一種羊肉快速檢測(cè)卡的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及一種羊肉快速檢測(cè)卡，是一種快速檢測(cè)羊肉的檢測(cè)器具，屬于肉類檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]羊肉營(yíng)養(yǎng)豐富，肉質(zhì)鮮美，為全世界普遍的肉品之一。在中國(guó)更是大受歡迎，成為百姓羊肉肉質(zhì)與牛肉相似，但肉味較濃。羊肉較豬肉的肉質(zhì)要細(xì)嫩，較豬肉和牛肉的脂肪、膽固醇含量少。它既能御風(fēng)寒，又可補(bǔ)身體，對(duì)一般風(fēng)寒咳嗽、慢性氣管炎、虛寒哮喘、腎虧陽(yáng)瘺、腹部冷痛、體虛怕冷、腰膝酸軟、面黃肌瘦、氣血兩虧、病后或產(chǎn)后身體虛虧等一切虛狀均有治療和補(bǔ)益效果，最適宜于冬季食用，故被稱為冬令補(bǔ)品，深受人們歡迎。
[0003]由于羊肉市場(chǎng)廣闊，羊肉造假案時(shí)有發(fā)生。俗話說(shuō)“掛羊頭賣狗肉”，而今掛羊頭賣鴨肉、馬肉、豬肉、狐貍?cè)?、鼠肉、雞肉等“羊肉造假”問(wèn)題屢見(jiàn)不鮮，買到手里的羊肉到底是什么肉，相信不少人會(huì)產(chǎn)生這種疑問(wèn)，但是從表面上又看不出來(lái)。目前都是采用基因檢測(cè)，對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備要求高，方法操作復(fù)雜，對(duì)操作人員的專業(yè)知識(shí)要求高，只能在專業(yè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。因此研發(fā)一種準(zhǔn)確可靠又快速方便的檢測(cè)羊肉的檢測(cè)器具是非常必要的。
[0004]雖然也有公開(kāi)不需要特殊設(shè)備進(jìn)行肉類鑒定的方法，但都是基于基因檢測(cè)技術(shù)，例如:
[0005]對(duì)比文件CN102534035A公開(kāi)了一種快速鑒別牛羊肉的試劑盒，試劑盒由I組具有高特異性的引物、2X等溫反應(yīng)緩沖液、BstDNA聚合酶和染料共同組成，是利用LAMP技術(shù)和動(dòng)物線粒體DNA相結(jié)合對(duì)牛羊肉進(jìn)行鑒定的方法。
[0006]對(duì)比文件CN102337328A公開(kāi)了一種鑒別豬、牛、羊肉及其制品的方法，通過(guò)PCR技術(shù)和凝膠電泳技術(shù)，利用一對(duì)檢測(cè)引物鑒別生鮮豬牛羊的線粒體DNA，從而將豬、牛、山羊、綿羊區(qū)分開(kāi)來(lái)。
[0007]由于，羊肉中必定含有一定量的羊血，而羊血中的紅細(xì)胞的90%由血紅蛋白組成。一般，血紅蛋白(Hb)由珠蛋白和亞鐵血紅素結(jié)合而成，而每種動(dòng)物的血紅蛋白有同源性，但也存在差異，因此每種動(dòng)物的血紅蛋白具有一些獨(dú)特的抗原性?；诓煌瑏?lái)源的動(dòng)物血中的血紅蛋白的抗原性差異，可建立特異的免疫學(xué)檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)和鑒定。根據(jù)肉類中血紅蛋白的不同，可進(jìn)行肉類的區(qū)分。
[0008]本實(shí)用新型擬提供一種基于羊血紅蛋白免疫學(xué)的檢測(cè)器具，采取免疫學(xué)競(jìng)爭(zhēng)法的原理，結(jié)合膠體金(或乳膠顆粒)標(biāo)記技術(shù)和免疫層析法設(shè)計(jì)的一種快速檢測(cè)試劑，能快速特異地檢測(cè)肉類樣品中的羊血紅蛋白，從而判定肉類樣品是否為羊肉。根據(jù)檢測(cè)卡樣品檢測(cè)線(T)和質(zhì)控線(C)的有無(wú)顯色來(lái)判定樣品中是否為羊肉。反應(yīng)是利用羊血紅蛋白而建立的一種檢測(cè)方法，具有特異快速等優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)檢測(cè)卡操作簡(jiǎn)單快速，無(wú)需特殊的儀器設(shè)備，適合現(xiàn)場(chǎng)操作。由于樣本量需要少、簡(jiǎn)便快速，適用于大量樣本的篩查。結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高，準(zhǔn)確率大。【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0009]本實(shí)用新型的目的在于提供一種能快速檢測(cè)羊肉的檢測(cè)器具，直接應(yīng)用免疫學(xué)方法進(jìn)行檢測(cè)并確定肉類樣品中是否為羊肉，克服了現(xiàn)有基因檢測(cè)的操作繁瑣等缺點(diǎn)，建立基于免疫學(xué)特異性的檢測(cè)方法。
