從萬壽菊中提取6-羥基山萘酚單體化合物的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物有效成分提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從萬壽菊中提取6-羥基 山萘酚單體化合物的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 萬壽菊，又名金菊花，學(xué)名Tagetes erecta，菊科萬壽菊屬，為一年生草本植物，除 具有觀賞價(jià)值外，還具有很好的藥用價(jià)值，如其根具有解毒消腫作用，用于治療上呼吸道感 染、百日咳、支氣管炎、口腔炎、乳腺炎等，其葉用于癰、瘡、癤、疔，無名腫毒，其花平肝解熱、 祛風(fēng)化痰，用于治療頭暈?zāi)垦！㈩^風(fēng)眼痛、小兒驚風(fēng)、感冒咳嗽、乳痛等癥。但是目前的萬壽 菊制劑成分一般為混合物，如將整朵萬壽菊花風(fēng)干后入藥，缺乏必要的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和藥 效研究，所以其缺乏合理的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，難以確保臨床用藥的有效性、安全性、可持續(xù)性。 可見，對(duì)萬壽菊的化學(xué)成分進(jìn)行進(jìn)一步提取和研究非常有必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)以上現(xiàn)有問題，采用二維高效液相色譜的方 法，首次從萬壽菊中分離純化出6-羥基山萘酚，且純度高達(dá)98%以上，為萬壽菊及其制劑 的質(zhì)量控制與臨床合理用藥提供了更為精準(zhǔn)的指導(dǎo)依據(jù)。
[0004] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：
[0005] -種從萬壽菊中提取6-羥基山萘酚單體化合物的方法，該方法包括以下步驟：
[0006] (1)以萬壽菊干花為原料，干燥后磨成粉末狀得到萬壽菊粗粉，用乙醇浸泡或者回 流提取，然后過濾，取濾液重復(fù)1-3次，最終所得濾液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干得粗提物，粗提物 再溶于甲醇-水二元混合溶劑中，進(jìn)行減壓抽濾，得到粗提物濃度為50-500mg/mL的提取 液；
[0007] (2)對(duì)提取液進(jìn)行一維液相色譜分離：采用的色譜柱為反相色譜柱DAISO C1S，采 用的流動(dòng)相為A相水、B相甲醇的二元流動(dòng)相，進(jìn)樣量為100-1000 μ L/針，連續(xù)進(jìn)樣，流 動(dòng)相流速為6-16mL/min，洗脫方式為Β相濃度50-55% (即按體積百分比Β相50-55%、 A相45-50%混合而成的液體，下同理）等度洗脫20min，檢測器為紫外檢測器、檢測波長 200-260nm，根據(jù)紫外吸收光譜收集13-18分鐘洗脫液作為目的組分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干， 得到一維液相組分；
[0008] (3)使用甲醇-水二元混合溶劑溶解一維液相組分，溶解至濃度為50-100mg/mL ;
[0009] (4)進(jìn)行二維液相色譜分離：采用的色譜柱為Acchrom X-Amide色譜柱，采用的流 動(dòng)相為A相水、B相乙腈的二元流動(dòng)相，進(jìn)樣量為10-500 μ L/針，連續(xù)進(jìn)樣，流動(dòng)相流速為 2-4111171^11，洗脫方式為8相濃度80-90%等度洗脫20 1^11，檢測器為紫外檢測器、檢測波長 200-260nm，根據(jù)紫外吸收光譜收集8-10分鐘洗脫液作為目的組分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干，得 到目的產(chǎn)物6-羥基山萘酚。
