一種日本楓猩猩的組培快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物組培育苗技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種日本楓猩猩的組培快繁方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 日本楓猩猩，其拉下名為Acer palmatum'Desho jo'，春天葉子呈鮮亮的姻脂紅， 但顏色持續(xù)時(shí)間沒有其他相似品種長(zhǎng)，除春天外，葉子在其他季節(jié)都呈淺綠色，通常邊緣是 銅紅色，而秋天變?yōu)樯罴t色。其植株大多低矮，枝條層疊狀猶如瀑布，成齡植株，其冠傘形或 半球形，植株健壯，生長(zhǎng)旺盛。雖然該品種目前沒有廣泛栽植，但它將會(huì)成為一個(gè)很受歡迎 的園林景觀樹種，極具觀賞價(jià)值與經(jīng)濟(jì)價(jià)值。然而該品種數(shù)量少，目前主要通過播種和嫁接 繁殖，出芽率和成活率都不是很高，繁殖系數(shù)低，繁殖周期長(zhǎng)，場(chǎng)地要求大，人工成本較高， 遠(yuǎn)不能滿足國(guó)內(nèi)對(duì)種苗的需求。
[0003] 因此，如何提高其生產(chǎn)效率，縮短培育時(shí)間，降低人工成本，保持優(yōu)良樹種的遺傳 穩(wěn)定性，提高其繁殖系數(shù)成為目前亟待解決的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 有鑒于此，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N日本楓猩猩的組培快繁方法，所用培養(yǎng)基配方簡(jiǎn)單，組 培流程簡(jiǎn)便，培養(yǎng)時(shí)間短，增殖頻率高，幼苗整齊，便于后期統(tǒng)一的移栽和種植管理，降低了 人工成本，能保證所長(zhǎng)出的幼苗植株在形狀上的一致性，易于操作，可進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
[0005] 為解決W上技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是一種日本楓猩猩的組培快繁方 法，包括W下步驟：
[0006] (1)外植體選取及滅菌：切取日本楓猩猩帶芽莖段，采用酒精和升隸滅菌處理后， 得外植體；
[0007] (2)啟動(dòng)培養(yǎng):將步驟(1)所得外植體接種到啟動(dòng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)1-4周，蔽芽生成， 所述啟動(dòng)培養(yǎng)基的組成為：N6基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充0.05-0.20mg/L NAA、0.01-0.08mg/L TDZ、10-50g/L 薦糖、2-lOg/L 瓊脂；
[000引（3)增殖培養(yǎng):切取步驟(2)所得蔽芽，接種到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6周，叢生芽生 成，所述增殖培養(yǎng)基的組成為:N6基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充0.05-0.20mg/L NAA、0.05-0.20mg/L TDZ、0.2-1.2mg/L 6-BA、200-600mg/L LH;
[0009] (4)生根培養(yǎng):將步驟(3)所得叢生芽分離成單芽，接種到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)3-4 周即得日本楓猩猩無菌苗，所述生根培養(yǎng)基的組成為：1/4N6基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充0.01 - 0.05mg/L IAA、0.01-0.08mg/L NAA、0.005-0.02mg/L IBA。
[0010] 優(yōu)選的，所述外植體選取及滅菌的具體操作為:選取日本楓猩猩幼嫩枝條，去掉葉 片，切割成長(zhǎng)度為2-3cm的帶芽莖段，在無菌操作臺(tái)上，用75%的酒精處理6-lOs，再用 0.1 %的升隸處理6-lOmin，無菌水沖洗4-6次，驚干即可。
[0011] 優(yōu)選的，所述啟動(dòng)培養(yǎng)基的組成為：N6基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充0.05-0.15mg/L NAA、 0.03-0.06mg/L TDZ、20-40g/L薦糖、3-6g/L瓊脂。
[0012] 更為優(yōu)選的，所述啟動(dòng)培養(yǎng)基的組成為：N6基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充O.lmg/L NAA、 0.05mg/L TDZ、30g/L薦糖、5g/L瓊脂。
[0013] 優(yōu)選的，所述增殖培養(yǎng)基的組成為：N6基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充0.05-0.15mg/L NAA、 0.05-0.15mg/L TDZ、0.6-1.Omg/L 6-BA、400-600mg/L LH。
[0014] 更為優(yōu)選的，所述增殖培養(yǎng)基的組成為:N6基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充O.lmg/L NAA、0.1mg/ L TDZ、0.8mg/L 6-BA、500mg/L LH。
[0015] 優(yōu)選的，所述生根培養(yǎng)基的組成為：1/4N6基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充0.01-0.03mg/L lAA、 0.03-0.06mg/L NAA'0.01-0.015mg/L IBA。
[0016] 更為優(yōu)選的，所述生根培養(yǎng)基的組成為：1/4N6基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充0.02mg/L lAA、 0.05mg/L NAA、0.01mg/L IBA。
[0017] 優(yōu)選的，所述啟動(dòng)培養(yǎng)基的pH值為6.3-6.7。
