用于制藥產(chǎn)業(yè)中的無菌試驗的當前藥典方法保持基于細菌培養(yǎng)（culture-based）并且包括14天的培育（incubation）期。

三磷酸腺苷（ATP）生物體發(fā)光是利用特異性底物和酶組合，熒光素/熒光素酶來將微生物ATP從生長細胞分解并且產(chǎn)生可見光的完善的快速方法，所述可見光可以使用光度計來測量。已經(jīng)開發(fā)了若干商業(yè)系統(tǒng)以用于一系列制藥試驗應用，包括無菌試驗，特別地用于其中樣品中的非微生物ATP較少被關(guān)注的可過濾樣品。試驗時間可以大幅減少，因為培養(yǎng)基中的微生物生長的檢測通過ATP生物體發(fā)光而不是通過可見渾濁度來實現(xiàn)。典型地，等效于藥典試驗的那些的結(jié)果在7天或更短之內(nèi)可得到。

來自Merck Millipore的Milliflex?快速微生物學檢測和列舉系統(tǒng)同樣使用ATP生物體發(fā)光來檢測微生物細胞并且特別地設計用于監(jiān)視可過濾樣品中的微生物污染。其是自動化的，在生物體發(fā)光試劑的添加之后采用圖像分析技術(shù)來檢測直接在膜濾器的表面上生長的微群落。該系統(tǒng)被設計成是定量的，但是方法已經(jīng)被開發(fā)和驗證以將其用于快速無菌試驗。

比色的生長檢測方法依賴于作為在生長期間的微生物新陳代謝的結(jié)果（通常作為CO₂產(chǎn)物的結(jié)果）而在生長培養(yǎng)基中產(chǎn)生的顏色改變。商業(yè)比色化驗系統(tǒng)的示例，其可以用于無菌試驗，是來自bioMerieux的BacT/ALERT? 3D Dual-T微生物檢測系統(tǒng)。該系統(tǒng)是自動化的并且采用靈敏的顏色檢測和分析技術(shù)。其可以檢測需氧和厭氧細菌二者，以及酵母和霉菌。

所有活細胞產(chǎn)生小量的熒光（自體熒光）并且，這可以用于早在固體表面上生長的微群落對于裸眼可見之前檢測它們。該技術(shù)對于可過濾樣品特別有用，其中膜濾器可以在常規(guī)營養(yǎng)培養(yǎng)基上培育并且使用高度靈敏的成像系統(tǒng)進行掃描以檢測微群落，有時比使用傳統(tǒng)的群落計數(shù)方法早若干天。

自體熒光檢測已通過快速微生物系統(tǒng)被商業(yè)化為Growth Direct，其使用沒有放大的大面積CCD成像系統(tǒng)來檢測發(fā)展中的微群落。盡管尚未針對試驗無菌產(chǎn)品進行驗證，但是已建立了“概念驗證”。該系統(tǒng)是自動化的并且采用靈敏的顏色檢測和分析技術(shù)。其可以檢測需氧和厭氧細菌二者，以及酵母和霉菌。

另一方面，血細胞計數(shù)不依賴于微生物生長來檢測污染，而是替代地使用細胞標記技術(shù)來檢測活的微生物。該方案具有在數(shù)分鐘內(nèi)檢測大量的有機體（包括酵母和霉菌）的潛力。商業(yè)系統(tǒng)利用組合的熒光細胞標記和流式血細胞計數(shù)或固相血細胞計數(shù)來檢測活的微生物細胞。典型地，使用熒光染料或非熒光底物來標記細胞，其被轉(zhuǎn)換成活細胞中的熒色物。經(jīng)標記的細胞的檢測通過在流式細胞中（流式血細胞計數(shù)）或在諸如膜濾器的固相平臺上（固相血細胞計數(shù)）進行激光掃描而發(fā)生。AES Chemunex已開發(fā)了固相血細胞計數(shù)檢測系統(tǒng)。

