一種用于組織培養(yǎng)紅葉黃連木的培養(yǎng)基、應(yīng)用及培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)基、應(yīng)用及培養(yǎng)方法，具體涉及利用組培技術(shù)生產(chǎn)紅葉黃連 木種苗的培養(yǎng)基、應(yīng)用及其培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 紅葉黃連木又名楷樹、楷木、黃楝樹等，屬漆樹科黃連木屬落葉喬木，成年樹高達(dá) 20m以上，材質(zhì)優(yōu)良，葉片隨季節(jié)變換而呈現(xiàn)不同色澤，花序紅色，極為美觀，宜作景觀綠化， 是一種多用途樹種。因其種子含油率42. 5%，出油率20%~30%，可提煉成生物柴油。近 年來，紅葉黃連木被國家列為"十一五"期間重點開發(fā)的主要生物質(zhì)能源樹種之一，極具發(fā) 展?jié)摿Α?br>[0003] 目前，紅葉黃連木主要通過播種和嫁接繁殖，但出芽率和成活率都不是很高，遠(yuǎn)不 能滿足國內(nèi)對種苗的需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 有鑒于此，本發(fā)明提供一種適用于組織培養(yǎng)紅葉黃連木的培養(yǎng)基、應(yīng)用及培養(yǎng)方 法，其可以有效的提高紅葉黃連木的出芽率、成活率，并且在保持優(yōu)良樹種的遺傳穩(wěn)定性的 同時，有效提高其繁殖系數(shù)。
[0005] 為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案提供的第一方面的技術(shù)方案為一種適 用于組織培養(yǎng)紅葉黃連木的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基分為初代培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng) 基；
[0006] 所述初代培養(yǎng)基由以下組分組成：MS、0. 5-1. 5mg/L6-芐基腺嘌呤、 0. 005-0. 015mg/L萘乙酸、0. 5-1. 5g/L聚乙烯吡咯烷酮、15-25g/L蔗糖、5. 5-6. 5g/L瓊脂；
[0007] 所述增殖培養(yǎng)基組分由以下組分組成：MS、1. 5-2. 5mg/L6-芐基腺嘌呤、 0.05-0. 15mg/L萘乙酸、15-25g/L蔗糖、5.5-6. 5g/L瓊脂；
[0008] 所述生根培養(yǎng)基組分由以下組分組成：1/2MS、0. 15-0. 25mg/L萘乙酸、 0. 75-0. 85mg/L3-吲哚丁酸、15-25g/L蔗糖、5. 5-6. 5g/L瓊脂、0. 15-0. 25mg/L活性炭；
[0009] 所述初代培養(yǎng)基滅菌前pH調(diào)至5. 5-6.5 ;所述增殖培養(yǎng)基滅菌前pH調(diào)至 5. 5-6. 5 ;所述生根培養(yǎng)基滅菌前pH調(diào)至5. 5-6. 0。
[0010] 優(yōu)選的，所述初代培養(yǎng)基由以下組分組成：MS、lmg/L6-芐基腺嘌呤、0. 01mg/L萘 乙酸、lg/L聚乙烯吡咯烷酮、20g/L蔗糖、6g/L瓊脂。
[0011] 優(yōu)選的，所述增殖培養(yǎng)基由以下組分組成：MS、2mg/L6-芐基腺嘌呤、0.lmg/L萘 乙酸、20g/L蔗糖、6g/L瓊脂。
[0012] 優(yōu)選的，所述生根培養(yǎng)基由以下組分組成：l/2MS、0.2mg/L萘乙酸、0.8mg/L3-吲 噪丁酸、20g/L鹿糖、6g/L瓊脂、0. 2mg/L活性炭。
[0013] 優(yōu)選的，所述初代培養(yǎng)基滅菌前pH調(diào)至6. 0 ;所述增殖培養(yǎng)基滅菌前pH調(diào)至6. 0， 所述生根培養(yǎng)基滅菌前pH調(diào)至6. 0。
[0014] 本申請還提供第二方面的技術(shù)方案為前述任一所述的培養(yǎng)基在組織培養(yǎng)紅葉黃 連木上的應(yīng)用。
[0015] 本申請還提供第三方面的技術(shù)方案為一種組織培養(yǎng)紅葉黃連木的培養(yǎng)方法，所述 培養(yǎng)方法包括以下步驟：
[0016] A、采集一年生半木質(zhì)化的紅葉黃連木的植物組織，先用洗滌劑溶液浸泡 15-25min，刷洗腋芽部位后放在流水下沖洗過夜；在無菌的操作臺上，先用75%酒精處理 20-40s，用無菌水清洗，再用0. 1 %的升汞處理8-12min，再用無菌水清洗，晾干得培養(yǎng)材 料；
[0017]B、將A步驟得到的培養(yǎng)材料接種到前述任一所述的初代培養(yǎng)基上，然后將所得培 養(yǎng)基在光照培養(yǎng)條件下進(jìn)行初代培養(yǎng)得分化出的芽；
