0021] 培養(yǎng)液成份為：玉米漿（以干物質(zhì)計(jì)）含量為35_45g/L，黃豆粉3-4 g/L，酵母浸 膏 8-10 g/L，葡萄糖 18-22 g/L，麥芽浸膏 20-25 g，硫酸銨 0.5-0. 7g/L，硫酸鎂 0.3-0. 4g/ L，磷酸二氧鉀1.8-2. 3g/L，碳酸鈣0.7 g/L，硫酸亞鐵0.18 g/L，硫酸錳0.025 g/L; pH 4· 4〇
[0022] 濕黃藍(lán)狀菌細(xì)胞制備過程如下：黃藍(lán)狀菌ATCC 58679經(jīng)斜面、搖瓶培養(yǎng)，得到種 子液。5L發(fā)酵罐加入培養(yǎng)液；發(fā)酵罐加入培養(yǎng)液，121°C高壓滅菌30分鐘，冷卻至26-27 °C， 將黃藍(lán)狀菌種子液接種至發(fā)酵罐，接種比例為9-10%，通氣比為0.9-1￥八￥分鐘)，26-271€ 培養(yǎng)41-45小時(shí)，用過濾式離心機(jī)離心得到濕黃藍(lán)狀菌細(xì)胞，用作生物催化反應(yīng)催化劑。
[0023] 生物催化轉(zhuǎn)化：5L底部通氣攪拌反應(yīng)器中加入磷酸鹽緩沖液，pH為5. 2,加入底 物1-四氫萘酮，使其濃度為90g/L，玉米漿（以干物質(zhì)計(jì)）含量為19g/L，蔗糖酯ll-12g/ L，木糖30-35g/L、異丙醇5-6%V/V (體積濃度），121°C高壓滅菌30分鐘；冷卻至28-29°C時(shí)， 加入濕黃藍(lán)狀菌細(xì)胞使其濃度為67-70g/L，通氣比為0. 13-0. 14VAV分鐘），進(jìn)行生物催化 反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為63-66小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，濾出細(xì)胞，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液，蒸出乙酸乙 酯，得到產(chǎn)物（S) _(+) -1，2, 3, 4-四氫-1-萘酚，反應(yīng)轉(zhuǎn)化率98%，產(chǎn)品收率96%，對(duì)映體 過量率99%。
[0024] 實(shí)施例3 種子培養(yǎng)基成份為：玉米漿（以干物質(zhì)計(jì)）含量為35-45g/L，酵母提取物10 g/L，葡 萄糖20 g/L，硫酸銨0. 5-0. 7g/L，硫酸鎂0. 3-0. 4g/L，磷酸二氧鉀I. 8-2. 3g/L;配制固體 培養(yǎng)基時(shí)添加15g/L的瓊脂粉。
[0025] 培養(yǎng)液成份為：玉米漿（以干物質(zhì)計(jì)）含量為35_45g/L，黃豆粉3-4 g/L，酵母浸 膏 8-10 g/L，葡萄糖 18-22 g/L，麥芽浸膏 20-25 g，硫酸銨 0.5-0. 7g/L，硫酸鎂 0.3-0. 4g/ L，磷酸二氧鉀1.8-2. 3g/L，碳酸鈣0.7 g/L，硫酸亞鐵0.18 g/L，硫酸錳0.025 g/L; pH 4· 4〇
[0026] 濕黃藍(lán)狀菌細(xì)胞制備過程如下：黃藍(lán)狀菌ATCC 58679經(jīng)斜面、搖瓶培養(yǎng)，得到 種子液。IOL發(fā)酵罐加入培養(yǎng)液；發(fā)酵罐加入培養(yǎng)液，121°C高壓滅菌30分鐘，冷卻至 26-27°C，將黃藍(lán)狀菌種子液接種至發(fā)酵罐，接種比例為9-10 %，通氣比為0. 9-1V/ (V分 鐘)，26-27°C培養(yǎng)41-45小時(shí)，用過濾式離心機(jī)離心得到濕黃藍(lán)狀菌細(xì)胞，用作生物催化反 應(yīng)催化劑。
[0027] 生物催化轉(zhuǎn)化：IOL底部通氣攪拌反應(yīng)器中加入磷酸鹽緩沖液，pH為5. 2,加入底 物1-四氫萘酮，使其濃度為84g/L，玉米漿（以干物質(zhì)計(jì)）含量為20g/L，蔗糖酯ll-12g/ L，木糖30-35g/L、異丙醇5-6%V/V (體積濃度），121°C高壓滅菌30分鐘；冷卻至28-29°C時(shí)， 加入濕黃藍(lán)狀菌細(xì)胞使其濃度為67-70g/L，通氣比為0. 13-0. 14VAV分鐘），進(jìn)行生物催化 反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為63-66小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，濾出細(xì)胞，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液，蒸出乙酸乙 酯，得到產(chǎn)物（S)-(+)-1，2, 3, 4-四氫-1-萘酚，反應(yīng)轉(zhuǎn)化率98. 5%，產(chǎn)品收率96. 5%，對(duì) 映體過量率99%。
[0028] 實(shí)施例4 種子培養(yǎng)基成份為：玉米漿（以干物質(zhì)計(jì)）含量為35-45g/L，酵母提取物10 g/L，葡 萄糖20 g/L，硫酸銨0. 5-0. 7g/L，硫酸鎂0. 3-0. 4g/L，磷酸二氧鉀I. 8-2. 3g/L;配制固體 培養(yǎng)基時(shí)添加15g/L的瓊脂粉。