WO 2011/125033 A1（PCT/IB2011/051481）公開了一種用于檢測瓊脂糖培養(yǎng)基或膜上的生物顆粒的集群的方法。該目前工藝水平的文獻的方法公開了確定表面的地形表示并且通過地形表示檢測限定有可能對應于生物顆粒的集群（即，微群落）的區(qū)的至少一個輪廓。

該方法旨在于其生長的早期階段檢測微群落，此時它們具有對于它們而言過小以至于無法對于裸眼可見的直徑（幾十微米的直徑，例如30μm或更?。?/p>

為了獲得表面的地形表示，將膜放置在打開的培養(yǎng)皿中并且在暴露于環(huán)境的同時對其進行掃描。這可能造成膜的附加污染。

另一方面，EP 1428018 B1公開了一種用于通過使用大面積成像檢測從原位細胞分裂得到的微群落來對活細胞編號的方法。基于該文獻的微生物列舉試驗包括用于在沒有標記試劑的情況下檢測細胞微群落的非破壞性無菌方法。這些方法允許純培養(yǎng)物的生成，其可以用于微生物識別和抗菌素耐藥性的確定。

COPAN公司在2011年4月呈現(xiàn)了一種在商標WASPLab之下的用于確定微群落的生長的設備。膜的圖像通過平面視圖攝影術(shù)以及激光地形繪圖來取得。然后，在膜暴露于環(huán)境的同時獲得數(shù)據(jù)。該方法因而不適合于無菌試驗。

所有的以上方法要么依賴于開放設備中的檢測、附加試劑的使用，要么過于緩慢以至于無法順應針對無菌試驗的當今要求。

最近，WO 2014/005669 A公開了優(yōu)選地用于無菌試驗的一種樣品制備設備，包括包含用于過濾單元的一個或多個容器的歧管，優(yōu)選地用于培養(yǎng)基容納物/小瓶的一個或多個附加容器，以及至少一個入口和/或出口端口。（一個或多個）容器分別設有一個或多個連接器以用于當其插入到相應容器中時建立與過濾單元和培養(yǎng)基容納物/小瓶的配對端口的流體連通（communication）。連接器經(jīng)由歧管中限定的通道與（一個或多個）入口和出口端口流體連通以允許通過歧管的期望的流體輸送。過濾單元包括限定膜支撐物的底部、用于與底部限定膜腔體并且從環(huán)境密封膜腔體的可移除蓋，以及至少一個入口端口和至少一個出口端口，其分別從過濾單元的外部可接入并且當其提供在膜支撐物上時在膜的上游和下游位置處與膜腔體連通。（一個或多個）入口和出口端口分別設有密封機構(gòu)，其被形成以便在與外部容器上的配對連接器（優(yōu)選地，樣品制備設備的歧管的連接器）連接時打開，并且以便在斷開時可自動重密封。

本發(fā)明的目的是提供一種用于無菌試驗的新方法和對應裝置，其允許在閉合設備中的微群落和微生物的快速檢測而沒有通過環(huán)境的污染的風險并且不使用附加的試劑。

以上目的通過根據(jù)權(quán)利要求1的方法和根據(jù)權(quán)利要求12的裝置來實現(xiàn)。從屬權(quán)利要求涉及本發(fā)明的不同有利方面。

根據(jù)本發(fā)明，提供了一種用于檢測在閉合設備中的樣品的瓊脂糖培養(yǎng)基或膜上生長的微群落的方法。該方法包括步驟：

從閉合設備外部利用以關(guān)于瓊脂糖培養(yǎng)基的表面或膜的法線的角度β入射的光來輻射樣品；

從閉合設備外部借助于光接收元件使用與關(guān)于瓊脂糖培養(yǎng)基的表面或膜的法線的角度β不同的成像角度α來對瓊脂糖培養(yǎng)基的表面或膜上的光的入射區(qū)域成像；

檢測從瓊脂糖培養(yǎng)基的表面或膜和/或膜上的微群落和/或瓊脂糖培養(yǎng)基上的微群落反射或散射回的光。

作為另外的方面，以上方法意圖使用電動光源，其中照射樣品的圖案為點、線、多個線、方形圖案、弧或圓圖案、十字圖案、多（方形/圓形）圖案、網(wǎng)格圖案或二維區(qū)域、圓點、矩形點或方形點，并且其中光接收元件包含像素傳感器的陣列。