[0010] 作為優(yōu)選，所述步驟（1)、（3)中甲醇-水二元混合溶劑中甲醇體積分?jǐn)?shù)為 90-99 %，進(jìn)一步優(yōu)選為95 %。
[0011] 作為優(yōu)選，所述步驟（2)中色譜柱的尺寸為直徑20mm、長度250mm，其中填料粒徑 為8 μπι，使用時(shí)柱溫為室溫或25-40°C，進(jìn)一步優(yōu)選為30°C。
[0012] 作為優(yōu)選，所述步驟（2)中等度洗脫方式為B相濃度53%等度洗脫20min。
[0013] 作為優(yōu)選，所述步驟（4)中色譜柱的尺寸為直徑10mm、長度250mm，其中填料粒徑 為8 μπι，使用時(shí)柱溫為室溫或25-40°C，進(jìn)一步優(yōu)選為30°C。
[0014] 作為優(yōu)選，所述步驟（4)中洗脫方式為B相濃度85%等度洗脫20min。
[0015] 由于本發(fā)明原料萬壽菊中的物質(zhì)極性比較集中，所以我們選用二維高效液相色譜 進(jìn)行有效組分的提取。
[0016] 在一維分離的條件選擇上：首先，所分的樣品量較大，所以挑選甲醇-水作為流 動(dòng)相進(jìn)行分離，既成本較低，又毒性較小，適合大規(guī)模生產(chǎn)所用；其次，在該樣品中所含的 6-羥基山萘酚含量較大，C18柱可以對(duì)其進(jìn)行分離，并結(jié)合甲醇-水流動(dòng)相，可以在等度的 條件下就完成樣品的一維分離，并得到較高的純度，且柱殘留較少；最后，通過對(duì)樣品進(jìn)行 梯度洗脫試驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)樣品中所含的物質(zhì)極性較為相近，出峰時(shí)間集中，而采用本發(fā)明等 度洗脫的方式可以很好地完成初步分離，經(jīng)過條件摸索發(fā)現(xiàn)53 %甲醇-47 %水是最佳的洗 脫條件，可以一維分離收集到最高純度的6-羥基山萘酚，且與其他峰之間分離非常好，無 交叉或重疊等現(xiàn)象，非常有利于分離操作和后續(xù)進(jìn)一步提純，并且等度洗脫的方式利于開 展連續(xù)多次上樣，既減少了色譜柱出峰的死時(shí)間，又節(jié)約了沖柱及平衡時(shí)間，可以在更短的 時(shí)間內(nèi)完成6-羥基山萘酚的粗分離，適合于擴(kuò)大到工業(yè)生產(chǎn)。
[0017] 在二維分離的條件選擇上：首先，一維分離所得到的6-羥基山萘酚已具有較高的 純度，且其中所含的雜質(zhì)較少，但是這些雜質(zhì)的極性與性質(zhì)和6-羥基山萘酚極其接近，而 X-Amide柱具備將這些組分進(jìn)行分離的能力，分離度好，選擇性高，柱效高；其次，一維分離 所得樣品量已經(jīng)變少，使用乙腈-水來進(jìn)行分離，可以使X-Amide柱更好地發(fā)揮作用；最后， 經(jīng)過梯度洗脫試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)較好的洗脫條件為80-90%乙腈，而理論塔板數(shù)最高、出峰時(shí)間最 合適的是85%乙腈-15%水等度洗脫，這樣的二維分離可以得到98%以上純度的6-羥基山 萘酚。
[0018] 與現(xiàn)有技術(shù)中相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)和顯著效果：
[0019] (1)方法簡單易行，可操作性強(qiáng)，儀器自動(dòng)化程度高，常溫常壓下就可進(jìn)行，重復(fù)性 好，得到的物質(zhì)組分批次之間一致性高，經(jīng)工藝放大后可以運(yùn)用于工業(yè)生產(chǎn)；
[0020] (2)通過各工藝條件的良好協(xié)同作用和工藝參數(shù)的優(yōu)化，可以分離得到純度98% 以上的6-羥基山萘酚；
