基于分子結(jié)構(gòu)預(yù)測有機(jī)化合物的牛血清白蛋白-水分配系數(shù)的方法及模型建立方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種基于分子結(jié)構(gòu)快速預(yù)測有機(jī)化合物牛血清白蛋白-水分配系數(shù)(logKBSA/W)的及模型建立方法，該方法采用以下的模型進(jìn)行牛血清白蛋白-水分配系數(shù)預(yù)測：logKBSA/W=0.747×logKow+0.476×EHOMO-0.024×CCR+0.870×q++0.007×CSEV+4.342；其中，logKow表示正辛醇-水分配系數(shù)，EHOMO表示最高占據(jù)分子軌道能，CCR表示核-核排斥能，q+表示最正凈電荷，CSEV表示Connolly溶劑排斥體積。本發(fā)明的有益效果是采用本發(fā)明方法可以快速預(yù)測多個(gè)種類的中性有機(jī)化合物在牛血清白蛋白和水之間的分配系數(shù)。所使用的分子結(jié)構(gòu)描述符容易獲得，回歸分析方法簡單，因此該方法方便快捷、成本低廉、性能優(yōu)異。
【專利說明】基于分子結(jié)構(gòu)預(yù)測有機(jī)化合物的牛血清白蛋白-水分配系數(shù)的方法及模型建立方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于面向環(huán)境生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)的定量結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系(QSAR)【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及開發(fā)了一種基于分子結(jié)構(gòu)快速預(yù)測有機(jī)化合物牛血清白蛋白-水分配系數(shù)(log/fBSA/w)的及模型建立方法，可以應(yīng)用于多種類型的中性有機(jī)化合物的預(yù)測。

【背景技術(shù)】
[0002]有機(jī)化合物進(jìn)入生物體內(nèi)后，在組織器官中的分配會(huì)顯著影響它們的生物富集、毒理動(dòng)力學(xué)和毒性作用。除了機(jī)體內(nèi)的脂肪組分對(duì)有機(jī)化合物的吸收和吸附外，蛋白質(zhì)成分的富集作用也對(duì)化合物在生物體內(nèi)的吸收和代謝發(fā)揮了重要作用。進(jìn)入血液的化合物會(huì)與血清白蛋白相結(jié)合，進(jìn)而影響其在血液中的分布、吸收、運(yùn)輸和代謝。因此，研究化合物在血清白蛋白和水相之間的分配，可以幫助我們更好的理解化合物與血清白蛋白之間的相互作用，是成功的進(jìn)行藥物設(shè)計(jì)和環(huán)境化合物毒理分析的基礎(chǔ)。
[0003]牛血清白蛋白(BSA)是研究化合物與蛋白質(zhì)大分子之間相互作用的代表性蛋白，常使用&SA/W來表征化合物在BSA和水相之間的平衡分配。目前#BSA/W值多數(shù)通過實(shí)驗(yàn)測定獲得，常用方法如固相微萃取結(jié)合氣相色譜法。但是實(shí)驗(yàn)測定耗時(shí)費(fèi)力，并受到標(biāo)準(zhǔn)樣品的限制。同時(shí)，根據(jù)美國化學(xué)文摘社CAS的統(tǒng)計(jì)，目前注冊(cè)化學(xué)品已經(jīng)超過8800萬種，其中絕大多數(shù)是合成有機(jī)物，對(duì)這些化學(xué)品逐一進(jìn)行實(shí)驗(yàn)測試，費(fèi)用極其昂貴，也無法滿足有毒有害化學(xué)品污染管理的“預(yù)先防范原則”。因此，亟需開發(fā)成本低廉、方便快捷的評(píng)估預(yù)測方法。
