DZU(：18色譜柱；流動(dòng)相：比例為32 :68的乙腈-0. 5%醋酸溶 液；檢測波長：206nm ;柱溫：22°C ;流速：1. 2mL?minS進(jìn)樣量：10yL ; (2) 對(duì)照品溶液制備：精密稱取80°C干燥至恒重的虎兒草苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解 制成每lmL含0.2mg的對(duì)照品洛液； (3) 供試品溶液的制備：精密稱取本發(fā)明藥物10mL，用水飽和的正丁醇振搖提取5次， 每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶劑至干， 殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取濾液，即得供試品 溶液； (4) 測定：分別精密量取上述供試品溶液、對(duì)照品溶液各10yL，注入高效液相色譜儀， 進(jìn)行檢測。
[0026] 本發(fā)明所述的藥物可用于制備治療羊口瘡藥物。
[0027] 實(shí)驗(yàn)一：本發(fā)明藥物治療羊口瘡的試驗(yàn)研究 1材料與方法 1. 1材料 1. 1. 1藥材與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 試驗(yàn)羊只（n=3〇)購自連云港市云臺(tái)農(nóng)場養(yǎng)殖戶，為1歲齡未免疫健康羊只。
[0028] 1. 1. 2受試藥物的制備 本發(fā)明藥物搽劑 處方：亮葉冬青50g，豬鬃草100g，鼠尾草25g，羅勒25g; 制備方法：取干燥的亮葉冬青、豬鬃草、鼠尾草、羅勒第一次加llOOmL水浸泡1小時(shí)，煎 煮1小時(shí)，第二次加400mL，煎煮1小時(shí)，合并水煎液，濾過，濾液加50%乙醇至100mL，得本 發(fā)明藥物搽劑。
[0029] 對(duì)比藥物A搽劑 處方：亮葉冬青200g 制備方法：取干燥的亮葉冬青200g，第一次加llOOmL水浸泡1小時(shí)，煎煮1小時(shí)，第二 次加400mL，煎煮1小時(shí)，合并水煎液，濾過，濾液加50%乙醇至100mL，得對(duì)比藥物A搽劑。
[0030] 對(duì)比藥物B搽劑 處方：豬鬃草200g 制備方法：取干燥的豬鬃草200g，第一次加llOOmL水浸泡1小時(shí)，煎煮1小時(shí)，第二次 加400mL，煎煮1小時(shí)，合并水煎液，濾過，濾液加50%乙醇至100mL，得對(duì)比藥物B搽劑。
[0031] 1.2 方法 將30只試驗(yàn)羊只隨機(jī)分為3組，每組10只，適應(yīng)飼養(yǎng)條件后，在下唇內(nèi)側(cè)用注射針頭 劃線，用羊口瘡痂塊毒感染試驗(yàn)羊只，建立羊口瘡病理模型。7d后口唇部形成膿皰。治療前 用透明硫酸紙描摹潰瘍面輪廓，方格法測定潰瘍面積，然后用滅菌脫脂棉球拭去膿皰及膿 液，I組用本發(fā)明藥物涂抹患處治療，II組用對(duì)比藥物A搽劑涂抹患處治療，III組用對(duì)比藥 物B搽劑涂抹患處治療，均為每日早1晚各1次。用藥4d后測定治療后潰瘍面積，并計(jì)算 潰瘍面愈合百分率(愈合率)。
[0032] 其計(jì)算公式： 潰瘍面愈合率=(用藥前潰瘍面積-用藥后潰瘍面積）/用藥前潰瘍面積X100% 1. 3數(shù)據(jù)分析 利用Excel對(duì)用藥4d后的潰瘍面愈合率進(jìn)行方差分析。
[0033] 2結(jié)果與分析 三種受試藥物治療羊口瘡病理模型，試驗(yàn)結(jié)果見表1，方差分析與多重比較分別見表2 表3。由表2可見，F(xiàn)=121.91 >FaQ1，即P< 0. 01，說明該試驗(yàn)的處理平均數(shù)間有極顯著性 差異。
[0034] 由表3可見，試驗(yàn)I組與II組，I組與III組，II組與III組之間差異均極顯著（P < 0.01)，說明本次試驗(yàn)三種藥物在治療人工感染羊口瘡時(shí)，本發(fā)明藥物顯著優(yōu)于對(duì)比藥 物。
[0035] 表1三種藥物治療羊口瘡試驗(yàn)結(jié)果/%
表2方差分析結(jié)果
表3多重比較結(jié)果
注："林，，表示差異極顯著（P< 0.01)。
[0036] 3 結(jié)論 從本試驗(yàn)的結(jié)果來看，三種藥物均可用于羊口瘡的治療，但本發(fā)明藥物的治療效果明 顯優(yōu)于對(duì)比藥物，說明本發(fā)明藥物配伍精良，產(chǎn)生了明顯的協(xié)同增效作用。
[0037] 實(shí)驗(yàn)二：本發(fā)明藥物的質(zhì)量檢測方法研究 1儀器與試藥 1. 1儀器 高效液相色譜儀（AgilentllO高效液相色譜儀及工作站，G1311Aquat栗，G1314紫外檢 測器)。