作為另外的方面，以上方法包括以下步驟：使用三角測量方法基于光接收元件上的入射光的圖像的位置確定瓊脂糖培養(yǎng)基的表面或膜的入射區(qū)域的高度中的變化。

作為另外的方面，以上方法意圖通過以下來檢測污染物，像微群落：通過使用接收到針對像素傳感器的像素陣列的每一行或列的光強度峰值附近的閾值以上的信號電平的像素的數(shù)目來確定來自瓊脂糖的表面或膜的反射、散射和/或漫射的光中的變化。

作為另外的方面，以上方法意圖通過以下來檢測微群落：通過使用像素傳感器的像素陣列的每一行或列的最高信號電平來確定從瓊脂糖的表面或膜反射、散射和/或漫射的光的峰值強度值中的變化。

作為另外的方面，以上方法意圖通過以下來檢測微群落：通過使用像素傳感器的陣列的信號電平來確定從瓊脂糖的表面或膜反射、散射和/或漫射的光的強度值中的變化。

作為另外的方面，以上方法包括通過樣品相對于光接收元件的線性和/或旋轉(zhuǎn)移動來掃描瓊脂糖培養(yǎng)基的表面或膜和/或膜上的微群落和/或瓊脂糖培養(yǎng)基上的微群落。

作為以上方法的另外的方面，樣品相對于光接收元件的相對移動通過一系列：線性移動——使入射區(qū)域從樣品的中心朝向其邊界移位——隨后是樣品繞其中心軸的旋轉(zhuǎn)移動——使入射區(qū)域從樣品的邊界朝向其中心移位；或者使入射區(qū)域從樣品的中心朝向其邊界移位——使入射區(qū)域從樣品的邊界朝向其中心移位——隨后是樣品繞其中心軸的旋轉(zhuǎn)移動來形成。

作為另外的方面，以上方法包括布置光源和光接收元件以便對瓊脂糖培養(yǎng)基的整個表面或整個膜進行照射和成像同時執(zhí)行樣品關(guān)于光源和光接收元件的相對運動。

作為另外的方面，在以上方法中，使入射區(qū)域從中心向邊界移位的線性移動的方向與光接收元件的成像方向之間的角度δ被設置成超過使入射區(qū)域從中心向邊界移位的線性移動的方向與激光的輻射方向之間的角度γ。

作為另外的方面，在以上方法中，使入射區(qū)域從中心向邊界移位的線性移動的方向與激光的輻射方向之間的角度γ被設置成超過使入射區(qū)域從中心向邊界移位的線性移動的方向與光接收元件的成像方向之間的角度δ。

作為另外的方面，本發(fā)明提供一種用于執(zhí)行前述方法中的任一個的無菌試驗裝置。

特別地，無菌試驗裝置配置用于檢測在閉合設備中的樣品的瓊脂糖培養(yǎng)基或膜上生長的微群落，并且包括：用于從閉合設備外部利用以關(guān)于瓊脂糖培養(yǎng)基的表面或膜的法線的角度β入射的光來輻射樣品的光源；用于從閉合設備外部借助于光接收元件使用與關(guān)于瓊脂糖培養(yǎng)基的表面或膜的法線的角度β不同的成像角度α來對瓊脂糖培養(yǎng)基的表面或膜上的光的入射區(qū)域成像的光接收構(gòu)件；以及用于檢測從瓊脂糖培養(yǎng)基的表面或膜和/或膜上的微群落和/或瓊脂糖培養(yǎng)基上的微群落反射、散射和/或漫射的光的構(gòu)件。

本發(fā)明的另外的方面的無菌試驗裝置具有光源，其為被配置成輻射照射樣品的圖案的電動光源，所述圖案為點、線、多個線、方形圖案、弧或圓圖案、十字圖案、多（方形/圓形）圖案、網(wǎng)格圖案或二維區(qū)域、圓點、矩形點或方形點，并且光接收元件包含像素傳感器的陣列。

