具有高熒光壽命的熒光指示劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[000? ]本發(fā)明涉及一種焚光指不劑，特別涉及一種具有尚焚光壽命的焚光指不劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 熒光指示劑是指能夠受激照射產(chǎn)生熒光的一類物質(zhì)，在現(xiàn)有技術(shù)中雖然能夠產(chǎn)生 焚光的物質(zhì)較多，但普通的焚光指不劑受配體和中心金屬的限制，其焚光壽命較短，一般在 納秒級別（lns = l(T12345678S)，并且，由于配體所帶基團(tuán)的影響，使得其在溶解度和對抗體的可修 飾范圍上受到了極大地限制。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種稀土配位物熒光指示劑， 該指示劑能夠?qū)Π被?、多肽、蛋白質(zhì)、生物素、親和素、核酸等分子進(jìn)行標(biāo)記，通過激光激 發(fā)熒光指示劑，檢測發(fā)射出的熒光強(qiáng)度，可以定量檢測待測物質(zhì)的濃度。
[0004] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0005] -種熒光指示劑，其至少包含有以下化合物：
[0006]
其中，仏為-COOH 或-C0NH (CH2) nNH2 或-C0NH (CH2) nNHC0 (CH2) mCOON (COCH2CH2CO)或-C0NH( CH2 )nNHC0Ph-p-NCS ； 2 R2選自H原子、羧酸酯、羧酸或鹵素原子中的一種； 3 R3選自Η原子、羧酸酯、羧酸或鹵素原子中的一種； 4 R4選自Η原子、羧酸酯、羧酸或鹵素原子中的一種； 5 Rs選自Η原子、羧酸酯、羧酸或鹵素原子中的一種； 6 R6選自Η原子、羧酸酯、羧酸或鹵素原子中的一種。 7
[0013] R2~R6基團(tuán)的作用主要是調(diào)節(jié)該化合物的在不同溶劑中的溶解度和熒光發(fā)光效 率;心的作用是：1)延長受激后發(fā)出的熒光的壽命，使其能夠達(dá)到微秒級；2)增加熒光指示 劑與抗體(或蛋白）的鍵合便利性，以提高熒光指示劑的可修飾性，同時(shí)降低熒光指示劑對 抗體(或蛋白）生物活性的影響;3)調(diào)節(jié)熒光指示劑在生物試劑中的溶解度。 8
[0014]優(yōu)選的是，所述的熒光指示劑，其中，η為正整數(shù)。
[0016] 優(yōu)選的是，所述的熒光指示劑，其中，所述羧酸酯為-C00CH3。
[0017] 優(yōu)選的是，所述的熒光指示劑，其中，所述羧酸為-C00H。
[0018] 本發(fā)明的有益效果是:本案所設(shè)計(jì)的熒光指示劑可被紫外光所激發(fā)，產(chǎn)生的熒光 強(qiáng)度高，stokes位移大，可高達(dá)280nm;同時(shí)該指示劑具有時(shí)間分辨特性，激發(fā)后能長時(shí)間發(fā) 出熒光，達(dá)到微秒級，可以利用此特性來消除待測樣本的生物背景熒光(生物背景熒光激發(fā) 后維持時(shí)間短，在納秒級）。
【附圖說明】
[0019]圖1為實(shí)施例1的HPLC檢測結(jié)果圖。
[0020]圖2為實(shí)施例2的質(zhì)譜圖。
[0021]圖3為熒光指示劑的發(fā)射光譜和激發(fā)光譜圖。
[0022] 圖4為熒光指示劑的熒光壽命測試圖。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 下面結(jié)合附圖對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書文 字能夠據(jù)以實(shí)施。
[0024] 實(shí)施例1
[0025] -種熒光指示劑，其至少包含有以下化合物：
[0026]
[0027]它的合成方法如下：
[0028]
[0029] 該化合物的HPLC圖見圖1。
[0030] 實(shí)施例2
[0031] -種熒光指示劑，其至少包含有以下化合物： 1
[0033] 匕乂刀Γ :=
[0034]
[0035] 該化合物的質(zhì)譜圖見圖2。
[0036] 實(shí)施例3
[0037] -種熒光指示劑，其至少包含有以下化合物：
[0038]
