本發(fā)明涉及的是農作物品種身份證的構建方法，尤其涉及的是一種玉米二維碼分子身份證及其構建方法。
背景技術：
玉米(Zea Mays)是世界上重要的糧食、油料及其飼料作物。中國是世界上最大的玉米產量國和消費國之一，每年種植面積約2400萬公頃，總產量約1.15億噸，種植面積和總產量僅次于美國，位居世界第二，而且玉米產量總體呈不斷增長趨勢。人們對玉米的需求量越來越大，人們迫切的要求提高玉米的產量，然而玉米的產量與玉米的優(yōu)良性狀有著極其重要的關系，玉米育種工作對培育出高產與優(yōu)良的玉米品種有著密不可分的聯(lián)系。
品種是決定農作物產量和品質的內在因素，中國地域遼闊，生態(tài)環(huán)境和農業(yè)生產條件復雜多樣，因地制宜地推廣優(yōu)良品種是確保糧食增產的基本保障措施。近幾年來，隨著科技的進步，商品化的玉米品種不斷增多，種子市場上出現(xiàn)了一些雷同產品，這不僅僅給玉米的品種選育工作造成了一些困難，同時假冒偽劣的種子也會給農業(yè)生產造成嚴重的損失。對種子的規(guī)范管理是一個亟待解決的問題。
SSR分子標記是一種共顯性標記，具有遺傳方式簡單、操作簡便、多態(tài)性好、重復性好、穩(wěn)定可靠、檢測遺傳變異的能力強等特點，被廣泛應用于玉米的遺傳作圖構建、基因型鑒定與品種保護、種子純度鑒定和種質保護、多樣性研究、基因和QTL定位分析、系譜分析和分子標記輔助選擇育種等研究領域。隨著SSR技術的出現(xiàn)以及指紋鑒定技術的日益完善，構建農作物品種分子身份證，對品種的區(qū)別、鑒定和對比提供了方便。隆平206是市場上流通的種子產品，為了更好的保護隆平206的品質，我們構建了隆平206的分子身份證。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的不足，提供了一種玉米二維碼分子身份證及其構建方法，以解決現(xiàn)有的玉米雷同品種難以快速有效區(qū)分的技術問題，為玉米品種的選育和市場的規(guī)范化管理提供便利。
本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的：
本發(fā)明提供了一種玉米二維碼分子身份證，由數(shù)字或字母組成，包括由數(shù)字或字母編碼的審定地域信息、審定時間信息、分子指紋碼信息、商品信息和轉基因類型信息，所述分子指紋碼是通過分布在玉米10條染色體上的20對SSR核心引物進行PCR擴增，根據擴增產物的帶型構建獲得的，其中，每對SSR核心引物對應2個編碼，該2個編碼分別表示相應的SSR核心引物在二倍體玉米中擴增獲得的等位基因在該SSR核心引物的擴增多態(tài)性中的排名，排名在1-9位時，以1-9編碼，排名在9以上時，以A-Z編碼。
進一步地，所述玉米二維碼分子身份證為49位編碼，其中，1-2位表示審定地域，3-6位表示審定時間，7-46位表示分子指紋碼，47-48位表示商品信息，49位表示轉基因類型。
進一步地，所述20對SSR核心引物的序列為：
RM1：F：TTGACATCGCCATCTTGGTGACCA
R：TCTTAATGCGATCGAAGTTGTGGAA
RM2：F：TCTGATATCATAAAGGAGGACCG
R：GGAGCTTGCGCTTTTTAACA
RM3：F：GGGACAAAAGAAGAAGCAGAG
R：GAAATGGGACAGAGACAGACAAT
RM4：F：GGTGGTTCAGTGTGAAAGGTTA
R：AAGATTTCCGCAAGGTTAAAC
RM5：F：ACATACATAGGCTCCCTTTTTCCG
R：TCCCGTGACACTCTCTTTCTCTCT
RM6：F：CTGGGCAGACAGCAACAGTA
R：AGCCAAAGACATGATGGTCC
