質(zhì)譜檢測用的疏水性濃縮靶板的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實用新型設(shè)及一種用于MALDI-T0F質(zhì)譜檢測用的疏水性濃縮祀板。通過疏水性 濃縮祀板的使用來實現(xiàn)MLDI-T0F質(zhì)譜檢測中靈敏度，分辨率和重復(fù)性的提升，屬于質(zhì)譜 檢測領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] MALDI-T0FMS是MatrixAssistedLaserDeso;rptionIonizationTimeof Fli曲tMassSpectrometry的英文縮寫，即基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時間質(zhì)譜，它是 近年來發(fā)展起來的一種軟電離新型有機質(zhì)譜，通過引入基質(zhì)分子，使待測分子不產(chǎn)生碎片， 解決了非揮發(fā)性和熱不穩(wěn)定性生物大分子解吸離子化的問題，是分析難揮發(fā)的有機物質(zhì)的 重要手段之一。MALDI-T0F在世界范圍內(nèi)得到了突飛猛進(jìn)的發(fā)展，并廣泛應(yīng)用于生物技術(shù) 和制藥企業(yè)的藥物開發(fā)、科研領(lǐng)域的生物分析和化學(xué)檢測W及安全部口的核福射、化學(xué)物 質(zhì)和生物病原體的監(jiān)測等。
[0003] MLDI-T0F的原理是：當(dāng)用一定強度的激光照射樣品與基質(zhì)形成的共結(jié)晶薄膜， 基質(zhì)從激光中吸收能量，樣品解吸附，基質(zhì)-樣品之間發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移使得樣品分子電離，電 離的樣品在電場作用下加速飛過飛行管道，根據(jù)到達(dá)檢測器的飛行時間不同而被檢測，即 測定離子的質(zhì)量電荷之比（M/Z)與離子的飛行時間成正比來檢測離子。MLDI-T0F-的中 屯、技術(shù)就是依據(jù)樣品的質(zhì)荷比（m/z)的不同來進(jìn)行檢測，并測得樣品分子的分子量。根據(jù) MLDI-T0F的原理，MLDI-T0F具有靈敏度高、準(zhǔn)確度高、分辨率高、圖譜簡明、質(zhì)量范圍廣 及速度快等特點，在操作上制樣簡便、可微量化、大規(guī)模、并行化和高度自動化處理待檢生 物樣品，而且在測定生物大分子和合成高聚物應(yīng)用方面有特殊的優(yōu)越性。近年來已成為檢 測和鑒定多膚、蛋白質(zhì)、多糖、核巧酸、糖蛋白、高聚物W及多種合成聚合物的強有力工具。 如應(yīng)用MLDI-T0F測定蛋白質(zhì)酶解的膚質(zhì)量指紋圖譜（PMF)、源后裂解（PSD)碎片離子圖 譜、并結(jié)合質(zhì)譜網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫檢索，可獲得多膚、蛋白質(zhì)的序列。應(yīng)用MLDI-T0F對基因組單 核巧酸多態(tài)性（SNPs)進(jìn)行分析檢測，可區(qū)分和鑒別相對分子質(zhì)量達(dá)7, 000左右(含20多個 堿基)、僅存在1個堿基差別的不同DNA。特別值得指出的是，MLDI-T0F已成為生命科學(xué) 領(lǐng)域蛋白質(zhì)組研究中必不可缺的重要關(guān)鍵技術(shù)之一。
[0004] MLDI-T0F可W解決當(dāng)前蛋白組學(xué)中W下幾種潛在的挑戰(zhàn)，即生物標(biāo)記物的發(fā) 現(xiàn)、分子診斷研發(fā)、蛋白質(zhì)高通量分析和蛋白質(zhì)組圖譜，但絕不局限于此，MLDI-T0FMS應(yīng) 用于生物標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)和在分子層次上對疾病機理進(jìn)行揭示，從而被應(yīng)用于分子診斷、目 標(biāo)治療W及個性化用藥，將為人們更完整地提示生長、發(fā)育和代謝調(diào)控等生命活動的規(guī)律 和嚴(yán)重疾病的發(fā)生機理，為人類進(jìn)行疾病的診斷防治和新藥開發(fā)提供重要的理論基礎(chǔ)。