渣放在電熱恒溫干燥箱中，將其溫度調(diào)節(jié)到60 0C，恒溫干燥；當含水率低于1.5%時，把烘干的醬油渣放在手提式粉碎機中，粉碎5 min后，過60目篩，得到干渣樣品后，進行脫脂處理，即準確稱取2 g醬油渣放入100 mL燒杯中，再加入10 mL石油醚，用封口膠封住小燒杯杯口后，浸泡12小時，用移液槍除去石油醚，重復(fù)一至兩次，剩余部分放通風處自然干燥即可得到脫脂后的醬渣。
[0022]精確稱取脫脂后的醬油渣2 g放入100 mL小燒杯中，加入30 mL純水，將樣品用
0.1 mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH到4.5，放于微波-超聲波協(xié)同萃取儀中，超聲波(600 W)常開，微波功率50 W，間歇萃取時間為500 S0
[0023]將萃取之后的醬油渣與純水的混合液取lOOmL，利用0.1 mol/L的鹽酸將pH調(diào)至7.0，加入2.0g的木瓜蛋白酶，75 °C酶解70min后，加熱至160 °C，保持3 min將酶滅活；再利用0.1 mol/L的鹽酸將溶液pH調(diào)至5.0，加入4g的纖維素酶，50 °C酶解70 min后，再加熱至160 °C，保持3 min將酶滅活，抽濾后得到酶解液。
[0024]得到的酶解液進行抽濾，之后得所需濾液，將該濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，條件設(shè)定為70 °C、50 r/min，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到濃縮液。
[0025]取濃縮液5 mL,加入20 mL的95%乙醇進行醇沉，過夜放置。第二天將醇沉溶液等量放入離心管中，放入離心機中以4000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min，棄上清液，再加入純水溶解后，再以4000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min，再次棄去上清液。將沉淀物放入冷凍干燥機中冷凍干燥，得到可溶性膳食纖維粉末，經(jīng)過處理后待測樣品，用電子天平測定其重量，計算出可溶性膳食纖維的提取率為1.549%。
[0026]實施例3
所述的新鮮醬油渣取材于徐州恒順萬通食品釀造有限公司。
[0027]—種酶法輔助微波-超聲波協(xié)同提取醬油渣中可溶性膳食纖維的方法，其制備方法如下:
將新鮮醬油渣放在電熱恒溫干燥箱中，將其溫度調(diào)節(jié)到60 0C，恒溫干燥；當含水率低于1.5%時，把烘干的醬油渣放在手提式粉碎機中，粉碎5 min后，過60目篩，得到干渣樣品后，進行脫脂處理，即準確稱取2 g醬油渣放入100 mL燒杯中，再加入10 mL石油醚，用封口膠封住小燒杯杯口后，浸泡12小時，用移液槍除去石油醚，重復(fù)一至兩次，剩余部分放通風處自然干燥即可得到脫脂后的醬渣。
[0028]精確稱取脫脂后的醬油渣2 g放入100 mL小燒杯中，加入30 mL純水，將樣品用
0.1 mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH到4.5，放于微波-超聲波協(xié)同萃取儀中，超聲波(600 W)常開，微波功率50 W，間歇萃取時間為500 S0
[0029]步驟3)將萃取之后的醬油渣與純水的混合液pH調(diào)至6.5，加入Ig的木瓜蛋白酶，65 °C酶解60 min, 160 °C加熱3 min將酶滅活；再利用0.1 mol/L的鹽酸將溶液pH調(diào)至4.5，加入3g的纖維素酶，45 °C酶解50 min, 160 °C加熱3 min將酶滅活。
[0030]得到的酶解液進行抽濾，之后得所需濾液，將該濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，條件設(shè)定為70 °C、50 r/min，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到濃縮液。
[0031 ] 取濃縮液5 mL,加入20 mL的95%乙醇進行醇沉，過夜放置。第二天將醇沉溶液等量放入離心管中，放入離心機中以4000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min，棄上清液，再加入純水溶解后，再以4000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min，再次棄去上清液。將沉淀物放入冷凍干燥機中冷凍干燥，得到可溶性膳食纖維粉末，經(jīng)過處理后待測樣品，用電子天平測定其重量，計算出可溶性膳食纖維的提取率為1.671%。
【主權(quán)項】