RM7：F：ACCGTGCATGATTAATTTCTCCAGCCTT
R：GACAGCGCGCAAATGGATTGAACT
RM8：F：CCTCTCGATGTTCTGAAGCC
R：GTCATAACCTTGCCTCCCAA
RM9：F：ATCTCACGTACGGTAATGCAGACA
R：CATGACCTGATAAACCCTCCTCTC
RM10：F：CTAGCTCCGTGTGAGTGAGTGTGAGT
R：TTCCTTCTTTCTTTCCTGTGCAAC
RM11：F：GCTTTCGTCATACACACACATTCA
R：ATGGAGCATGAGCTTGCATATTT
RM12：F：GATGTGGGTGCTACGAGCC
R：AGATCTCGGAGCTCGGCTA
RM13：F：CGGGAATGAATAAGCCAAGA
R：GCGCTCCTTCACCTTCTTTA
RM14：F：GCATACGGCCATGGATGGGA
R：TCCCTGCCGGGACTCCTG
RM15：F：AGACGAACCCACCATCATCTTTC
R：CGCTTGGCATCTCCATGTATATCT
RM16：F：CACCCGATGCAACTTGCGTAGA
R：TCGTCACGTTCCACGACATCAC
RM17：F：AGGGACAAATACGTGGAGACACAG
R：CGATCTGCACAAAGTGGAGTAGTC
RM18：F：AATCATGCGTAGGCGTAGCT
R：GCCAGAGGAAAAAGAAGGCT
RM19：F：AAGCGGGAATCTGAATCTTTGTTC
R：GAAATTGCTGGGGTTCTCATTTCT
RM20：F：ACAGCTCTTCTTGGCATCGT
R：GACTTTGCTGGTCAGCTGGT
所述玉米商品信息及其編碼包括：
NY/T 519 食用玉米—19
NY/T 520 優(yōu)質蛋白玉米—20
NY/T 521 高油玉米—21
NY/T 522 爆裂玉米—22
NY/T 523 甜玉米—23
NY/T 524 糯玉米—24
NY/T 597 高淀粉玉米—97
本發(fā)明還提供了上述玉米二維碼分子身份證的構建方法，包括以下步驟：
(1)提取玉米基因組DNA，分別利用所述20對SSR核心引物進行PCR擴增，將擴增產物進行毛細管電泳分析，并由毛細管電泳直接讀取條帶大小，獲得20組多態(tài)性片段；
(2)將20組多態(tài)性片段分別按照分子量大小的順序進行梯度排列，以阿拉伯數(shù)字1-9進行編碼，9以上排名以字母A-Z進行編碼；
(3)統(tǒng)計20組SSR核心引物對應的特異性等位基因在其相應的多態(tài)性片段中的排名，并以排名進行編號，獲得分子指紋碼；每組核心引物對應2個編碼，因此，所述分子指紋碼為40個數(shù)字或字母組成的編碼；
(4)將審定地域、審定時間、商品信息和轉基因類型分別進行編碼后，與分子指紋碼共同組成玉米二維碼分子身份證，最后，將數(shù)字/字母編碼的玉米二維碼分子身份證轉換為二維碼。
本發(fā)明相比現(xiàn)有技術具有以下優(yōu)點：本發(fā)明提供了一種玉米二維碼分子身份證及其構建方法，該方法篩選了20對具有代表性的SSR核心引物，并以此為基礎進行玉米二維碼分子身份證的構建，同時，該方法融合了玉米等位基因的信息，通過優(yōu)化編碼方式，最終構建獲得了二維碼化的玉米二維碼分子身份證，這些產品身份證可以有效區(qū)分不同品種的玉米，尤其對雷同產品的區(qū)分能力強，保證了種子的質量，二維碼化的分子身份證能夠通過信息終端直接讀取，為玉米的科學化和標準化管理提供便利。
附圖說明
圖1為生成的隆平206分子身份證二維碼。
具體實施方式