本發(fā)明的另外的方面的無菌試驗裝置包括用于通過樣品相對于光接收元件的線性和/或旋轉(zhuǎn)移動掃描瓊脂糖培養(yǎng)基的表面或膜和/或膜上的微群落和/或瓊脂糖培養(yǎng)基上的微群落的構(gòu)件。

特別地，針對地形其自身本發(fā)明可以利用3D攝像機。此外，3D攝像機的2D成像能力可以用于提供附加信息。例如，由攝像機記錄的“質(zhì)量圖”（即，線內(nèi)的最高灰度值）可以與地形同時使用?？商鎿Q地或此外，由攝像機記錄的“寬度圖”（即，線寬）可以與地形同時使用。

根據(jù)本發(fā)明，單獨使用高度測量或利用與其它信號（像2D圖片、質(zhì)量圖或?qū)挾葓D）的組合是可能的。

在下文中，將參照附圖來描述本發(fā)明的優(yōu)選實施例。

圖1是激光源和3D攝像機關(guān)于樣品的布置的示意性視圖；

圖2是在入射區(qū)域靠近樣品的邊界時的根據(jù)權(quán)利要求1的示意性視圖；

圖3是圖示一方面的樣品與另一方面的光源和3D攝像機之間的掃描移動的示意性視圖；以及

圖4示出使用本發(fā)明的樣品的掃描的結(jié)果。

在下文中，將參照以上提到的圖來描述用于實現(xiàn)本發(fā)明的示例。

本發(fā)明涉及一種方法，其用于通過被實現(xiàn)以便避免任何“死區(qū)”和“偽像”的地形測量而一般檢測在閉合設備（像WO 2014/005669 A中描述的那些）中的膜（或瓊脂糖培養(yǎng)基）上生長的微群落并且適合于無菌試驗應用。

一方面，任何“死區(qū)”是假陰性結(jié)果的增加的風險并且將把檢測方法聲明為與無菌試驗應用不相關(guān)。另一方面，“偽像”將提高假陽性率然后將降低客戶接受度，因為經(jīng)濟后果將是未被污染的批次的報廢。

地形測量在用于無菌應用的常用膜上執(zhí)行，所述常用膜即用于關(guān)于抗生素或抗微生物制劑的產(chǎn)品的纖維素膜（HA膜）和聚偏二氟乙烯（PVDF或HV膜）膜的混合酯。

地形測量使用利用光（優(yōu)選地，LED光或激光）以及攝像機的幫助的三角測量方法。其避免由于閉合設備的邊界（垂直邊緣）處的光的多次反射導致的偽像，并且光總是由攝像機可見。

在優(yōu)選實施例中，“LED光”被用作光源，因為其防止在使用激光源時可能令人煩擾的斑紋效應。LED光可以被布置為LED條。

利用LED可得到的典型波長為近UV（即，405nm）、藍色（即，465nm）、或綠色（即，525nm）。然而，本發(fā)明不限于這些波長。

第一試驗示出了465nm的波長比其它波長在HV膜上產(chǎn)生更少的噪聲。

圖1和2示出提供在閉合設備3中的膜1，包括一起形成樣品5的透明蓋15。利用來自發(fā)光設備13（例如，激光源）的光輻射樣品5。激光源13通過透明蓋15朝向樣品5的閉合設備3中的膜1輻射激光，以便獲得膜上的入射區(qū)域7。

光接收元件9，其在實施例中為包括像素傳感器的陣列的攝像機（3D攝像機），對光入射區(qū)域7成像。光接收元件9可以例如是CCD攝像機、CMOS攝像機、有源像素傳感器等。光入射區(qū)域7可以是點，線，一個、兩個、三個等線圖案，方形圖案，弧或圓圖案，十字圖案，多（方形/圓形）圖案，網(wǎng)格圖案或表面（圓點、矩形點、方形點）中的任一個。