[0010]為解決本實(shí)用新型的技術(shù)問(wèn)題，所采用的技術(shù)方案如下:
[0011]—種羊肉快速檢測(cè)卡包括在長(zhǎng)條扁平薄殼狀的檢測(cè)卡外殼和設(shè)置在外殼中的測(cè)試條；所述檢測(cè)卡外殼表面有檢測(cè)窗孔和加樣孔；所述測(cè)試條是多層結(jié)構(gòu)的窄條薄片，由支承背板上通過(guò)不干膠在其上依次粘貼樣品墊、膠體金膜、硝酸纖維素膜、和吸水膜所組成；所述支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜，所述支承背板一端疊置粘貼吸水膜，另一端疊置粘貼樣品墊，所述吸水膜內(nèi)端與所述樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在所述樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜；所述膠體金膜為含抗羊血紅蛋白抗體膠體金標(biāo)記的玻璃纖維膜；所述硝酸纖維素膜上依次設(shè)有一條檢測(cè)帶和一條質(zhì)控帶，所述檢測(cè)帶為含抗羊血紅蛋白單克隆抗體的檢測(cè)帶；所述質(zhì)控帶為含抗鼠抗體的質(zhì)控帶；所述測(cè)試條置入檢測(cè)卡外殼內(nèi)，所述樣品墊正對(duì)加樣孔，所述硝酸纖維素膜正對(duì)檢測(cè)窗孔。
[0012]所述膠體金膜也可以為乳膠顆粒膜，所述乳膠顆粒膜為含抗羊血紅蛋白抗體乳膠顆粒標(biāo)記的玻璃纖維膜。
[0013]優(yōu)選地，所述檢測(cè)卡外殼由殼蓋與殼座兩半聯(lián)接構(gòu)成，所述檢測(cè)窗孔和加樣孔開(kāi)設(shè)在所述檢測(cè)卡外殼殼蓋上。
[0014]優(yōu)選地，所述長(zhǎng)條扁平薄殼狀的檢測(cè)卡外殼由長(zhǎng)70mm，寬20mm，厚5mm，薄殼壁厚Imm的工程塑料制成。
[0015]優(yōu)選地，所述測(cè)試條⑵片長(zhǎng)60mm，片寬4mm，厚度2.5mm。
[0016]優(yōu)選地，所述支承背板(21)，為聚氯乙稀塑料薄片，厚約0.5_，長(zhǎng)60_，寬4_。
[0017]優(yōu)選地，所述樣品墊(22)為吸水玻璃纖維膜，厚0.5-0.8mm，長(zhǎng)20mm，寬4臟。
[0018]優(yōu)選地，所述膠體金膜(23)厚0.5-0.8mm,長(zhǎng)5mm，寬4mm。
[0019]優(yōu)選地，所述硝酸纖維素膜(24)厚0.5mm，長(zhǎng)20_25mm，寬4mm ;所述檢測(cè)帶(241)和質(zhì)控帶(242)在所述硝酸纖維素膜(24)上橫向間隔開(kāi)排列。
[0020]優(yōu)選地，所述吸水膜(25)為吸水紙，厚0.5-0.8mm，長(zhǎng)16_20mm，寬4臟。
[0021]優(yōu)選地，所述膠體金膜(23)、樣品墊(22)及吸水膜(25)與所述硝酸纖維素膜
(24)的搭接長(zhǎng)度為1-2_。
[0022]采用上述羊肉快速檢測(cè)卡快速檢測(cè)羊肉的檢測(cè)方法，是應(yīng)用免疫學(xué)的方法直接檢測(cè)肉類樣品中羊血紅蛋白的含量，具體處理方法如下:
[0023]①提取樣品液:稱取1.0g切碎的肉類樣品，置于含有3ml反應(yīng)液的5ml反應(yīng)管中，混合均勻，室溫下反應(yīng)5分鐘，得到待檢測(cè)的樣品液，供羊肉檢測(cè)用；
[0024]所述反應(yīng)液的配方為:NH4C18.29g，NaHCO3 1.00g，Na2EDTA 37.2mg,蒸餾水1000ml ；
[0025]②檢測(cè)卡檢測(cè):先將待檢測(cè)的樣品液從所述加樣孔中滴注入所述羊肉快速檢測(cè)卡的樣品墊上，由于虹吸作用原理，帶動(dòng)待檢測(cè)的樣品液及膠體金膜所含的抗羊血紅蛋白抗體膠體金標(biāo)記物一起向所述硝酸纖維素膜擴(kuò)散，5-10分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。