[0004]定量結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系(QSAR)可以根據(jù)分子結(jié)構(gòu)信息，預(yù)測化合物的^^_值，為開發(fā)快速預(yù)測方法提供了良好的思路。然而，目前報(bào)道的關(guān)于&^?的QSAR模型，在化合物的適用范圍、模型的預(yù)測能力以及實(shí)際應(yīng)用的可操作性等方面還存在問題。Wichmann等人(ffichmann, K., Diedenhofen, M., Klamt, A.Predict1n of blood-brainpartit1ning and human serum albumin binding based on C0SM0-RS σ -moments.Journal of Chemical Informat1n Modeling, 2006，47: 228 - 233)使用溶劑模型計(jì)算了 5個(gè)量子化學(xué)參數(shù)并建立了 92個(gè)藥物分子與血清白蛋白結(jié)合常數(shù)的QSAR模型，該模型預(yù)測性能不高，且可應(yīng)用的化合物種類有限，無法用于環(huán)境有機(jī)化合物的預(yù)測。deBruyn等人(deBruyn, A.M.H.，Gobasj F.A.P.The sorptive capacity of animal protein.Environmental Toxicology and Chemistry, 2007，26: 1803 - 1808)使用正辛醇-水分配系數(shù)1g^w建立了 36種化合物lBSA/w的QSAR模型，但該模型覆蓋的化合物范圍較小，預(yù)測性能較差。Endo 等人(Endo S.，Goss, K-U.Serum Albumin Binding of StructurallyDiverse Neutral Organic Compounds: Data and Models.Chemical Research inToxicology, 2011，24，2293 - 2301)基于多參數(shù)線性自由能關(guān)系(pp-LFER)建立了 83個(gè)有機(jī)化合物fBSA/w的QSAR模型，也同樣存在模型性能不高的問題，用于fBSA/w的預(yù)測可靠性較低?使用同樣的化合物，Golmohammadi 等人(Golmohammadi H.，Dashtbozorgi Z.，AcreeJr W.E.Predict1n of bovine serum albumin-water partit1n coefficients of awide variety of neutral organic compounds by means of support vector machine.Molecular Informatics, 2012, 31: 867-878)采用拓?fù)渲笖?shù)基于支持向量機(jī)發(fā)展了新的QSAR模型，該模型采用非線性方法，透明度不高，移植性差。
[0005]開發(fā)基于機(jī)理、性能優(yōu)良、算法簡單透明并且實(shí)用性強(qiáng)的&^?預(yù)測模型，評(píng)價(jià)和驗(yàn)證模型的預(yù)測能力和穩(wěn)定性，表征模型的應(yīng)用域，使其可用于應(yīng)用域內(nèi)化合物的&SA/W預(yù)測，將會(huì)有效彌補(bǔ)有機(jī)化合物基礎(chǔ)數(shù)據(jù)的缺失，為生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)提供數(shù)據(jù)支持和理論指導(dǎo)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了解決上述的技術(shù)問題，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種基于分子結(jié)構(gòu)預(yù)測有機(jī)化合物的牛血清白蛋白-水分配系數(shù)的方法，本發(fā)明的另外一個(gè)目的是提供基于分子結(jié)構(gòu)預(yù)測有機(jī)化合物的牛血清白蛋白-水分配系數(shù)模型的建立方法。本發(fā)明的方法具有高效快速、成本低廉、應(yīng)用范圍廣泛的特點(diǎn)。
[0007]為了實(shí)現(xiàn)上述的第一個(gè)目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案:
基于分子結(jié)構(gòu)預(yù)測有機(jī)化合物的牛血清白蛋白-水分配系數(shù)的方法，該方法采用以下的模型進(jìn)行牛血清白蛋白-水分配系數(shù)預(yù)測:
lo?fBSA/ff = 0.747Xlo?fow + 0.476XAhqmq - 0.024XCO? + 0.870X+ 0.007XCS5T+ 4.342 ；