激光源13和攝像機9一起安裝在支撐結(jié)構(gòu)17上以便具有關(guān)于彼此的經(jīng)限定且固定的位置關(guān)系。

作為示例，對于激光源13和光接收元件9的組合，分別地，可能使用具有405nm的波長的Keyence LJ-V 7060線激光掃描儀和作為具有8kHz的采樣率的光接收元件的CMOS。由掃描儀獲得的激光線的長度，即入射區(qū)域7，為大約15mm。掃描儀可以使用在距膜1 60mm的距離處。樣品5將被放置在包括旋轉(zhuǎn)臺和線性臺的運動臺上，所述運動臺可能設有夾具以抓取樣品5并且將其放置在工作臺上。

根據(jù)本發(fā)明，由攝像機的光軸關(guān)于膜表面上的法線，或激光的輻射方向與膜的表面上的法線形成的輻射角度β和成像角度α優(yōu)選地分別不同于零。此外，這些角度應當與彼此不同。

在一個優(yōu)選實施例中α=40°并且β=5°。

α和β的值可以在寬范圍中選擇。例如，激光源13和攝像機9的位置可以顛倒。

攝像機9與微群落檢測單元（未示出）連接，所述微群落檢測單元將接收從3D攝像機獲得的圖像信息并且處理該信息以檢測任何微群落。因此，通過檢測從瓊脂糖培養(yǎng)基的表面或膜和/或膜上的微群落和/或瓊脂糖培養(yǎng)基上的微群落反射、散射和/或漫射的光，并且通過處理和估計在3D攝像機上的檢測到的經(jīng)反射、散射和/或漫射的光的位置信息，可能確定微群落的存在。

微群落將具有垂直于膜的表面的方向上的某種生長。這可以被檢測到。

根據(jù)三角測量的公知等式，膜1的高度中的變化dZ可以通過以下公式獲得：

其中dX是光接收元件9上的入射區(qū)域的圖像的位置變化。

根據(jù)優(yōu)選實施例，激光或LED光源13發(fā)射光以便形成形式為膜的平坦部分上的Y方向上的線的光入射區(qū)域7。因此，通過執(zhí)行膜1與攝像機9和激光源13的支撐結(jié)構(gòu)17之間的相對移動，掃描膜1的經(jīng)限定的表面區(qū)域是可能的。

如下制備樣品5。首先，膜1被用于例如制藥過程中的液體的過濾過程。此后，樣品通過掃描膜的整個表面而不留下任何死區(qū)同時維持閉合設備3處于閉合狀態(tài)以便防止該階段處的污染來被用于無菌試驗。在本發(fā)明的可替換的實施例中，在過濾之后并且在無菌試驗之前，將樣品5放置在適當?shù)沫h(huán)境中以促進微群落在例如5天的時期內(nèi)的生長。

如果膜1位于閉合設備3中，則膜的邊界經(jīng)常直接與閉合設備3的邊緣或邊沿11相鄰。當掃描樣品時必須確保該邊緣或邊沿11在掃描規(guī)程期間不阻礙激光或光入射區(qū)域7的成像，使得不留下死區(qū)并且使得不發(fā)生由于邊緣或邊沿11導致的偽像。

圖2示出將這樣的邊緣或邊沿11與圖1的成像系統(tǒng)逼近的情況。根據(jù)本發(fā)明，總是確保入射光與實際掃描方向之間的角度γ大于90°。在逼近閉合設備3的邊緣或邊沿11的情況下，相同的關(guān)系適用于攝像機9的光軸與掃描方向之間的角度δ。

圖3示出在使用圖1或2中所示出的設備掃描期間樣品關(guān)于光源13和3D攝像機9的優(yōu)選相對移動的示例。在優(yōu)選示例中，掃描序列在于使用樣品5的線性工作臺位移來掃描條帶。當掃描到達其條帶末尾時，也就是說，當掃描到達閉合設備3的邊沿或邊緣11時，旋轉(zhuǎn)工作臺旋轉(zhuǎn)樣品5以便將激光放置在下一扇區(qū)上并且開始對下一條帶的掃描，然后在相反方向上移動樣品，也就是說以便使入射區(qū)域7從閉合設備的邊界朝向其中心移位。