[0026]③檢測(cè)結(jié)果對(duì)比:檢測(cè)卡的主要反應(yīng)是免疫學(xué)的抗原和抗體反應(yīng)，若待檢肉類樣品為羊肉時(shí)，在所述加樣孔中加入樣品液后，樣品液中的羊血紅蛋白即與所述膠體金膜內(nèi)用膠體金標(biāo)記的抗羊血紅蛋白抗體發(fā)生反應(yīng)，并往所述硝酸纖維素膜迀移，在迀移過(guò)程中，再與所述檢測(cè)帶內(nèi)含有的抗羊血紅蛋白單克隆抗體反應(yīng)，形成抗體-抗原-抗體的夾心復(fù)合物，從而所述檢測(cè)帶顯棕紅色；同時(shí)，游離的或結(jié)合的膠體金標(biāo)記的抗羊血紅蛋白抗體移動(dòng)到所述質(zhì)控帶并與其中的抗鼠抗體反應(yīng)，形成棕紅色條帶，從而顯色；主要反應(yīng)的結(jié)果有以下3種情況:
[0027]a、當(dāng)所述檢測(cè)帶和所述質(zhì)控帶同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，表示檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明被檢測(cè)樣品是羊肉；
[0028]b、當(dāng)所述檢測(cè)帶不顯示顏色，只有所述質(zhì)控帶顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測(cè)結(jié)果為陰性，說(shuō)明被檢測(cè)樣品不是羊肉；
[0029]C、當(dāng)所述檢測(cè)帶和所述質(zhì)控帶均不顯色，則表明檢測(cè)試條已失效。
[0030]本實(shí)用新型的有益效果:本實(shí)用新型能快速、特異地檢測(cè)肉類樣品中的羊血紅蛋白，從而判定肉類樣品是否為羊肉；本實(shí)用新型易于制備且節(jié)省檢測(cè)費(fèi)用，使用方便，檢測(cè)快速，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確。
【附圖說(shuō)明】
[0031]為了更清楚地說(shuō)明本實(shí)用新型實(shí)施例的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖僅僅是本實(shí)用新型的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。
[0032]圖1為本實(shí)用新型羊肉快速檢測(cè)卡外殼及測(cè)試條在外殼內(nèi)的安置示意圖；
[0033]圖2為本實(shí)用新型的羊肉快速檢測(cè)卡的測(cè)試條結(jié)構(gòu)示意圖；
[0034]圖3為本實(shí)用新型的羊肉快速檢測(cè)卡的測(cè)試條的硝酸纖維素膜上顯示印跡示意圖；
[0035]附圖標(biāo)注說(shuō)明:
[0036]1、外殼；11、檢測(cè)窗孔；12、加樣孔；
[0037]2、測(cè)試條；21、支承背板；22、樣品墊；23、膠體金膜(或乳膠顆粒膜)；24、硝酸纖維素膜；25、吸水膜；241、檢測(cè)帶；242、質(zhì)控帶。
【具體實(shí)施方式】
[0038]以下面結(jié)合附圖以及具體實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步描述:
[0039]檢測(cè)卡實(shí)施例1
[0040]一種羊肉快速檢測(cè)卡，如圖1所示，它是在檢測(cè)卡外殼I中設(shè)置測(cè)試條2，檢測(cè)卡外殼I為長(zhǎng)條扁平薄殼狀外殼，長(zhǎng)70mm，寬20mm，厚5mm，薄殼壁厚1mm，由工程塑料制成。檢測(cè)卡外殼I由殼蓋與殼座兩半聯(lián)接構(gòu)成，在檢測(cè)卡外殼I殼蓋上有檢測(cè)窗孔11和加樣孔12。測(cè)試條2放置在檢測(cè)卡外殼I的殼座內(nèi)。
[0041]如圖2所示，測(cè)試條2是多層結(jié)構(gòu)的窄條薄片，片長(zhǎng)約60mm，片寬約4mm，厚度約2.5mm。測(cè)試條2為多層結(jié)構(gòu)，底層是支承背板21，為聚氯乙烯塑料薄片，厚約0.5mm，長(zhǎng)60mm，寬4mm ;支承背板21中部疊置粘貼硝酸纖維素膜24，硝酸纖維素膜24厚0.5mm，長(zhǎng)20-25mm，寬4mm。如圖3所示，硝酸纖維素膜24上有二條間隔開(kāi)的橫向顯示印跡帶，二條