抗生素檢測(cè)試紙的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種抗生素檢測(cè)試紙，包括樣品吸收墊、金標(biāo)物結(jié)合墊、反應(yīng)膜和吸收紙，在金標(biāo)結(jié)合墊上包被有β?內(nèi)酰胺特異性抗體?膠體金標(biāo)記物、四環(huán)素特異性抗體?膠體金標(biāo)記物、喹諾酮特異性抗體?膠體金標(biāo)記物、大環(huán)內(nèi)脂特異性抗體?膠體金標(biāo)記物、磺胺特異性抗體?膠體金標(biāo)記物、頭孢特異性抗體?膠體金標(biāo)記物。在反應(yīng)膜上包被有大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)抗生素檢測(cè)線、β?內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素檢測(cè)線、四環(huán)素類(lèi)抗生素檢測(cè)線、喹諾酮類(lèi)抗生素檢測(cè)線、磺胺類(lèi)抗生素檢測(cè)線、頭孢類(lèi)抗生素檢測(cè)線、羊抗鼠質(zhì)控線。本發(fā)明的兒童尿液中多種抗生素的聯(lián)合檢測(cè)試紙使用方便，快速，不需要專(zhuān)業(yè)操作，適合家庭使用。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
抗生素檢測(cè)試紙
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及一種具有尿液檢測(cè)功能的兒童紙尿褲，以及一種尿液檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]復(fù)旦大學(xué)一項(xiàng)針對(duì)江蘇、浙江、上海逾千名兒童尿液檢驗(yàn)研究顯示，79.6 %的上海學(xué)齡兒童尿液中檢出21種抗生素中的一種或幾種，I種以上抗生素在尿中被發(fā)現(xiàn)的頻率為58.3%，至少兩種及以上抗生素或抗生素類(lèi)別在尿中同時(shí)發(fā)現(xiàn)的頻率分別為26.7%和23.5%，而且在一份尿樣中最多能同時(shí)檢測(cè)出4類(lèi)6種抗生素;尿中抗生素總濃度之和在每毫升0.1-20納克之間的尿樣占47.8%，部分尿樣抗生素濃度超過(guò)每毫升1000納克。這種廣泛暴露狀態(tài)可能加重細(xì)菌耐藥，從而威脅臨床治療，也可能對(duì)兒童的生長(zhǎng)發(fā)育與人群健康造成潛在的危害。世界衛(wèi)生組織(WHO)曾發(fā)布報(bào)告表示，抗生素耐藥性細(xì)菌正蔓延至全球各地。(4月17日《參考消息》)。抗生素耐藥像糟糕的霧霾天氣一樣，會(huì)逐漸衍變成一種環(huán)境危機(jī)，威脅到每個(gè)人。藥物使用不當(dāng)引起和加劇細(xì)菌等微生物發(fā)生改變，最后導(dǎo)致使用于治療感染的藥物變得無(wú)效，這就是抗生素耐藥性的來(lái)源。在畜牧業(yè)，廣泛使用抗生素會(huì)造成抗生素耐藥性的發(fā)展。抗生素耐藥性在家畜中傳播后，又會(huì)通過(guò)食源性疾病和其他感染途徑在人群中蔓延。兒童的尿液中檢測(cè)出畜牧業(yè)常用抗生素就是一個(gè)典型的例子。而在人體身上對(duì)藥物使用不當(dāng)，也會(huì)造成抗生素耐藥性。目前沒(méi)有便捷的方式檢測(cè)孩子尿液的抗生素含量。
[0003]目前，對(duì)抗生素的檢測(cè)主要在食品領(lǐng)域以及環(huán)境領(lǐng)域，用于抗生素檢測(cè)的方法主要有高效液相色譜技術(shù)、微生物法、免疫分析法，這些方法需要昂貴的檢測(cè)儀器或?qū)I(yè)的檢測(cè)人員，不適合家庭使用，還沒(méi)有針對(duì)兒童尿液中抗生素的快速檢測(cè)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種抗生素檢測(cè)試紙，能夠?qū)和蛞褐卸喾N抗生素的聯(lián)合檢測(cè)，使用方便、快速，不需要專(zhuān)業(yè)操作，適合家庭使用。
[0005]為了解決以上技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種抗生素檢測(cè)試紙，包括樣品吸收墊、樣品結(jié)合墊、反應(yīng)膜和樣品吸水墊。