其中，logA；w表示正辛醇-水分配系數(shù)，表示最高占據(jù)分子軌道能，表示核-核排斥能，4表示最正凈電荷，CSEV表示Connolly溶劑排斥體積。
[0008]作為優(yōu)選，所述的有機(jī)化合物包括烷烴、烯烴、鹵代烴、醇、苯酚、醚、酮、苯胺、脂肪胺、硝基化合物、多環(huán)芳烴、雜環(huán)化合物和苯的衍生物。
[0009]為了實(shí)現(xiàn)上述的第二個(gè)目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案:
基于分子結(jié)構(gòu)預(yù)測有機(jī)化合物的牛血清白蛋白-水分配系數(shù)的模型建立方法，該方法包括以下的步驟:
1)首先，選擇了來自于同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室使用相同方法測定的1g^svw值；整個(gè)數(shù)據(jù)集共包括75個(gè)中性有機(jī)化合物，log^BSA/ff的數(shù)值范圍為1.19^4.76，跨越3.6個(gè)數(shù)量級(jí)；
2)根據(jù)化合物在BSA和水相之間分配機(jī)理的分析，共選擇21種分子結(jié)構(gòu)描述符用于模型的構(gòu)建；所述的21種分子結(jié)構(gòu)描述符分別為平均分子極化率(〃)、偶極矩(//)、//2、標(biāo)準(zhǔn)生成熱(AZZf)、總能量(招)、電子能(/^)、核-核排斥能(CO?)、最低未占據(jù)分子軌道能該?)、最高占據(jù)分子軌道能(￡h_)、碳原子最負(fù)凈電荷(％_)、氫原子最正凈電荷(％+)、最負(fù)凈電荷(O、最正凈電荷(α?、C0SM0面積U、C0SM0體積、分子量QQ、Connolly溶劑可及分子表面積(C4A)、Connolly分子表面積(CM)、Connolly溶劑排斥體積(JOSEV)、橢圓度(O)和正辛醇-水分配系數(shù)1,? ；
使用M0PAC2012中的PM6算法對(duì)分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化并計(jì)算平均分子極化率(〃)、偶極矩(/O、//2、標(biāo)準(zhǔn)生成熱(AZZf)、總能量(招)、電子能(/^)、核-核排斥能(6--)、最低未占據(jù)分子軌道能該?)、最高占據(jù)分子軌道能仏_。)、碳原子最負(fù)凈電荷(qc_)、氫原子最正凈電荷(％+)、最負(fù)凈電荷fo_)、最正凈電荷fo+)、C0SM0面積0。_)和C0SM0體積15種量子化學(xué)描述符，使用ChemOffice 2010和EPI Suite分別計(jì)算分子量QQ >ConnoIIy溶劑可及分子表面積(C^)、Connolly分子表面積(_)、Connolly溶劑排斥體積、橢圓度(Ov)和正辛醇-水分配系數(shù)logA；w 6種性質(zhì)參數(shù)；
3)采用多元線性回歸MLR方法中的逐步回歸理論建立模型，具體過程由SPSS 17.0執(zhí)行；使用相關(guān)系數(shù)的平方r2和均方根誤差rms作為統(tǒng)計(jì)學(xué)指標(biāo)表征模型的擬合性能，使用預(yù)測相關(guān)系數(shù)的平方Qi表征模型的預(yù)測性能；
經(jīng)MLR分析得到的最優(yōu)模型為:
lo?fBSA/ff = 0.747Xlo?fow + 0.476 XEmm - 0.024 XCO? + 0.870 X + 0.QQl XCSEV+ 4.342 ；
其中，logA；w表示正辛醇-水分配系數(shù)，表示最高占據(jù)分子軌道能，表示核-核排斥能，Q+表示最正凈電荷，CSEV表示Connolly溶劑排斥體積。
[0010]作為優(yōu)選，所述的有機(jī)化合物包括烷烴、烯烴、鹵代烴、醇、苯酚、醚、酮、苯胺、脂肪胺、硝基化合物、多環(huán)芳烴、雜環(huán)化合物和苯的衍生物。