[001引優(yōu)選的，所述啟動(dòng)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)步驟中，培養(yǎng)溫度為24-30°C，光照強(qiáng) 度為2000-3000LX，光照時(shí)間為14-18h/d。
[0019] 本申請(qǐng)所述N6基本培養(yǎng)基成分簡(jiǎn)單，但硝酸鹽和錠鹽含量較高，其養(yǎng)分的數(shù)量和 比例合適，能滿足植物細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)和生理需要，部分植物組織培養(yǎng)快速繁殖用它作為培養(yǎng) 基的基本培養(yǎng)基。
[0020] 所述1/4N6基本培養(yǎng)基為上述N6基本培養(yǎng)基在大量母液的基礎(chǔ)上減去四分之Ξ的 無機(jī)鹽，更低的鹽濃度有利于植物根系的生長(zhǎng)。
[0021 ]所述NAA為糞乙酸，是一種植物生長(zhǎng)激素，在植物使用桿插法繁殖時(shí)使用，也可用 于植物組織培養(yǎng)，能促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大，誘導(dǎo)形成不定根增加座果，防止落果，改變雌、雄 花比率等，可經(jīng)葉片、樹枝的嫩表皮，種子進(jìn)入到植株內(nèi)，隨營(yíng)養(yǎng)流輸導(dǎo)到全株。
[0022] 所述TDZ是一種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，具有很強(qiáng)的細(xì)胞分裂素活性，可W促進(jìn)植物芽的 再生和繁殖，打破芽的休眼，促進(jìn)種子萌發(fā)，促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)，延緩植物衰老等，可W對(duì)其 它的植物激素和生理活性物質(zhì)的作用來調(diào)節(jié)植物的生長(zhǎng)發(fā)育過程，可用作植物組織培養(yǎng)。
[0023] 所述6-BA為6-節(jié)氨基腺嚷嶺，是一種植物生長(zhǎng)激素，其主要作用是促進(jìn)芽的形成， 也可W誘導(dǎo)愈傷組織發(fā)生，促進(jìn)細(xì)胞分裂，促進(jìn)非分化組織分化，促進(jìn)生物體內(nèi)物質(zhì)的積 累，促進(jìn)側(cè)芽發(fā)生，防止老化，是植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)胞分裂素。
[0024] 所述LH為水解乳蛋白，是一種多種氨基酸的混合物，其主要作用是促進(jìn)胚狀體、不 定芽的分化，有利于叢生芽的分化?？稍鰪?qiáng)其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用；亦可利用氨基酸對(duì)微 量元素的結(jié)合能力，增強(qiáng)微量元素的利用率?？纱龠M(jìn)植物吸收作用。
[0025] 所述IAA為嗎I噪乙酸，是一種植物生長(zhǎng)激素，能夠調(diào)節(jié)植物的生長(zhǎng)，不僅能促進(jìn)生 長(zhǎng)，而且具有抑制生長(zhǎng)和器官建成的作用。在細(xì)胞水平上，可刺激形成層細(xì)胞分裂、刺激枝 的細(xì)胞伸長(zhǎng)、抑制根細(xì)胞生長(zhǎng)、促進(jìn)木質(zhì)部、初皮部細(xì)胞分化、促進(jìn)插條發(fā)根、調(diào)節(jié)愈傷組織 的形態(tài)建成，因此可用作植物組織培養(yǎng)。
[0026] 所述IBA為嗎I噪下酸，是一種植物生長(zhǎng)激素，主要用于插條生根，可誘導(dǎo)根原體的 形成，促進(jìn)細(xì)胞分化和分裂，有利于新根生成和維管束系統(tǒng)的分化，促進(jìn)插條不定根的形 成。
[0027] 本申請(qǐng)與現(xiàn)有技術(shù)相比，其詳細(xì)說明如下:本申請(qǐng)技術(shù)方案提供了一種日本楓猩 猩的組培快繁方法，包括外植體的選取及滅菌、啟動(dòng)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)的步驟，通過 對(duì)啟動(dòng)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基的篩選，得到最佳的培養(yǎng)基組分和配比，采用前述 植物生長(zhǎng)激素配比形成的培養(yǎng)基，配方簡(jiǎn)單，培養(yǎng)基成本低，配合各階段的培養(yǎng)條件，得到 的幼苗培養(yǎng)時(shí)間短，培養(yǎng)流程簡(jiǎn)便，提高了日本楓猩猩繁殖的效率，繁殖系數(shù)較高為2-3， 能快速獲得遺傳性狀一致的日本楓猩猩無菌苗，利用組織培養(yǎng)技術(shù)，進(jìn)行外植體培養(yǎng)，可不 受季節(jié)氣候變化、自然災(zāi)害的影響，可進(jìn)行大規(guī)模的工業(yè)化育苗及深加工。
【具體實(shí)施方式】
[0028]為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì) 本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
[00巧]實(shí)施例1
[0030]本實(shí)施例所述的一種日本楓猩猩的組培快繁方法，包括W下步驟：
[0031 ] (1)外植體選取及滅菌:選取日本楓猩猩幼嫩枝條，去掉葉片，切割成長(zhǎng)度為2- 3cm的帶芽莖段，在無菌操作臺(tái)上，用75%的酒精處理6-lOs，再用0.1%的升隸處理6- lOmin，無菌水沖洗4-6次，驚干即可，得外植體；
[0032] (2)啟動(dòng)培養(yǎng):將步驟（1)所得外植體接種到pH值為6.3-6.7的啟動(dòng)培養(yǎng)基中培養(yǎng) 1-4周，蔽芽生成，所述啟動(dòng)培養(yǎng)基的組成為:N6基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充0.1 mg/L NAA、0.05mg/L TDZ、30g/L 薦糖、5g/L 瓊脂；
[0033] (3)增殖培養(yǎng):切取步驟(2)所得蔽芽，接種到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6周，叢生芽生 成，所述增殖培養(yǎng)基的組成為:N6基本培養(yǎng)基，補(bǔ)充0.1111肖/1酷4、0.1111肖/1了02、0.8111肖/16- B