該特殊掃描序列的優(yōu)點在于所掃描的微群落的形式將不失真或改變，因為掃描總是利用樣品相對于攝像機9的線性移動而執(zhí)行。

為了減少條帶的重疊，特別是在樣品5的中心處，在距中心限定距離處開始朝向樣品5的邊界的線性移動是可能的。距離取決于入射區(qū)域的寬度。膜1的中心處的剩余未經(jīng)掃描的區(qū)域應當具有與條帶的寬度類似的直徑。然后，膜的中心處的第一或最后掃描覆蓋該區(qū)域。因此，將利用如圖3中描繪的該特定序列掃描整個膜1。

掃描的數(shù)目取決于每一次掃描的寬度，相應地取決于入射區(qū)域的寬度和攝像機的視場。由于旋轉(zhuǎn)臺的定位誤差，經(jīng)掃描的條帶的最小數(shù)目應當為三或更多。

膜掃描是迅速的，例如47mm膜掃描可能花費少于1min，具有至少20μm的空間分辨率。

根據(jù)奈奎斯特-香農(nóng)采樣定理，對于給出25μm的空間間距（pitch）的設置，通常的信噪比允許開始檢測50μm大小的微群落。該理論關(guān)于圖像的分析聲明，要析解（resolve）的最小細節(jié)必須使用至少兩個像素來采樣。對于關(guān)于膜呈現(xiàn)低對比度的微群落，例如白色膜上的白色微群落，其意味著本發(fā)明能夠在裸眼之前檢測任何微群落。事實上，地形測量與顏色和對比度無關(guān)，而是僅關(guān)于形狀，即高度和直徑。

典型地，對于大多數(shù)細菌，這意味著它們在5天或更少的培育天之內(nèi)被檢測到。

可以利用HA或HV膜執(zhí)行用于無菌試驗的傳統(tǒng)樣品制備，因為這些膜類型利用＜600nm的激光波長來檢測。

本發(fā)明具有檢測所有種類的細菌像扭脫甲基桿菌、痤瘡丙酸桿菌、巴西曲霉、異型德克酵母、銅綠假單胞菌的能力。

作為可替換的掃描序列，當入射區(qū)域到達朝向樣品中心的線性移動的末尾時旋轉(zhuǎn)樣品是可能的。

在以上示例中，已將入射區(qū)域描述為線。然而，針對入射區(qū)域7使用多個線或不同形式是可能的，只要入射區(qū)域7的形式和掃描移動的序列確保完全掃描膜1的整個表面而沒有留下任何死區(qū)。

盡管已關(guān)于圓形膜1描述了以上示例，但是對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言清楚的是，可能使用其它形式的膜1，像矩形膜。掃描序列然后應當被相應地適應。

為了執(zhí)行通過閉合設備3的閉合蓋15的掃描，并且具有從透明、半透明或不透明膜反射的光，閉合設備3被布置成以便具有在蓋15與膜1之間的經(jīng)確定的距離、具有＜600nm（例如，465nm）的光波長，并且執(zhí)行對蓋15的經(jīng)反射、散射和/或漫射的光的掩蔽。

閉合設備3的蓋15與膜1之間的“遠”距離允許通過透明蓋15來檢測HA和HV膜或其它類型的膜上的任何微群落，即使這些膜在瓊脂培養(yǎng)基（液體或固體）上變成半透明。如所提到的，通過將蓋15放置在距膜的“遠”距離處，來自蓋15的激光線的發(fā)射將不撞擊攝像機9的傳感器并且將因而未被檢測。

如果，出于幾何原因，不可能維持膜1與蓋15之間的所要求的遠距離，則將可能的是設置攝像機9以便限定感興趣的區(qū)，其將包含膜1的信號，或換言之，將可能的是掩蔽傳感器上的來自蓋15的信號。

因此，根據(jù)本發(fā)明，攝像機9可以用于拍攝感興趣的區(qū)域的灰度二維圖片以便診斷每一個偽像的原因。在該方面，應當注意提供蓋15與膜1之間的合理距離以便穩(wěn)妥地區(qū)分由蓋15或提供在膜1上的微群落導致的偽像。這將幫助避免假陽性檢測。

