酒糟培養(yǎng)天麻蜜環(huán)菌生產(chǎn)種的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物的培養(yǎng)方法，具體涉及一種酒糟培養(yǎng)天麻蜜環(huán)菌生產(chǎn)種的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]天麻(Gastrodia elata)是我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥材，為蘭科Orchidaceae多年生草本植物，根狀莖肥厚，無(wú)綠葉，不能像一般綠色植物一樣通過(guò)根吸收土壤中的營(yíng)養(yǎng)，也不能通過(guò)光合作用合成自身所需要的物質(zhì)，在其生長(zhǎng)過(guò)程中，必需通過(guò)一種真菌一蜜環(huán)菌(Armillaria mellea)為其提供營(yíng)養(yǎng)。
[0003]蜜環(huán)菌屬于擔(dān)子菌綱、傘菌目、真菌屬的一種兼性寄生真菌，常生于枯木或木粧上，對(duì)木質(zhì)素和纖維素有較強(qiáng)的分解力，其菌絲和菌索可與天麻塊莖結(jié)合，為天麻提供生長(zhǎng)所需要的營(yíng)養(yǎng)。
[0004]蜜環(huán)菌以菌絲形式侵入天麻皮層細(xì)胞，一旦侵入，菌絲即被溶解、消化，其同化產(chǎn)物參與天麻的生物合成過(guò)程，通過(guò)天麻維管組織，為其生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)。蜜環(huán)菌侵染天麻營(yíng)養(yǎng)繁殖莖后利用菌絲結(jié)、菌絲流及大型細(xì)胞構(gòu)成天麻生長(zhǎng)期的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)給線。
[0005]種植天麻，可采用“三下窩”(菌材、蜜環(huán)菌、天麻種一起播種)或事先培養(yǎng)菌材兩種方式，在目前的生產(chǎn)中，以事先培養(yǎng)菌材的方式居多。但無(wú)論以那種方式種植天麻，均需要培養(yǎng)蜜環(huán)菌栽培種，即天麻栽培中直接用于生產(chǎn)的菌種;在天麻栽培過(guò)程中，蜜環(huán)菌生產(chǎn)種直接用于菌棒、菌枝的培養(yǎng)。
[0006]蜜環(huán)菌菌棒、菌枝的培養(yǎng)在天麻栽培中起著十分關(guān)鍵的作用，優(yōu)良的蜜環(huán)菌菌棒(枝)是天麻生產(chǎn)獲取高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)生產(chǎn)效果的重要保障。早期的天麻栽培是通過(guò)采挖野生的生長(zhǎng)有蜜環(huán)菌的樹(shù)粧或樹(shù)棒接種新鮮雜木樹(shù)樹(shù)棒(枝)的方法來(lái)獲取天麻栽培的材料，該法因受菌種數(shù)量的限制，難于開(kāi)展大規(guī)模的天麻栽培，且野生蜜環(huán)菌菌種質(zhì)量參差不齊，高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的生產(chǎn)效果難于得到保障。隨著微生物純培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用，人們通過(guò)野生蜜環(huán)菌分離獲得純培養(yǎng)菌株，經(jīng)過(guò)擴(kuò)繁后獲得大量的純菌種，大規(guī)模純菌種的生產(chǎn)可為規(guī)?；炻榉N植中菌材培養(yǎng)提供菌種來(lái)源。通過(guò)蜜環(huán)菌菌株篩選、定向培育并定期進(jìn)行復(fù)壯培養(yǎng)，可獲得并保持優(yōu)良生產(chǎn)性能的菌株，保障天麻優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)的生產(chǎn)效果。