[0038] 1. 2 試藥 虎兒草苷（saxifragin)對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定研究院）；本發(fā)明中藥組合物； 中藥材(康濟(jì)連鎖藥店提供）；甲醇(色譜醇，上海生化工助劑廠）；其他試劑為分析純。
[0039] 2方法與結(jié)果 2. 1處方 亮葉冬青500g，豬鬃草500g，鼠尾草250g，羅勒250g; 2. 2制備 取干燥的亮葉冬青500g，豬鬃草500g，鼠尾草250g，羅勒250g;第一次加1lOOOmL水浸 泡1小時(shí)，煎煮1小時(shí)，第二次加4000mL，煎煮1小時(shí)，合并水煎液，濾過，濾液濃縮，干燥，即 得。
[0040] 2. 3虎兒草苷的含量測定 2. 3. 1HPLC色譜條件 采用SHIMADZUC1S (5ym，4. 6mmX150. 0mm)色譜柱；流動(dòng)相：比例為32 :68的乙 腈-0. 5%醋酸溶液；檢測波長：206nm;柱溫：22°C;流速：1. 2mLS進(jìn)樣量：10yL;在該 色譜條件下，對(duì)照品及樣品色譜峰良好，無豬鬃草陰性對(duì)照對(duì)測定無干擾。
[0041] 2. 3. 2對(duì)照品溶液的制備 精密稱取80°C干燥至恒重的虎兒草苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每lmL含0.2mg的溶液。
[0042] 2. 3. 3供試品溶液與陰性對(duì)照液的制備 精密稱取本發(fā)明藥物10mL，用水飽和的正丁醇振搖提取5次，每次20mL，合并正丁醇提 取液，用氨試液洗滌3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移 至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勾，濾過，取濾液即得；另按處方比例制備不含豬鬃草 的陰性對(duì)照品，同法制成陰性對(duì)照液。
[0043] 2. 3. 4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取80 °C干燥至恒重的虎兒草苷對(duì)照品適量，用甲醇制成10. 4, 20. 8,41. 6， 83. 2,166. 4ygmL1系列濃度的溶液，分別精密量取上述5種濃度溶液各10yL，注入高效液 相色譜儀進(jìn)行測定。
[0044]以峰面積比值與濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：A=21.2762C-0. 1393， r=0. 9998。表明虎兒草苷在10. 2~166. 1ygmL1濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
[0045] 2. 3. 5穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10yL，分別于0,1，2,4,8h進(jìn)樣，并計(jì)算虎兒草苷含量。結(jié)果7h內(nèi)RSD為0. 44% (n=5)。表明樣品溶液在7h內(nèi)穩(wěn)定。
[0046] 2. 3. 6重復(fù)性試驗(yàn) 按供試品溶液制備方法平行處理樣品5份，依法測定虎兒草苷含量并計(jì)算。結(jié)果測得 虎兒草苷平均含量為0. 14mg?g\RSD為1. 2%。
[0047] 2. 3. 7精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取虎兒草苷對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，依法測定峰面積。結(jié)果RSD為0. 24% (n=5)。表明精密度較好。
[0048] 2. 3. 8回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已知虎兒草苷含量的同一批號(hào)的樣品6份，按高、中、低濃度分別精密加入適 量的虎兒草苷對(duì)照品溶液，按樣品測定項(xiàng)下操作，依法測定，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率 為 100. 2%，RSD為 0? 44% (n=5)。
[0049] 2. 3. 9樣品含量測定 分別量取對(duì)照品溶液和供試品溶液適量，用微孔濾膜濾過，各進(jìn)樣10yL，按上述色譜 條件測定3批樣品，平行測定5次。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品溶液虎兒草苷的含量。本 品含虎兒草苷應(yīng)為標(biāo)示含量的95%~105%，以每lg樣品含虎兒草苷計(jì)，不得少于0. 13mg。 3 批樣品含量分別為 100. 2% (RSD=1. 1%)，101. 3% (RSD=1. 2%)，99. 7% (RSD=1. 2%)。
[0050]
【具體實(shí)施方式】：