1.一種酶法輔助微波-超聲波協(xié)同提取醬油渣中可溶性膳食纖維的方法，其特征在于:主要原料為醬油渣，其制備方法按如下步驟進行: 步驟I)預(yù)處理:將新鮮醬油渣放在電熱恒溫干燥箱中，溫度調(diào)節(jié)至60 °C，恒溫干燥，當含水率低于1.5%時，放入手提式粉碎機中，粉碎5 min后，過60目篩，得到醬油干渣；步驟2)醬渣脫脂:向步驟I)中的醬油干渣加入石油醚，以每克醬油干渣加入5 mL石油醚計，混合均勻，封膠封口 12小時后，用移液槍移除石油醚，重復(fù)1-3次，剩余部分放通風處自然干燥，制得脫脂后的醬油渣； 步驟3)微波-超聲波協(xié)同萃取:向經(jīng)過步驟2)處理的醬油渣中加入純水，按以每克醬油渣加入15 mL純水計，混合均勻；并加入0.1 mo I/L鹽酸溶液，調(diào)節(jié)pH到4.5，置于微波-超聲波協(xié)同萃取儀中，超聲波常開條件下即600 W，微波功率50 W，間歇萃取時間為500S，進行萃??； 步驟4)酶解:將萃取之后的醬油渣與純水的混合液，利用0.1 mol/L的鹽酸將pH調(diào)至5.0-7.0后，加入木瓜蛋白酶，以10mL混合液加入木瓜蛋白酶0.5-2.5g計，在55-75 °(:酶解40 mim-80 min后，加熱至160 °C恒溫3 min將酶滅活;再利用0.1 mol/L的鹽酸將溶液pH調(diào)至3.5-5.5后，加入纖維素酶，以10mL混合液加入l_4g纖維素酶計，在30-50 °C酶解30 mim-70 min后，再加熱至160 °C恒溫3 min將酶滅活，抽濾后得到酶解液； 步驟5)旋蒸:將步驟4)所得的酶解液，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，條件設(shè)定為溫度70 °C、轉(zhuǎn)速50 r/min，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到濃縮液，濃縮液體積為旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)前酶解液體積的1/5 ； 步驟6)醇沉:向步驟5)所得的濃縮液中，加入95%乙醇進行醇沉，其體積比為，濃縮液:95%乙醇=1:4，混合均勻，過夜放置18 h，第二天將醇沉溶液放于離心管中，并放入離心機，以4000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min，棄上清液，再加入純水溶解后，再以4000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min，再次棄去上清液，制得醇沉沉淀物； 步驟7)將步驟6)醇沉沉淀物放入冷凍干燥機中，冷凍干燥，即得到可溶性膳食纖維。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酶法輔助微波-超聲波協(xié)同提取醬油渣中可溶性膳食纖維的方法，其特征在于:所述的步驟4)酶解:將萃取之后的醬油渣與純水的混合液，利用0.1 mol/L的鹽酸將pH調(diào)至6.5，加入木瓜蛋白酶，以10mL混合液加入Ig木瓜蛋白酶計，在65 °C酶解60 min，加熱至160 °C恒溫3 min將酶滅活；再利用0.1 mol/L的鹽酸將溶液pH調(diào)至4.5，加入纖維素酶，以10mL混合液加入3g的纖維素酶計，在45 °C酶解50 min,加熱至160°C恒溫3 min將酶滅活，抽濾后得到酶解液。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種酶法輔助微波-超聲波協(xié)同提取醬油渣中可溶性膳食纖維的方法，采用醬油渣為主要原料，將新鮮醬油渣60℃恒溫干燥，粉碎過60目篩，石油醚脫脂后，加入純水，放于微波-超聲波協(xié)同萃取儀中，調(diào)節(jié)pH4.5，間歇萃取時間為500s；再加入木瓜蛋白酶，進行酶解，并加熱滅酶活后，再加入纖維素酶，進行酶解，對酶解液抽濾，濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得濃縮液，加入95%乙醇進行醇沉，然后對沉淀進行低溫冷凍干燥，制得可溶性膳食纖維。本發(fā)明提取工藝簡單，集中了微波-超聲波協(xié)同提取效率高、產(chǎn)品純度高，可操作性強，同時結(jié)合了生物酶的高效活性等優(yōu)點，提取時間短，具有廣闊的推廣應(yīng)用前景。
【IPC分類】A23L1/01, A23L1/025, A23L1/308, A23L1/238
【公開號】CN105166942
【申請?zhí)枴?br>【發(fā)明人】王陶, 李文, 何廣會, 劉恩岐, 董玉瑋, 張傳麗
【申請人】徐州工程學(xué)院
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年10月9日