[0007]可直接用于菌材培養(yǎng)的蜜環(huán)菌純菌種稱為生產(chǎn)種或栽培種，它是通過(guò)初級(jí)菌種(母種)擴(kuò)繁至二級(jí)菌種(原種)，再經(jīng)過(guò)一次擴(kuò)繁獲得的菌種，最初的蜜環(huán)菌生產(chǎn)種是以雜木肩為主料，再添加一定量的米糠或麥麩、玉米粉等材料按食用菌常規(guī)生產(chǎn)種制作方法制作而成，因雜木肩為主料制作的菌種菌絲長(zhǎng)勢(shì)弱、不致密，在菌材培養(yǎng)中不耐高溫、高濕等環(huán)境，接種后菌種很容易死亡，成功接種率低，沒(méi)有實(shí)用價(jià)值。隨著天麻栽培及蜜環(huán)菌菌種制作技術(shù)的發(fā)展，蜜環(huán)菌生產(chǎn)種質(zhì)量獲得了較大的改善，當(dāng)前大規(guī)模生產(chǎn)中一般以小的雜木短樹(shù)棍為主要原料通過(guò)裝瓶、滅菌、接種并通過(guò)一定時(shí)間的培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿瓶后作為生產(chǎn)種使用?，F(xiàn)有的雜木短樹(shù)棍蜜環(huán)菌生產(chǎn)種制作技術(shù)存在以下缺點(diǎn):(I)由于菌種的大規(guī)模生產(chǎn)需要大量的雜木材料，對(duì)森林和生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生一定的破壞作用；(2)因樹(shù)棍棱角尖銳，不能用塑料菌袋作容器物，必需以罐頭瓶、玻璃或聚乙(丙)烯專用菌種瓶作為盛裝容器，罐頭瓶或菌種瓶成本過(guò)高；(3)該技術(shù)需要砍材、斷料，在裝瓶過(guò)程中需要通過(guò)手工而不能進(jìn)行機(jī)械化操作，勞動(dòng)力成本高；(4)材料裝瓶后需要灌水，滅菌過(guò)程中因氣流運(yùn)動(dòng)容易沖翻料瓶，且瓶?jī)?nèi)水在高溫條件下容易膨脹溢出，容易將封口紙沖破，影響了制瓶成功率，再加上水溢出后，有機(jī)質(zhì)粘附在瓶口外壁，在后期培養(yǎng)過(guò)程中雜菌污染率高；(5)瓶裝菌種單瓶菌種量少，且菌棍作為獨(dú)立的接種單元，接種點(diǎn)位小，每平方米菌材用種量相對(duì)較大，常規(guī)每平米菌材培養(yǎng)需4-6瓶菌種，每瓶菌種市場(chǎng)價(jià)2.5元左右，因此，每平米需要10-15元的菌種，價(jià)格過(guò)高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的要解決和克服現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題及缺點(diǎn)，提供一種以酒糟為主要原料制作培養(yǎng)天麻蜜環(huán)菌生產(chǎn)種的方法，該方法采用酒糟顆粒為培養(yǎng)料，大大降低了生產(chǎn)成本，并且提高了蜜環(huán)菌菌種生產(chǎn)成品率及蜜環(huán)菌生長(zhǎng)速度。
[0009]本發(fā)明為酒糟培養(yǎng)天麻蜜環(huán)菌生產(chǎn)種的方法，包括以下步驟:
(1)配料:按重量份配比稱取原料:酒糟顆粒55?75份、米糠或麥麩23?43份、石膏I份、鹿糖I份；
(2)拌料:先將組分中的蔗糖和石膏充分混勻溶于水，再轉(zhuǎn)入酒糟中，充分混拌至勻，最后加入米糠，混勻后加入水至培養(yǎng)料中含水量達(dá)60%?80%，拌勻;或者直接將各組分混合攪拌至勻后加入水，加水至培養(yǎng)料中含水量達(dá)60%?80%，拌勻；
(3)裝袋:將拌勻后的培養(yǎng)料裝入聚乙烯或聚丙烯材料的料袋中；
(4)滅菌:將料袋置于101kPa 121°C保持1.5小時(shí);或者常壓下溫度100-105°(:下保持10-12小時(shí)；
(5)接種:從原種瓶里挖取指甲蓋大小蜜環(huán)菌菌種塊轉(zhuǎn)入料袋內(nèi)；
(6)培養(yǎng):將接種后的料袋轉(zhuǎn)移到避光的培養(yǎng)室于22?25°C溫度條件下培養(yǎng)至蜜環(huán)菌菌索長(zhǎng)滿料袋后即可。
[0010]優(yōu)選，步驟(I)中所述玉米酒糟和高粱酒糟均為新鮮無(wú)霉變的酒糟，酒糟可適當(dāng)敞開(kāi)揮發(fā)5-6 h，使其酒味降低。
[0011]步驟(I)中優(yōu)選，干原料的重量份配比為:玉米/高粱酒糟64?75份、米糠23?34份、蔗糖I份、石膏I份。最佳優(yōu)選，步驟(I)中原料的重量份配比為:玉米酒糟70份、米糠28份、蔗糖I份、石膏I份;高粱酒糟60份、米糠38份、蔗糖I份、石膏I份。
[0012]步驟(3)的優(yōu)選，料袋在袋口上還套有套環(huán)撐開(kāi)袋口。
[0013]步驟(2)中優(yōu)選的加水量為加入水至培養(yǎng)料中含水量達(dá)68%?72%。
[0014]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提高廢料利用率，降低了生產(chǎn)成本，提高了產(chǎn)品成品率，并且避免了使用大量木質(zhì)材料，從而保護(hù)了森林和生態(tài)環(huán)境。
【具體實(shí)施方式】