[0011]本發(fā)明模型的r2為0.901，rms為0.287，表明模型具有較好的擬合能力。通過模型中的幾個(gè)描述符能夠?qū)衔镌贐SA和水相之間分配的機(jī)理進(jìn)行合理解釋。模型的穩(wěn)定性和預(yù)測能力通過兩種方法來評(píng)價(jià)。首先是模擬外部驗(yàn)證，將原始數(shù)據(jù)集隨機(jī)分成兩個(gè)子集，使用一個(gè)子集和模型I中的5個(gè)分子結(jié)構(gòu)描述符重新建立模型，擬合結(jié)果為r2 = 0.885和rms = 0.297，應(yīng)用于另一個(gè)子集得到的預(yù)測結(jié)果為= 0.883和rms = 0.304。兩個(gè)子集統(tǒng)計(jì)學(xué)性能均與模型I非常接近，表明模型I是基于l0g^BSA/w與描述符之間的本質(zhì)相關(guān)而不是偶然相關(guān)得到的，是統(tǒng)計(jì)學(xué)穩(wěn)定的。第二種方法是去除10%化合物的交叉驗(yàn)證，結(jié)果為平均7= 0.854, rms = 0.309，也與模型擬合性能相差不多，再次證明了模型具有良好的穩(wěn)定性和預(yù)測能力。
[0012]使用Williams圖來確定高影響度化合物和離域點(diǎn)。以化合物描述符矩陣的Ai值作為橫坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)殘差為縱坐標(biāo)繪制Williams圖。Ai值大于警戒值(本模型為0.200)的化合物被診斷為高影響度化合物，離域點(diǎn)則定義為標(biāo)準(zhǔn)殘差的絕對(duì)值大于3的化合物。模型I有四個(gè)化合物是高影響度化合物，但是它們的標(biāo)準(zhǔn)殘差的絕對(duì)值都小于2，表明模型的泛化能力較強(qiáng)，對(duì)距離描述符矩陣中心較遠(yuǎn)的化合物也能精確預(yù)測。此外，模型I沒有離域點(diǎn)。綜上，模型的應(yīng)用域定義為:烷烴、烯烴、鹵代烴、醇、苯酚、醚、酮、苯胺、脂肪胺、硝基化合物、多環(huán)芳烴、雜環(huán)化合物和苯的衍生物。進(jìn)行1g/rBSA/w的預(yù)測時(shí)，如果某些化合物的h,值大于0.200，有可能得到不可靠的預(yù)測結(jié)果，則對(duì)于這些化合物模型I的使用要非常謹(jǐn)慎。
[0013]本發(fā)明的有益效果是采用本發(fā)明方法可以快速預(yù)測多個(gè)種類的中性有機(jī)化合物在牛血清白蛋白和水之間的分配系數(shù)。所使用的分子結(jié)構(gòu)描述符容易獲得，回歸分析方法簡單，因此該方法方便快捷、成本低廉、性能優(yōu)異。該發(fā)明所涉及的i0g/rBSA/w的預(yù)測方法的建立和驗(yàn)證嚴(yán)格依照經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織(OECD)規(guī)定的QSAR模型發(fā)展和使用的導(dǎo)則，使用該發(fā)明專利得到的1g^svw預(yù)測結(jié)果，可以為有機(jī)化學(xué)品的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)提供重要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
[0014]本發(fā)明提供的1gfesvw預(yù)測模型有如下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn):(I)極大拓展了 1g^svw預(yù)測模型的應(yīng)用范圍，適用于非常廣泛的有機(jī)化合物1g^svw的預(yù)測；(2)預(yù)測模型中的分子結(jié)構(gòu)描述符的計(jì)算和模型構(gòu)建簡單易實(shí)現(xiàn)，模型的實(shí)際應(yīng)用能力強(qiáng)；(3)模型是基于機(jī)理構(gòu)建的，穩(wěn)定性高，預(yù)測性能優(yōu)異。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1是log/fBSA/w預(yù)測值與實(shí)驗(yàn)值的對(duì)比圖。
[0016]圖2是log/fBSA/w的預(yù)測誤差值與實(shí)驗(yàn)值的擬合圖。
[0017]圖3是表征模型高影響度化合物和離域點(diǎn)的Williams圖。

【具體實(shí)施方式】
[0018]實(shí)施例1
正辛烷:采用Williams圖法計(jì)算得到其之值為0.065<A*(警戒值)=0.200，標(biāo)準(zhǔn)殘差(SE) = -0.284 > -3，說明此化合物在QSAR模型應(yīng)用域內(nèi)。采用MOPAC 2012的PM6算法，ChemOffice 2010和EPI Suite分別計(jì)算出5個(gè)描述符。
