血清糖化白蛋白含量測(cè)定方法及測(cè)定試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)療檢測(cè)領(lǐng)域，特別涉及一種血清糖化白蛋白含量測(cè)定方法及測(cè)定試 劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 血清糖化白蛋白在臨床上主要用于反映近期（過去2周至1個(gè)月）的血糖控制情 況。目前血清糖化白蛋白的測(cè)定主要采用酶法測(cè)定原理，分三步過程：1、先測(cè)定血清中的白 蛋白含量；2、再測(cè)定血清中的糖化白蛋白含量；3、最后通過計(jì)算，用步驟2的結(jié)果除以步驟 1的結(jié)果求得糖化白蛋白的百分比例。該檢測(cè)方法步驟復(fù)雜，需要專用的測(cè)量儀器，檢測(cè)時(shí) 間長，同時(shí)由于檢測(cè)的步驟多而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為了解決上述問題，本發(fā)明提供一種血清糖化白蛋白含量測(cè)定方法及測(cè)定試劑 盒。本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：利用現(xiàn)有自動(dòng)生化分析儀，簡化檢測(cè)步驟，一步法直接準(zhǔn) 確地測(cè)得血清糖化白蛋白的百分比例。
[0004] 為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明中采取的技術(shù)方案為：血清糖化白蛋白含量的測(cè)定 方法，包括以下步驟：
[0005] A.將待測(cè)血清樣本加入親水性納米聚苯乙烯顆粒緩沖液中，血清樣本中的白蛋白 和糖化白蛋白被無差別吸附在親水性納米聚苯乙烯顆粒表面；
[0006] B.在步驟A所得的混合液中加入鼠抗人糖化白蛋白單克隆抗體，形成納米顆 粒-糖化白蛋白-鼠抗人糖化白蛋白單克隆抗體復(fù)合體；
[0007] C.向步驟B所得的混合體系中加入羊抗鼠糖化白蛋白抗抗體，步驟B所得復(fù)合體 中的鼠抗人糖化白蛋白單克隆抗體與羊抗鼠糖化白蛋白抗抗體產(chǎn)生凝聚反應(yīng)，凝聚量與吸 附在親水性納米聚苯乙烯顆粒表面的糖化白蛋白的量成正比；
[0008] D.測(cè)定步驟C所得混合體系的吸光度的變化量，與吸光度變化校準(zhǔn)曲線相對(duì)照， 即可測(cè)得樣本中糖化白蛋白的含量占比。
[0009] 上述方案中，所述親水性納米聚苯乙烯顆粒緩沖液的摩爾濃度為50mM。
[0010] 上述方案中，所述步驟D中，在570-650nm波長下檢測(cè)吸光度的變化。
[0011] 本發(fā)明還公開了一種血清糖化白蛋白含量測(cè)定試劑盒，包括試劑R1、試劑R2和校 準(zhǔn)品，所述試劑R1包括親水性納米聚苯乙烯顆粒緩沖液和鼠抗人糖化白蛋白單克隆抗體， 所述試劑R2包括羊抗鼠糖化白蛋白抗抗體，所述校準(zhǔn)品為糖化白蛋白校準(zhǔn)液。
[0012] 上述方案中，所述親水性納米聚苯乙烯顆粒的粒徑為50-200納米。
[0013] 上述方案中，所述親水性納米聚苯乙烯顆粒緩沖液的摩爾濃度為50mM。
[0014] 上述方案中，所述鼠抗人糖化白蛋白單克隆抗體的重量占比為1~1. 5%。
[0015] 上述方案中，所述羊抗鼠糖化白蛋白抗抗體的重量占比為2. 0~2. 6%。
[0016] 上述方案中，所述試劑盒還包括質(zhì)控品，所述質(zhì)控品為糖化白蛋白質(zhì)控液。
[0017] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果在于：本發(fā)明提供一種血清糖化白蛋白含量測(cè)定方法及 測(cè)定試劑盒，能夠利用現(xiàn)有自動(dòng)生化分析儀，簡化檢測(cè)步驟，一步法直接準(zhǔn)確地測(cè)得血清糖 化白蛋白的百分比例。
【附圖說明】
[0018] 為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本 發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)性的前提下，還可 以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0019] 圖1為本發(fā)明在OLYMPUS AU400/640/2700/5400全自動(dòng)生化分析儀的參數(shù)設(shè)定表