盡管關(guān)于HV膜給出了以上描述，但是也可能使用其它種類的膜1，像HA膜。如果這些膜1具有相對平坦的表面，則對于給出檢測設備25μm的空間間距的設置，開始檢測大約50μm大小的微群落是可能的。

另外，對于關(guān)于膜呈現(xiàn)低對比度的微群落，例如白色膜上的白色微群落，其意味著在裸眼檢測將是可能的之前利用掃描儀檢測這些微群落將是可能的。

本發(fā)明因此允許在典型地5天或更少的培育時間之后以高可靠性來檢測微群落。

由相應膜1上的微群落中的一些給出的地形的示例在圖4中被描繪。

從地形的計算結(jié)果，可以確定感興趣的區(qū)域。

此外，以灰度或彩色形式的感興趣的區(qū)域的由攝像機9拍攝的二維圖像可以用于進一步區(qū)分微群落在膜1上生長的真正感興趣的區(qū)域與可能由蓋15處的灰塵、刮擦或微滴導致的偽像。

基于這些步驟，可以以可靠且迅速的方式完成膜的無菌估計。

根據(jù)第二優(yōu)選實施例，除用于三角測量的攝像機上的經(jīng)反射光的位置信息之外，在確定任何微群落的存在或缺失中涉及由攝像機獲得的附加圖像信息。

根據(jù)該第二實施例，微群落檢測單元利用由攝像機9獲得的彩色或灰度圖像，以便更有把握地區(qū)分偽像與真正的微群落。例如，微群落的檢測通過以下來執(zhí)行：通過使用針對像素傳感器的陣列的每一列的最高信號電平來確定瓊脂糖的表面或膜或者膜上的微群落或者瓊脂糖培養(yǎng)基上的微群落上的入射光的峰值強度值中的變化。

可替換地，污染物的檢測通過以下來執(zhí)行：通過使用像素傳感器的陣列的信號電平來確定瓊脂糖培養(yǎng)基的表面或膜或者膜上的微群落或者瓊脂糖培養(yǎng)基上的微群落上的入射光的強度值中的變化。

根據(jù)第三實施例，可能使用經(jīng)反射的光圖案的形式中的變化。例如，微群落的檢測通過以下來執(zhí)行：通過使用具有針對像素傳感器的陣列的每一列的光強度峰值附近的給定值以上的信號電平的像素的數(shù)目來確定瓊脂糖培養(yǎng)基的表面或膜或者膜上的微群落或者瓊脂糖培養(yǎng)基上的微群落上的入射光的寬度（例如，線的厚度）中的變化。

當然，第二和第三示例可以被組合以便完全利用由攝像機獲得的圖像的信息。

盡管已基于詳細示例描述了本發(fā)明，但是可能實現(xiàn)各種修改和變化。特別地，激光的波長不限于405nm。也可能使用其它激光波長，像450、465、525、532nm，不過優(yōu)選的是激光波長應當在600nm以下。

這些不同波長也可以和LED條共同使用。

此外，在所說明的第一實施例中，相應地關(guān)于膜的法線的入射角度被設置成5°。然而，該值可以更大或更小，只要其不同于零。以類似的方式，優(yōu)選的第一實施例中的攝像機的光軸的角度被設置為40°。該角度還可能具有不同的值。在此同樣地，重要的是關(guān)于膜表面的法線的角度不同于零。此外，兩個以上角度應當是不同的。

在優(yōu)選的第一實施例中，工作臺中的樣品的移動是線性和旋轉(zhuǎn)移動的序列。這具有以下優(yōu)點：在線性移動期間檢測到的微群落的形式將被準確地成像而沒有由于旋轉(zhuǎn)移動導致的失真。

然而，執(zhí)行其它種類的移動（例如，包括線性位移和旋轉(zhuǎn)的組合的移動）是可能的，只要裝置的圖像處理部分能夠重構(gòu)所掃描的區(qū)域的實際形式。