下面對本發(fā)明的實施例作詳細說明，本實施例在以本發(fā)明技術方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護范圍不限于下述的實施例。
實施例1
本實施例提供了玉米品種隆平206的分子身份證的構建獲得方法，具體為：
1、材料
所用引物均由上海捷瑞生物工程有限公司合成；Taq酶購置北京全式金公司；毛細管電泳相關的試劑盒購自TaKaRa公司；其余試劑均為國產分析純。下述實施例中所用方法如無特別說明均為常規(guī)方法。
2、方法
(1)利用全式金公司植物基因組試劑盒提取隆平206品種的基因組DNA，分別利用20對SSR核心引物進行PCR擴增，獲得20組多態(tài)性片段，其中：
PCR反應體系為：
PCR反應條件為：預變性：94℃10min；變性：94℃30s；退火：60℃30s；延伸：72℃1min，33個循環(huán)；總延伸：72℃10min。
PCR程序反應結束后，用1×Dillution Buffer稀釋12倍，并進行毛細管電泳分析，并由毛細管電泳直接讀取條帶大小，獲得20組多態(tài)性條帶。
(2)根據RM1-20這20對SSR核心引物擴增出來的多態(tài)性條帶，按照分子量從小到大，排列梯度，獲得如下表1(玉米多態(tài)性片段結果表)所示的結果，以阿拉伯數(shù)字1-9進行編碼，9個以上的等位基因，以大寫英文字母A、B、C代替。
(3)隆平206品種中，利用RM1-20SSR核心引物克隆獲得的特異性等位基因大小分別為192/192、192/222、398/398、134/134、141/148、153/153、131/131、164/164、66/81、104/128、109/109、107/107、116/135、164/164、138/138、160/160、127/143、161/161、94/109、173/173，對應在多態(tài)性條帶中的排序為3/3、2/6、1/1、2/2、1/2、1/1、1/1、1/1、1/3、2/4、1/1、2/2、1/2、2/2、1/1、6/6、1/2、1/1、1/3、2/2，對應的分子指紋碼為3326112212111111132411221222116612111322。
(4)將審定地域、審定時間、商品信息和轉基因類型分別進行編碼，具體為：
審定地域按照中國各省份行政代碼編碼：
本實施例的隆平206審定地域為安徽，編碼為34；
審定時間按照年度編碼，本實施例的隆平206審定年度為2007，編碼為2007；
商品信息按照玉米品種信息進行編號，具體品種信息及其編號如下：
NY/T 519 食用玉米—19
NY/T 520 優(yōu)質蛋白玉米—20
NY/T 521 高油玉米—21
NY/T 522 爆裂玉米—22
NY/T 523 甜玉米—23
NY/T 524 糯玉米—24
NY/T 597 高淀粉玉米—97
本實施例的隆平206類型為優(yōu)質蛋白玉米，編號為20；
轉基因類型編碼為：轉基因玉米編碼為T，非轉基因玉米編碼為P；
最終獲得的隆平206分子身份證為：
342007332611221211111113241122122211661211132220P
根據中國物品編碼相關標準規(guī)定，將隆平206分子身份證生成二維碼，結果如圖1所示。
(5)利用信息終端直接掃描二維碼，可獲得玉米隆平206的身份信息為：初審地區(qū)為安徽，審定時間為2007年，品種的分子指紋碼為3326112212111111132411221222116612111322，玉米類型為優(yōu)質蛋白玉米，為轉基因玉米。
以上實施例僅是為了充分說明本發(fā)明而列舉的較佳的實施方式，本發(fā)明的保護范圍不限于此，本領域技術人員在本發(fā)明的基礎上所作出的等同替代或變換，均在本發(fā)明的保護范圍之內。