙醇的加入量為浸膏的2倍體積，攪拌浸膏進行溶解，靜置沉淀，離心去除上清液得到沉淀物，沉淀物再加入乙醇進行攪拌后靜置，離心收集沉淀物；
4)大孔吸附樹脂柱