[0018] C、將B步驟所得初代培養(yǎng)分化出的芽，在無菌操作臺上切取下來，放在前述任一 所述的增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)；
[0019] D、將紅葉黃連木增殖的叢生芽分離成單株，將其接種到前述任一所述的生根培養(yǎng) 基上，然后將所得培養(yǎng)基在光照培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
[0020] 優(yōu)選的，所述B步驟中光照培養(yǎng)的條件為溫度為25±2°C，光照2500Lx，光照時間 12h/d〇
[0021] 優(yōu)選的，所述D步驟中光照培養(yǎng)的條件為溫度為25±2°C，光照2500Lx，光照時間 12h/d〇
[0022] 優(yōu)選的，所述A步驟中植物組織為頂芽或腋芽莖段。
[0023] 優(yōu)選的，所述A步驟中無菌水清洗次數(shù)為3-7次。
[0024] 本申請?zhí)峁┑闹饕夹g(shù)方案即為用于組織培養(yǎng)紅葉黃連木的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基設(shè) 置為初代培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，三者采用特定的組培配方，從而有效用于紅葉 黃連木的組織培養(yǎng)，有效的提高紅葉黃連木的出芽率、成活率，并且在保持優(yōu)良樹種的遺傳 穩(wěn)定性的同時，有效提尚其繁殖系數(shù)。
[0025] 本申請所述培養(yǎng)基在培養(yǎng)紅葉黃連木上，或者采用本申請的培養(yǎng)方式，紅葉黃連 木組織7天左右有明顯的愈傷組織出現(xiàn)，14天左右愈傷組織開始生根，每株平均根數(shù)在3-4 根，根長在3cm以上。
[0026] 前述所述MS均指現(xiàn)有植物組培領(lǐng)域中常規(guī)使用的培養(yǎng)基MS組分，1/2MS即指常規(guī) 使用的培養(yǎng)基MS組分，并且大量元素減半，其余成份保持不變。
【附圖說明】
[0027] 圖1為紅葉黃連木增殖培養(yǎng)接種28天后組織情況；
[0028] 圖2為紅葉黃連木生根培養(yǎng)接種21天后組織情況。
【具體實施方式】
[0029] 為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合【具體實施方式】 對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
[0030] 本申請采用以下步驟對紅葉黃連木進(jìn)行組織培養(yǎng)：
[0031] A、采集一年生半木質(zhì)化的紅葉黃連木的植物組織，所述植物組織為頂芽或腋芽莖 段；先用洗滌劑溶液浸泡15-25min，刷洗腋芽部位后放在流水下沖洗過夜；在無菌的操作 臺上，先用75%酒精處理20-40S，用無菌水清洗，清洗次數(shù)為3-7次，再用0. 1 %的升汞處理 8-12min，再用無菌水清洗，清洗次數(shù)為3-7次，晾干得培養(yǎng)材料；
[0032]B、將A步驟得到的培養(yǎng)材料接種到初代培養(yǎng)基上，然后將所得培養(yǎng)基在光照培養(yǎng) 條件下進(jìn)行初代培養(yǎng)得分化出的芽；所述光照培養(yǎng)的條件為溫度為25±2°C，光照2500LX， 光照時間12h/d;所述初代培養(yǎng)基組分由以下組分組成：MS、0. 5-1. 5mg/L6-芐基腺嘌呤、 0. 005-0. 015mg/L萘乙酸、0. 5-1. 5g/L聚乙烯吡咯烷酮、15-25g/L蔗糖、5. 5-6. 5g/L瓊脂； 所述初代培養(yǎng)基滅菌前pH調(diào)至5. 5-6. 5 ;
[0033] C、將B步驟所得初代培養(yǎng)分化出的芽，在無菌操作臺上切取下來，放在增殖培養(yǎng) 基上進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)；所述增殖培養(yǎng)基組分由以下組分組成：MS、1. 5-2. 5mg/L6-芐基腺嘌 呤、0. 05-0. 15mg/L萘乙酸、15-25g/L蔗糖、5. 5-6. 5g/L瓊脂；所述增殖培養(yǎng)基滅菌前pH調(diào) 至 5. 5-6. 5 ;
[0034] D、將紅葉黃連木增殖的叢生芽分離成單株，將其接種到生根培養(yǎng)基上，然后將 所得培養(yǎng)基在光照培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)；所述光照培養(yǎng)的條件為溫度為25±2°C，光照 2500Lx，