[0019]正辛烷的log/fBSA/w實(shí)驗(yàn)測定值為4.01 [L/kg]?；赒SAR模型預(yù)測步驟如下: lo?fBSA/ff = 0.747Xlo?fow + 0.476 XAhqmq - 0.024 XCO? + 0.870 X + 0.QQl XCSEV
+ 4.342 = 0.747X (5.81) + 0.476X (-10.434) - 0.024X (19.173) + 0.870X (0.078)+0.007 X (145.454) + 4.342 = 3.87。
[0020]實(shí)施例2
四氯乙烯:采用Williams圖法計(jì)算得到其之值為0.051<A*(警戒值)=0.200，標(biāo)準(zhǔn)殘差{SE、= 2.732 < 3，說明此化合物在QSAR模型應(yīng)用域內(nèi)。采用MOPAC 2012的PM6算法，ChemOffice 2010和EPI Suite分別計(jì)算出5個(gè)描述符。
[0021]四氯乙烯的log/fBSA/w實(shí)驗(yàn)測定值為2.40 [L/kg]。基于QSAR模型預(yù)測步驟如下: lo?fBSA/ff = 0.747Xlo?fow + 0.476XAhqmq - 0.024XCO? + 0.870X+ 0.007XCS5T
+ 4.342 = 0.747 X (3.40) + 0.476 X (-9.545) - 0.024 X (-6.035) + 0.870 X (0.029) +
0.007 X (90.284) + 4.342 = 3.14。
[0022]實(shí)施例3
芘:采用Williams圖法計(jì)算得到其之值為0.248>A* (警戒值)=0.200，標(biāo)準(zhǔn)殘差{SE、=-0.016 > -3，說明此化合物在QSAR模型應(yīng)用域內(nèi)，模型具有較好的泛化能力。采用MOPAC2012的PM6算法，ChemOffice 2010和EPI Suite分別計(jì)算出5個(gè)描述符。
[0023]芘的l0g/fBSA/w實(shí)驗(yàn)測定值為4.76 [L/kg]。基于QSAR模型預(yù)測步驟如下: lo?fBSA/ff = 0.747Xlo?fow + 0.476 XBmK - 0.024 XCO? + 0.870 X + 0.007 XCSBV
+ 4.342= 0.747 X (4.88) + 0.476 X (-8.397) - 0.024 X (48.446) + 0.870 X (0.854) +
0.007 X (161.662) + 4.342= 4.70。
[0024]實(shí)施例4
雌激素酮:采用Williams圖法計(jì)算得到其之值為0.218>A*(警戒值)=0.200，標(biāo)準(zhǔn)殘差{SE、= -1.674 > -3，說明此化合物在QSAR模型應(yīng)用域內(nèi)，但應(yīng)用于該化合物的預(yù)測要提高警惕。采用MOPAC 2012的PM6算法，ChemOffice 2010和EPI Suite分別計(jì)算出5個(gè)描述符。
[0025]雌激素酮的實(shí)驗(yàn)測定值為2.69 [L/kg]。基于QSAR模型預(yù)測步驟如下: lo?fBSA/ff = 0.747Xlo?fow + 0.476 XBmK - 0.024 XCO? + 0.870 X + 0.007 XCSBV+ 4.342 = 0.747 X (3.13) + 0.476 X (-9.143) - 0.024 X (93.446) + 0.870 X (0.303) +0.007 X (254.990) + 4.342 = 2.13。
【權(quán)利要求】
1.基于分子結(jié)構(gòu)預(yù)測有機(jī)化合物的牛血清白蛋白-水分配系數(shù)的方法，其特征在于該方法采用以下的模型進(jìn)行牛血清白蛋白-水分配系數(shù)預(yù)測:
lo?fBSA/ff = 0.747Xlo?fow + 0.476XAhqmq - 0.024XCO? + 0.870X+ 0.007XCS5T+ 4.342 ； 其中，logA；w表示正辛醇-水分配系數(shù)，表示最高占據(jù)分子軌道能，表示核-核排斥能，4表示最正凈電荷，CSEV表示Connolly溶劑排斥體積。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于分子結(jié)構(gòu)預(yù)測有機(jī)化合物的牛血清白蛋白-水分配系數(shù)的方法，其特征在于:有機(jī)化合物包括烷烴、烯烴、鹵代烴、醇、苯酚、醚、酮、苯胺、脂肪胺、硝基化合物、多環(huán)芳烴、雜環(huán)化合物和苯的衍生物。