[0039] 它的合成方法如下：（以n = 2，m = 6為例）
[0040]
[0041 ] 注:DSS為雙琥珀酰亞胺辛二酸酯。
[0042] 實(shí)施例4
[0043] -種熒光指示劑，其至少包含有以下化合物： 八r\
[0044] ilUUL· L,UUil
[0045] 它的合成方法如下：（以n = 2為例）
[0π/ια1
1234 實(shí)施例5 2 抗體標(biāo)記 3 將實(shí)施例3或4中的熒光指示劑加入到抗體溶液中，pH約8.0，室溫震蕩1小時(shí)，使用 分離柱進(jìn)行分離，即可得到已標(biāo)記的抗體，采用熒光分光光度計(jì)測試，可以檢測到很強(qiáng)的熒 光。 4 實(shí)施例6 [0051 ] 生物素標(biāo)記
[0052] 將EDC( 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)和NHS(N-羥基琥珀酰亞胺） 加入到生物素溶液中活化15分鐘，然后加入實(shí)施例2中的熒光指示劑，震蕩1小時(shí)，使用分離 柱進(jìn)行分離，即可得到標(biāo)記的生物素。采用熒光分光光度計(jì)測試，可以檢測到很強(qiáng)的熒光。 [0053]圖3為實(shí)施例1-4任一化合物的熒光發(fā)射光譜和激發(fā)光譜圖，發(fā)射光譜在340nm激 發(fā)，激發(fā)光譜在620nm檢測，測試環(huán)境為pH=7.0磷酸緩沖液。
[0054]圖4為激發(fā)實(shí)施例1-4中任一化合物所得到的熒光壽命測試圖，在340nm激發(fā)，在 620nm檢測。普通熒光染料的壽命是納秒級別，而從圖4中可以看出，本案的熒光染料壽命是 微秒級別的。
[0055]盡管本發(fā)明的實(shí)施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實(shí)施方式中所列 運(yùn)用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地 實(shí)現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限 于特定的細(xì)節(jié)和這里示出與描述的圖例。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種熒光指示劑，其至少包含有以下化合物：其中，Ri 為-COOH 或-CONH( CH2) nNH2 或-CONH( CH2) nNHCO (CH2 )m⑶ 0N( COCH2CH2CO)或-CONH (CH2)nNHCOPh-p-NCS； R2選自H原子、羧酸酯、羧酸或鹵素原子中的一種； R3選自Η原子、羧酸酯、羧酸或鹵素原子中的一種； R4選自Η原子、羧酸酯、羧酸或鹵素原子中的一種； Rs選自Η原子、羧酸酯、羧酸或鹵素原子中的一種； R6選自Η原子、羧酸酯、羧酸或鹵素原子中的一種。2. 如權(quán)利要求1所述的熒光指示劑，其特征在于，η為正整數(shù)。3. 如權(quán)利要求1所述的熒光指示劑，其特征在于，m為正整數(shù)。4. 如權(quán)利要求1所述的熒光指示劑，其特征在于，所述羧酸酯為-C00CH3。5. 如權(quán)利要求1所述的熒光指示劑，其特征在于，所述羧酸為-C00H。
【專利摘要】本案涉及一種具有高熒光壽命的熒光指示劑，該熒光指示劑以銪為中心金屬，以氨基橋聯(lián)的聯(lián)吡啶作為輔助配體。本案所設(shè)計(jì)的熒光指示劑可被紫外光所激發(fā)，產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度高，stokes位移大，可高達(dá)280nm；同時(shí)該指示劑具有時(shí)間分辨特性，激發(fā)后能長時(shí)間發(fā)出熒光，達(dá)到微秒級，可以利用此特性來消除待測樣本的生物背景熒光。
【IPC分類】G01N21/64, C09K11/06, C07D487/22
【公開號】CN105602549
【申請?zhí)枴緾N201510981005
【發(fā)明人】白鵬利, 殷建, 尹煥才, 陳名利, 胡軍
【申請人】中國科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所
【公開日】2016年5月25日
【申請日】2015年12月24日