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作進(jìn)一步描述。以下實(shí)施例僅 用于更加清楚地說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而不能以此來限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0021] 本發(fā)明是一種血清糖化白蛋白含量的測(cè)定方法，包括以下步驟：
[0022] A.將待測(cè)血清樣本加入親水性納米聚苯乙烯顆粒緩沖液中，血清樣本中的白蛋白 和糖化白蛋白被無差別吸附在親水性納米聚苯乙烯顆粒表面；
[0023] B.在步驟A所得的混合液中加入鼠抗人糖化白蛋白單克隆抗體，形成納米顆 粒-糖化白蛋白-鼠抗人糖化白蛋白單克隆抗體復(fù)合體；
[0024] C.向步驟B所得的混合體系中加入羊抗鼠糖化白蛋白抗抗體，步驟B所得復(fù)合體 中的鼠抗人糖化白蛋白單克隆抗體與羊抗鼠糖化白蛋白抗抗體產(chǎn)生凝聚反應(yīng)，凝聚量與吸 附在親水性納米聚苯乙烯顆粒表面的糖化白蛋白的量成正比；
[0025] D.測(cè)定步驟C所得混合體系的吸光度的變化量，與吸光度變化校準(zhǔn)曲線相對(duì)照， 即可測(cè)得樣本中糖化白蛋白的含量占比。
[0026] 本方法的原理是：在親水性納米聚苯乙烯試劑中加入血清樣本，樣本中的白蛋白 和糖化白蛋白被無差別吸附在親水性納米聚苯乙烯顆粒表面。吸附在親水性納米聚苯乙烯 顆粒表面的糖化白蛋白的量與樣本中的糖化白蛋白所占比率成正比。加入特異的鼠抗人糖 化白蛋白單克隆抗體，形成納米顆粒-糖化白蛋白-鼠抗人糖化白蛋白鼠單克隆抗體復(fù)合 體。這個(gè)復(fù)合體在羊抗鼠糖化白蛋白抗抗體的作用下產(chǎn)生凝聚反應(yīng)。凝聚量與吸附在親水 性納米聚苯乙烯顆粒表面的糖化白蛋白的量成正比。
[0027] 樣本中的糖化白蛋白所占比率通過凝聚量的變化來表示，所以根據(jù)測(cè)定吸光度的 變化量可以檢測(cè)糖化白蛋白所占比率。
[0028] 本發(fā)明還公開了一種血清糖化白蛋白測(cè)試試劑盒，包括試劑R1、試劑R2校準(zhǔn)品和 質(zhì)控品，試劑R1包括摩爾濃度為50mM的親水性納米聚苯乙烯顆粒緩沖液和質(zhì)量百分比濃 度為1. 3%的鼠抗人糖化白蛋白單克隆抗體，試劑R2包括質(zhì)量百分比濃度為2. 4%的羊抗 鼠糖化白蛋白抗抗體，校準(zhǔn)品為糖化白蛋白校準(zhǔn)液，質(zhì)控品為糖化白蛋白質(zhì)控液。試劑盒內(nèi) 的包裝規(guī)格為R140ml*l;R210ml*l，2-10°C避光密封保存。
[0029] 測(cè)試時(shí)，按照?qǐng)D1所示參數(shù)表設(shè)定奧林巴斯2700全自動(dòng)生化分析儀，校準(zhǔn)品濃度 和位置根據(jù)實(shí)際情況輸入。
[0030] 采取測(cè)試樣本待用，按照下表進(jìn)行測(cè)試：
[0031] 1、主/負(fù)波長：340/410nm反應(yīng)方法：終點(diǎn)法反應(yīng)方向：正
[0032]
[0033]
[0034] 然后通過合適的數(shù)學(xué)模型（非線性）
如Logit_log(4p)或SPLINE擬合多點(diǎn)定標(biāo) 的校準(zhǔn)曲線。樣品濃度值通過校準(zhǔn)曲線得出。
[0035] 本發(fā)明除了適用于奧林帕斯系列全自動(dòng)生化分析儀，還可適用于日立7180、7600 ; 貝克曼LX20 ;東芝40 ;杜邦RXL;雅培C8000全自動(dòng)生化分析儀。