采 用MLDI-T0FMS進(jìn)行血清等生物樣品分離、多膚譜快速掃描和疾病特征峰測序，研究人類 重要生理和病理過程中重要生物標(biāo)志物譜實驗確證和分析技術(shù)，可獲得若干與人類重大疾 病相關(guān)的重要生物標(biāo)志物譜，應(yīng)用于重大疾病的早期預(yù)警和病程判斷。如用于發(fā)現(xiàn)惡性腫 瘤血清標(biāo)志物譜，創(chuàng)建具有自主知識產(chǎn)權(quán)的我國常見惡性腫瘤人群的"血清質(zhì)譜多膚譜"， 獲得腫瘤早期預(yù)警、病程判斷的質(zhì)譜數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)展用于"血清質(zhì)譜多膚譜"疾病相關(guān)數(shù)據(jù) 挖掘的生物信息學(xué)工具和疾病診斷軟件，可應(yīng)用于臨床并推向市場。無論對于科研領(lǐng)域、醫(yī) 療系統(tǒng)，還是生物市場皆具有廣闊的前景。
[0005]MLDI-T0F由于具備快速分析、操作簡易、自動化、樣品用量少和高通量等特點， 可直接檢測血清、血漿、尿液、腦脊液、關(guān)節(jié)腔滑液、支氣管洗脫液、細(xì)胞裂解液、組織提取物 和各種分泌物，應(yīng)用MLDI-TCFS形成規(guī)?；闹卮蠹膊?、重要生物資源的蛋白質(zhì)組學(xué)、蛋 白質(zhì)組指紋圖譜或質(zhì)譜膚圖研究技術(shù)平臺，可建立具有獨立知識產(chǎn)權(quán)的蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫， 發(fā)現(xiàn)疾病的相關(guān)蛋白譜和具有重要應(yīng)用前景的生物標(biāo)記分子譜，W揭示疾病的發(fā)生機制， 作為早期診斷、分子分型、療效及預(yù)后判斷的依據(jù)，并找出可能成為新藥設(shè)計的分子祀點， 為疾病提供新的治療方案?；贛LDI-T0F的蛋白質(zhì)組圖譜、質(zhì)譜膚圖、生物標(biāo)記物譜等分 析診斷的發(fā)展將是分子醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一場革命，它不僅提供了一種新的診斷方法，并且具有 很高的可行性，它可在數(shù)分鐘時間內(nèi)從微量血液中測出上萬個結(jié)果并對其進(jìn)行分析。
[0006]由于目前國內(nèi)MLDI-T0F的檢測主要采用的是普通金屬祀板，不能滿足質(zhì)譜檢測 中高分辨率，高靈敏度和高重復(fù)性的要求。隨著MLDI-T0F在科學(xué)研究W及臨床診斷上的 日益廣泛的運用，目前急需一種能夠滿足質(zhì)譜檢測中高分辨率，高靈敏度和高重復(fù)性要求 的祀板，為研究工作W及疾病的快速診斷提供有力支撐。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本實用新型針對MLDI-T0F檢測中對高分辨率，高靈敏度和高重復(fù)性的要求，通 過利用疏水性薄膜的優(yōu)點，創(chuàng)造性發(fā)明了用于MALDI-T0F檢測的疏水性濃縮祀板。
[0008] 該實用新型的思路在將疏水性材料的濃縮效果和普通金屬祀板結(jié)合制成疏水性 濃縮祀板來代替金屬祀板，應(yīng)用于MLDI-T0F檢測，從而提高了高分辨率，高靈敏度和高重 復(fù)性；同時擁有普通金屬祀板的承載樣品與基質(zhì)的混合物的功能和樣品定位功能。
[0009]因此，本實用新型的目的是提供一種用于MLDI-T0F檢測中承載并定位樣品的祀 板。其結(jié)構(gòu)包括：
[0010] (1)直徑l-3mm的樣品祀環(huán)；
[0011] (2)與樣品室匹配的純角，其形狀與MALDI-T0F樣品室底部相契合；
[001引 0)祀板主體；
[0013] (4)由疏水性材料制成的祀板表面覆膜。
[0014]在W上任一項的實施方案中，祀板主體的材料選自不誘鋼或侶合金。在W上任一 項的實施方案中，覆膜可W采用鍛膜或涂料的方式完成，例如鍛上或貼上聚丙締，聚己締之 類大分子聚合物的疏水性材料所指的薄膜，或是涂上含氧烷基聚合物類的疏水涂料。其中， 覆膜的作用是針對樣品來間接提高檢測結(jié)果的靈敏度，分辨率和重復(fù)性。