[0021 ] (3)重復(fù)性好，批次間一致性程度高，加上本發(fā)明萬壽菊樣品中物質(zhì)極性比較集 中，適合采用連續(xù)進(jìn)樣的方式，不僅有效減少了柱洗脫時(shí)間，可以在更短的時(shí)間內(nèi)完成萬壽 菊中6-羥基山萘酚單體的制備，分離周期短，分離效率高，是一種縮短樣品制備時(shí)間的的 理想方法；
[0022] (4)首次從萬壽菊中提取得到6-羥基山萘酚，使萬壽菊成為黃酮醇類藥物的有效 組分原料，擴(kuò)大了萬壽菊的應(yīng)用范圍，有效提高了萬壽菊的附加值；
[0023] (5)拓寬了 6-羥基山萘酚的原料來源，藥材來源廣，且得到的6-羥基山萘酚純度 高，產(chǎn)量大，質(zhì)量可控，可以使6-羥基山萘酚更好得發(fā)揮其抗氧化、抗癌、抗菌、抗病毒、降 血脂、降血糖、免疫調(diào)節(jié)等作用，投入于相關(guān)藥物的制備。
【附圖說明】
[0024] 圖1所示的是本發(fā)明實(shí)施例1從萬壽菊中提取6-羥基山萘酚的一維高效液相色 譜圖；
[0025] 圖2所示的是本發(fā)明實(shí)施例1從萬壽菊中提取6-羥基山萘酚的二維高效液相色 譜圖；
[0026] 圖3所示的是本發(fā)明實(shí)施例1所得到的目的組分的分析型高效液相色譜圖；
[0027] 圖4所示的是本發(fā)明實(shí)施例1所得到的目的組分的核磁共振分析圖，其中（a)為 1D1CNMR 譜（MeOD, 150MHz)的數(shù)據(jù)圖譜，（b)為 1D13HNMR 譜（Me0D，600MHz)的數(shù)據(jù)圖譜；
[0028] 圖5所示的是本發(fā)明實(shí)施例2從萬壽菊中分離純化6-羥基山萘酚的一維高效液 相色譜圖；
[0029] 圖6所示的是本發(fā)明實(shí)施例2從萬壽菊中分離純化6-羥基山萘酚的二維高效液 相色譜圖；
[0030] 圖7所示的是本發(fā)明實(shí)施例3從萬壽菊中分離純化6-羥基山萘酚的一維高效液 相色譜圖；
[0031] 圖8所示的是本發(fā)明實(shí)施例3從萬壽菊中分離純化6-羥基山萘酚的二維高效液 相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0032] 以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步具體描述。應(yīng)該指出，以下具體說明都是例示 性的，旨在對(duì)本發(fā)明提供進(jìn)一步的說明。除非另有說明，本發(fā)明使用的所有科學(xué)和技術(shù)術(shù)語 具有與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域人員通常理解的相同含義。
[0033] 實(shí)施例1 :
[0034] 本實(shí)施例從萬壽菊中提取6-羥基山萘酚單體化合物的方法，包括以下步驟：
[0035] 以萬壽菊干花為原料，磨成粉末狀后用乙醇提取旋蒸得到干燥的萬壽菊粗粉 后稱取5g，溶于50mL 95 %的甲醇-水溶液，制得萬壽菊提取物溶液，濃度為100mg/mL， 過0.45 μπι微孔濾膜，進(jìn)行一維液相色譜制備。一維液相色譜采用反相色譜柱DAIS0 C1S (250mmX 20mm i. d.，8 μ m)，流動(dòng)相采用的為有機(jī)相與水相混合，其中Α相是水，Β相是甲 醇，等度洗脫方式：B相濃度53%等度2〇11^11。采用紫外檢測器21〇11111和26〇11111為雙選擇吸收 波長，制備溫度為室溫，進(jìn)樣量為500 μ L/針，流動(dòng)相流速為12mL/min，根據(jù)紫外吸收光譜 收集圖1中5號(hào)峰（15-17分鐘）作為目的餾分，進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干，為一維制備6