3.基于分子結(jié)構(gòu)預(yù)測有機(jī)化合物的牛血清白蛋白-水分配系數(shù)的模型建立方法，其特征在于該方法包括以下的步驟: 1)首先，選擇了來自于同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室使用相同方法測定的1g^svw值；整個(gè)數(shù)據(jù)集共包括75個(gè)中性有機(jī)化合物，log^BSA/ff的數(shù)值范圍為1.19^4.76，跨越3.6個(gè)數(shù)量級(jí)； 2)根據(jù)化合物在BSA和水相之間分配機(jī)理的分析，共選擇21種分子結(jié)構(gòu)描述符用于模型的構(gòu)建；所述的21種分子結(jié)構(gòu)描述符分別為平均分子極化率(〃)、偶極矩(//)、//2、標(biāo)準(zhǔn)生成熱(AZZf)、總能量(招)、電子能(/^)、核-核排斥能(CO?)、最低未占據(jù)分子軌道能該?)、最高占據(jù)分子軌道能(￡h_)、碳原子最負(fù)凈電荷(％_)、氫原子最正凈電荷(％+)、最負(fù)凈電荷(O、最正凈電荷(α?、COSMO面積U、COSMO體積、分子量QQ、Connolly溶劑可及分子表面積(C4A)、Connolly分子表面積(CM)、Connolly溶劑排斥體積(JOSEV)、橢圓度(O)和正辛醇-水分配系數(shù)1,? ； 使用M0PAC2012中的PM6算法對(duì)分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化并計(jì)算平均分子極化率(〃)、偶極矩(/O、//2、標(biāo)準(zhǔn)生成熱(AZZf)、總能量(招)、電子能(/^)、核-核排斥能(6--)、最低未占據(jù)分子軌道能該?)、最高占據(jù)分子軌道能仏_。)、碳原子最負(fù)凈電荷(qc_)、氫原子最正凈電荷(％+)、最負(fù)凈電荷fo_)、最正凈電荷fo+)、C0SM0面積0。_)和C0SM0體積15種量子化學(xué)描述符，使用ChemOffice 2010和EPI Suite分別計(jì)算分子量QQ >ConnoIIy溶劑可及分子表面積(C^)、Connolly分子表面積(_)、Connolly溶劑排斥體積、橢圓度(Ov)和正辛醇-水分配系數(shù)logA；w 6種性質(zhì)參數(shù)； 3)采用多元線性回歸MLR方法中的逐步回歸理論建立模型，具體過程由SPSS17.0執(zhí)行；使用相關(guān)系數(shù)的平方r2和均方根誤差rms作為統(tǒng)計(jì)學(xué)指標(biāo)表征模型的擬合性能，使用預(yù)測相關(guān)系數(shù)的平方Qi表征模型的預(yù)測性能； 經(jīng)MLR分析得到的最優(yōu)模型為:
lo?fBSA/ff = 0.747Xlo?fow + 0.476 XEmm - 0.024 XCO? + 0.870 X + 0.QQl XCSEV+ 4.342 ； 其中，logA；w表示正辛醇-水分配系數(shù)，表示最高占據(jù)分子軌道能，表示核-核排斥能，Q+表示最正凈電荷，CSEV表示Connolly溶劑排斥體積。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于分子結(jié)構(gòu)預(yù)測有機(jī)化合物的牛血清白蛋白-水分配系數(shù)的模型建立方法，其特征在于:有機(jī)化合物包括烷烴、烯烴、鹵代烴、醇、苯酚、醚、酮、苯胺、脂肪胺、硝基化合物、多環(huán)芳烴、雜環(huán)化合物和苯的衍生物。
【文檔編號(hào)】G06F19/00GK104200056SQ201410251455
【公開日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年9月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月26日
【發(fā)明者】于海瀛, 陳偉, 郭婷 申請(qǐng)人:浙江師范大學(xué)