[0015]在另一個W上任一的實施方案中，樣品的定位作用是通過祀環(huán)和祀板上的數(shù)字與 英文字母的關(guān)聯(lián)來實現(xiàn)的，其中祀板左側(cè)的橫排標(biāo)識為A-H，祀板上方的豎列標(biāo)識為1-12， 通過不同的橫排和豎列標(biāo)識的組合，W定位不同的樣品。
[0016]在另一個W上任一實施方案中，所述不誘鋼或侶合金祀板擁有導(dǎo)電能力。
[0017] 技術(shù)效果
[0018] 1)增加了疏水性表面覆膜，有效的富集了樣品，降低了樣品量需求并提高檢測結(jié) 果的靈敏度，分辨率和重復(fù)性；
[0019] 2)覆膜，樣品祀環(huán)均可根據(jù)不同樣品需求更改，擴大了適用范圍的同時還提高了 對樣品的針對性。
【附圖說明】 [0020] ；
[0021] 圖1 ;祀板主體的俯視圖，其中祀板左側(cè)的橫排標(biāo)識為A-H，祀板上方的豎列標(biāo)識 為1-12,通過不同的橫排和豎列標(biāo)識的組合，W定位不同的樣品。
[0022] 圖2 ;祀板主體和樣品室底部的契合關(guān)系示意圖。其中上圖為祀板主體，下圖為樣 品室底部，圓圈位置表示純角。
[002引圖3 ;疏水性濃縮祀板點樣后的質(zhì)譜效果圖。
[0024] 圖4;常規(guī)金屬祀板點樣后的質(zhì)譜效果圖
【具體實施方式】
[00巧]實施例1 ;疏水性濃縮祀板的點樣W及質(zhì)譜檢測效果
[0026] 將制好的樣品用移液器吸取一定量后直接點到疏水性濃縮祀板上，等到樣品變干 后將疏水性濃縮祀板放入MALDI-T0F質(zhì)譜儀中開始檢驗。質(zhì)譜檢測效果如圖3所示。
[0027] 實施例2 ;金屬祀板的點樣W及質(zhì)譜檢測效果
[002引將制好的樣品用移液器吸取一定量后直接點到普通祀板上，再將調(diào)配好的基質(zhì)點 到樣品上，等到樣品和基質(zhì)的混合物變干后將祀板放入MLDI-T0F質(zhì)譜儀中開始檢驗。質(zhì) 譜檢測效果如圖4所示。
[0029] 實施例3;疏水性濃縮祀板和金屬祀板的點樣W及質(zhì)譜檢測效果比較
[0030] 將制好的樣品用移液器吸取一定量后分別直接點到兩種祀板上，再將調(diào)配好的基 質(zhì)點到樣品上，等到樣品和基質(zhì)的混合物變干后將祀板放入MLDI-T0F質(zhì)譜儀中開始檢 驗。重復(fù)試驗20次并用進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，分析結(jié)果如表1所示。
[0031] 多膚提取物所選出峰的樣本標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果 [00321
【主權(quán)項】
1. 一種用于質(zhì)譜檢測的疏水性濃縮靶板，其結(jié)構(gòu)包括： (1) 直徑l-3mm的樣品革巴環(huán)； (2) 與樣品室匹配的鈍角，其形狀與MALDI-TOF樣品室底部相契合； (3) 靶板主體； (4) 由疏水性材料制成的靶板表面覆膜。
2. 權(quán)利要求1的所述的濃縮靶板，其特征在于靶板主體的材料選自不銹鋼或鋁合金。
3. 權(quán)利要求1的所述的濃縮靶板，其特征在于表面覆膜采用鍍膜或涂料的方式完成。
4. 權(quán)利要求1的所述的濃縮靶板，其特征在于靶板左側(cè)的橫排標(biāo)識為A-H，靶板上方的 豎列標(biāo)識為1-12,通過不同的橫排和豎列標(biāo)識的組合，以承載和定位不同的樣品。
【專利摘要】本實用新型提供一種用于MALDI-TOF質(zhì)譜檢測的疏水性濃縮靶板，其結(jié)構(gòu)包括：(1)直徑1-3mm的樣品靶環(huán)；(2)與樣品室匹配的鈍角，其形狀與MALDI-TOF樣品室底部相契合；(3)由不銹鋼或鋁合金制成的靶板主體；(4)由疏水性材料制成的靶板表面覆膜。本實用新型提高了MALDI-TOF的檢驗靈敏度，分辨率和重復(fù)性。
【IPC分類】G01N27-64, G01N1-40
【公開號】CN204613150
【申請?zhí)枴緾N201520142252
【發(fā)明人】李云鵬, 馬慶偉, 林燕
【申請人】北京毅新博創(chuàng)生物科技有限公司
【公開日】2015年9月2日
【申請日】2015年3月13日