[0015]以下提供本發(fā)明的酒糟培養(yǎng)天麻蜜環(huán)菌生產(chǎn)種的方法一些具體實(shí)施例，以助于進(jìn)一步理解本發(fā)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅于這些實(shí)施例。以下實(shí)施例所用的酒糟是玉米或高粱釀酒后產(chǎn)生的酒糟，鋪開(kāi)冷卻3-5 ho
[0016]實(shí)施例1玉米酒糟蜜環(huán)菌生產(chǎn)種的制作方法
(I)稱料:按重量份配比取如下原料:玉米酒糟70份、米糠28份、蔗糖I份、石膏I份，所述酒糟和米糠新鮮無(wú)霉變。
[0017](2)拌料:先將組分中的玉米酒糟和米糠充分混勻，再澆入蔗糖石膏水，充分混拌至勻，最后加入自來(lái)水至培養(yǎng)料中使其含水量達(dá)80%，拌勻后放置2 h0
[0018](3)裝袋:將拌勻并悶放2 h后的培養(yǎng)料裝入12 cmX 25 cm聚乙烯或聚丙烯折角袋中，邊裝邊壓，至緊實(shí)，松緊需均勻，料裝至菌袋2/3長(zhǎng)即可，然后在培養(yǎng)料中插入一根直徑為2 cm的圓柱狀打孔棒，最后在菌袋口部套上套環(huán)支撐，并蓋上海綿透氣蓋。
[0019](4)滅菌:將料袋置于高壓滅菌鍋內(nèi)，121°C 101 kPa下保持1.5小時(shí);滅菌后自然冷卻至室溫。
[0020](5)接種:于超凈工作臺(tái)或經(jīng)殺菌后的接種箱內(nèi)接種，接種前用75%消毒酒精擦拭手、接種針，再將接種針置于酒精燈火焰上灼燒，冷卻后先用接種針挑出打孔棒，再?gòu)脑N瓶里挑取指甲蓋大小的蜜環(huán)菌菌種塊轉(zhuǎn)入料袋內(nèi)。
[0021](6)培養(yǎng):將接種后的料袋轉(zhuǎn)移到避光的培養(yǎng)室于25°C溫度條件下培養(yǎng)至蜜環(huán)菌菌索長(zhǎng)滿料袋后即可。
[0022]結(jié)果描述:接種后7天可見(jiàn)新生菌索從原種塊長(zhǎng)出，10天左右即能長(zhǎng)入培養(yǎng)料內(nèi)，隨后在菌索周圍生長(zhǎng)出白色菌絲，菌索密集，初期呈白色，35天以后先期生長(zhǎng)的菌索外表逐漸變?yōu)辄S白色，菌索韌。30天左右蜜環(huán)菌菌索即長(zhǎng)滿整個(gè)料袋。
[0023]實(shí)施例2高粱酒糟蜜環(huán)菌生產(chǎn)種的制作方法
(I)稱料:按重量份配比取如下原料:酒糟顆粒60份、麥麩38份、蔗糖I份、石膏I份;所述高粱酒糟為剛用高粱釀完酒后產(chǎn)出的酒糟，酒糟和米糠均新鮮無(wú)霉變。
[0024](2)拌料:將各組分轉(zhuǎn)入攪拌機(jī)中，開(kāi)機(jī)攪拌，至勻后加入水，加水量為至培養(yǎng)料中含水量達(dá)75%，拌勻。
[0025](3)裝袋:將拌勻后的培養(yǎng)料用手工或裝袋機(jī)裝入12 cmX25 cm聚乙烯或聚丙烯折角袋中，手工裝料邊裝邊壓，至緊實(shí)，松緊需均勻，料裝至菌袋2/3長(zhǎng)即可，然后在培養(yǎng)料中插入一根圓柱形打孔棒，最后在料袋口部套上套環(huán)以撐開(kāi)袋口，并蓋上無(wú)棉蓋。
[0026](4)滅菌:將料袋置于高壓滅菌鍋內(nèi)，121 0C 101 kPa下保持1.5小時(shí)；滅菌后自然冷卻至室溫。
[0027](5)接種:于超凈工作臺(tái)或經(jīng)殺菌后的接種箱內(nèi)接種，接種前用75%消毒酒精擦拭手、接種針，再將接種針置于酒精燈火焰上灼燒，冷卻后挑出打孔棒，并從原種瓶里挖取2塊蜜環(huán)菌菌種塊轉(zhuǎn)入料袋內(nèi)，一塊置于料袋中下部(即料袋1/3部位)，一塊置于料袋中部(即料袋1/2部位)。
[0028](6)培養(yǎng):將接種后的料袋轉(zhuǎn)移到避光的培養(yǎng)室于24?26°C溫度條件下培養(yǎng)至蜜環(huán)菌菌索長(zhǎng)滿料袋后即可。
[0029]結(jié)果描述:接種7天后，新生蜜環(huán)菌菌索長(zhǎng)入培養(yǎng)料內(nèi)，菌索長(zhǎng)至料內(nèi)后迅速多級(jí)分叉，致密，色白，后期呈黃白色。35天左右菌索即長(zhǎng)滿料袋。
[0030]實(shí)施例3玉米酒糟蜜環(huán)菌生產(chǎn)種的制作方法
(I)稱料:按重量份配比取如下原料:玉米酒糟65份、米糠32份、蔗糖2份、石膏I份;所述酒糟和米糠新鮮無(wú)霉變。
[0031](2)拌料:將各組分轉(zhuǎn)入攪拌機(jī)中，開(kāi)機(jī)攪拌，至勻后加入水，加水量為至培養(yǎng)料中含水量達(dá)72%，拌勻