[0036] 以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精 神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 血清糖化白蛋白含量的測(cè)定方法，其特征在于，包括以下步驟： A. 將待測(cè)血清樣本加入親水性納米聚苯乙烯顆粒緩沖液中，血清樣本中的白蛋白和糖 化白蛋白被無差別吸附在親水性納米聚苯乙烯顆粒表面； B. 在步驟A所得的混合液中加入鼠抗人糖化白蛋白單克隆抗體，形成納米顆粒-糖化 白蛋白-鼠抗人糖化白蛋白單克隆抗體復(fù)合體； C. 向步驟B所得的混合體系中加入羊抗鼠糖化白蛋白抗抗體，步驟B所得復(fù)合體中的 鼠抗人糖化白蛋白單克隆抗體與羊抗鼠糖化白蛋白抗抗體產(chǎn)生凝聚反應(yīng)，凝聚量與吸附在 親水性納米聚苯乙烯顆粒表面的糖化白蛋白的量成正比； D. 測(cè)定步驟C所得混合體系的吸光度的變化量，與吸光度變化校準(zhǔn)曲線相對(duì)照，即可 測(cè)得樣本中糖化白蛋白的含量占比。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的血清糖化白蛋白含量的測(cè)定方法，其特征在于，所述親水性 納米聚苯乙烯顆粒緩沖液的摩爾濃度為50mM。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的血清糖化白蛋白含量的測(cè)定方法，其特征在于，所述步驟D 中，在570-650nm波長下檢測(cè)吸光度的變化。4. 血清糖化白蛋白含量測(cè)定試劑盒，其特征在于，包括試劑Rl、試劑R2和校準(zhǔn)品，所述 試劑Rl包括親水性納米聚苯乙烯顆粒緩沖液和鼠抗人糖化白蛋白單克隆抗體，所述試劑 R2包括羊抗鼠糖化白蛋白抗抗體，所述校準(zhǔn)品為糖化白蛋白校準(zhǔn)液。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的血清糖化白蛋白含量測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述親水性 納米聚苯乙稀顆粒的粒徑為50-200納米。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的血清糖化白蛋白含量測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述親水性 納米聚苯乙烯顆粒緩沖液的摩爾濃度為50mM。7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的血清糖化白蛋白含量測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述鼠抗人 糖化白蛋白單克隆抗體的重量占比為1~1. 5%。8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的血清糖化白蛋白含量測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述羊抗鼠 糖化白蛋白抗抗體的重量占比為2. 0~2. 6%。9. 根據(jù)權(quán)利要求4~8任一所述的血清糖化白蛋白含量測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述 試劑盒還包括質(zhì)控品，所述質(zhì)控品為糖化白蛋白質(zhì)控液。
【專利摘要】本發(fā)明公開了血清糖化白蛋白含量的測(cè)定方法，在親水性納米聚苯乙烯膠體試劑中加入血清樣本，樣本中的白蛋白和糖化白蛋白被無差別吸附在親水性納米聚苯乙烯膠體顆粒表面；然后加入特異的鼠抗人糖化白蛋白單克隆抗體，形成納米顆粒-糖化白蛋白-鼠抗人糖化白蛋白鼠單克隆抗體復(fù)合體；該復(fù)合體在羊抗鼠糖化白蛋白抗抗體的作用下產(chǎn)生凝聚反應(yīng)，凝聚量與吸附在親水性納米聚苯乙烯膠體顆粒表面的糖化白蛋白的量成正比；根據(jù)測(cè)定吸光度的變化量可以檢測(cè)樣本中糖化白蛋白所占比率。本發(fā)明能夠利用現(xiàn)有自動(dòng)生化分析儀，簡化檢測(cè)步驟，一步法直接準(zhǔn)確地測(cè)得血清糖化白蛋白的百分比例。
【IPC分類】G01N33/68, G01N21/31
【公開號(hào)】CN104990879
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510391944
【發(fā)明人】董靜平
【申請(qǐng)人】董靜平
【公開日】2015年10月21日
【申請(qǐng)日】2015年7月2日