[0029] 培養(yǎng)液成份為：玉米漿（以干物質(zhì)計(jì)）含量為35_45g/L，黃豆粉3-4 g/L，酵母浸 膏 8-10 g/L，葡萄糖 18-22 g/L，麥芽浸膏 20-25 g，硫酸銨 0.5-0. 7g/L，硫酸鎂 0.3-0. 4g/ L，磷酸二氧鉀1.8-2. 3g/L，碳酸鈣0.7 g/L，硫酸亞鐵0.18 g/L，硫酸錳0.025 g/L; pH 4· 4〇
[0030] 濕黃藍(lán)狀菌細(xì)胞制備過程如下：黃藍(lán)狀菌ATCC 58679經(jīng)斜面、搖瓶培養(yǎng)，得到 種子液。IOL發(fā)酵罐加入培養(yǎng)液；發(fā)酵罐加入培養(yǎng)液，121°C高壓滅菌30分鐘，冷卻至 26-27°C，將黃藍(lán)狀菌種子液接種至發(fā)酵罐，接種比例為9-10 %，通氣比為0. 9-1V/ (V分 鐘)，26-27°C培養(yǎng)41-45小時(shí)，用過濾式離心機(jī)離心得到濕黃藍(lán)狀菌細(xì)胞，用作生物催化反 應(yīng)催化劑。
[0031] 生物催化轉(zhuǎn)化：20L底部通氣攪拌反應(yīng)器中加入磷酸鹽緩沖液，pH為5. 2,加入底 物1-四氫萘酮，使其濃度為86g/L，玉米漿（以干物質(zhì)計(jì)）含量為19g/L，蔗糖酯ll-12g/ L，木糖30-35g/L、異丙醇5-6%V/V (體積濃度），121°C高壓滅菌30分鐘；冷卻至28-29°C時(shí)， 加入濕黃藍(lán)狀菌細(xì)胞使其濃度為67-70g/L，通氣比為0. 13-0. 14VAV分鐘），進(jìn)行生物催化 反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為63-66小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后，濾出細(xì)胞，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液，蒸出乙酸乙 酯，得到產(chǎn)物（S)_(+)-1，2, 3, 4-四氫-1-萘酚，反應(yīng)轉(zhuǎn)化率99%，產(chǎn)品收率96. 5%，對(duì)映 體過量率99%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種黃藍(lán)狀菌細(xì)胞生物催化制備（S)-(+)-1，2, 3, 4-四氫-1-萘酚的方法，其特征在 于反應(yīng)罐中加入磷酸鹽緩沖液，pH為5. 2,加入底物1-四氫萘酮，使底物1-四氫萘酮添加 量為80-90g/L，玉米漿含量為19-20g/L，蔗糖酯ll-12g/L，木糖30-35g/L、異丙醇5-6%V/ V，121°C高壓滅菌30分鐘；冷卻至28-29°C時(shí)，加入濕黃藍(lán)狀菌細(xì)胞使其濃度為67-70g/L， 通氣比為0. 13-0. 14VAV分鐘)，進(jìn)行生物催化反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為63-66小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后， 濾出細(xì)胞，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液，蒸出乙酸乙酯，得到產(chǎn)物（S)-(+)_l，2, 3, 4-四氫-1-萘 酚，反應(yīng)轉(zhuǎn)化率98-99 %，產(chǎn)品收率96-97 %，對(duì)映體過量率98. 5-99 %。2. 權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于濕黃藍(lán)狀菌細(xì)胞制備過程如下：黃藍(lán)狀菌ATCC 58679,經(jīng)斜面、搖瓶、種子罐培養(yǎng)得到種子液；發(fā)酵罐加入培養(yǎng)液，121°C高壓滅菌30分鐘， 冷卻至26-27°C，將黃藍(lán)狀菌種子液接種至發(fā)酵罐，接種比例為9-10 %，通氣比為0. 9-1V/ (V分鐘)，26-27°C培養(yǎng)41-45小時(shí)，用過濾式離心機(jī)離心得到濕黃藍(lán)狀菌細(xì)胞，用作生物催 化反應(yīng)催化劑；發(fā)酵罐中培養(yǎng)液成份為：玉米漿（以干物質(zhì)計(jì)）含量為35-45g/L，黃豆粉 3-4g/L，酵母浸膏8-10g/L，葡萄糖18-22g/L，麥芽浸膏20-25g，硫酸銨0.5-0. 7g/L，硫 酸鎂0.3-0. 4g/L，磷酸二氧鉀1.8-2. 3g/L，碳酸鈣0.7g/L，硫酸亞鐵0.18g/L，硫酸錳 0? 025g/L;pH4. 4。
【專利摘要】一種黃藍(lán)狀菌細(xì)胞生物催化制備？(S)-(+)-1,2,3,4-四氫-1-萘酚的方法，反應(yīng)罐中加入磷酸鹽緩沖液，用黃藍(lán)狀菌細(xì)胞進(jìn)行生物催化反應(yīng)，產(chǎn)品收率高，對(duì)映體過量率高，解決了現(xiàn)有方法生產(chǎn)的困難。
【IPC分類】C12P7/22, C12R1/01
【公開號(hào)】CN105177060
【申請(qǐng)?zhí)枴?br>【發(fā)明人】田璐, 劉均洪
【申請(qǐng)人】青島科技大學(xué)
【公開日】2015年12月23日
【申請(qǐng)日】2015年9月7日