[0006]優(yōu)選地，本發(fā)明的抗生素檢測(cè)試紙，所述的樣品吸水墊為濾紙塊。
[0007]優(yōu)選地，本發(fā)明的抗生素檢測(cè)試紙，所述的樣品結(jié)合墊包被有β-內(nèi)酰胺特異性抗體-膠體金標(biāo)記物、四環(huán)素特異性抗體-膠體金標(biāo)記物、喹諾酮特異性抗體-膠體金標(biāo)記物、大環(huán)內(nèi)脂特異性抗體-膠體金標(biāo)記物、磺胺特異性抗體-膠體金標(biāo)記物和頭孢特異性抗體-膠體金標(biāo)記物。
[0008]優(yōu)選地，本發(fā)明的抗生素檢測(cè)試紙，所述的反應(yīng)膜為硝酸纖維素膜，其上面依此包被有大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)抗生素檢測(cè)線、內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素檢測(cè)線、四環(huán)素類(lèi)抗生素檢測(cè)線、喹諾酮類(lèi)抗生素檢測(cè)線、磺胺類(lèi)抗生素檢測(cè)線、頭孢類(lèi)抗生素檢測(cè)線和羊抗鼠質(zhì)控線。
[0009]進(jìn)一步地，本發(fā)明的抗生素檢測(cè)試紙，所述的大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)抗生素檢測(cè)線與所述的β-內(nèi)酰胺抗生素檢測(cè)線并排、所述的四環(huán)素類(lèi)抗生素檢測(cè)線與所述的喹諾酮類(lèi)抗生素檢測(cè)線并排、所述的磺胺類(lèi)抗生素檢測(cè)線與所述的頭孢類(lèi)抗生素檢測(cè)線并排。
[0010]進(jìn)一步地，本發(fā)明的抗生素檢測(cè)試紙，所述的大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)抗生素檢測(cè)線為大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)抗生素-載體蛋白，所述的β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素檢測(cè)線為β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素-載體蛋白，所述的四環(huán)素類(lèi)抗生素檢測(cè)線為四環(huán)素類(lèi)抗生素-載體蛋白，所述的喹諾烷酮類(lèi)抗生素檢測(cè)線為喹諾烷酮類(lèi)抗生素-載體蛋白，所述的磺胺類(lèi)抗生素檢測(cè)線為磺胺類(lèi)抗生素-載體蛋白，所述的頭孢類(lèi)抗生素檢測(cè)線為頭孢類(lèi)抗生素檢測(cè)線。
[0011]更進(jìn)一步地，本發(fā)明的抗生素檢測(cè)試紙，所述的載體蛋白為牛血清白蛋白。
[0012]本發(fā)明的抗生素檢測(cè)試紙，能夠?qū)和蛞褐卸喾N抗生素的聯(lián)合檢測(cè)，使用方便、快速，不需要專(zhuān)業(yè)操作，適合家庭使用。
【附圖說(shuō)明】
[0013]下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
[0014]圖1是本發(fā)明的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0015]本發(fā)明的抗生素檢測(cè)試紙包括樣品吸收墊、樣品結(jié)合墊、反應(yīng)膜和樣品吸水墊。
[0016]所述的樣品吸水墊為濾紙塊。
[0017]所述的樣品結(jié)合墊包被有β-內(nèi)酰胺特異性抗體-膠體金標(biāo)記物、四環(huán)素特異性抗體-膠體金標(biāo)記物、喹諾酮特異性抗體-膠體金標(biāo)記物、大環(huán)內(nèi)脂特異性抗體-膠體金標(biāo)記物、磺胺特異性抗體-膠體金標(biāo)記物和頭孢特異性抗體-膠體金標(biāo)記物。
[0018]所述的反應(yīng)膜為硝酸纖維素膜，其上面依此包被有大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)抗生素檢測(cè)線、β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素檢測(cè)線、四環(huán)素類(lèi)抗生素檢測(cè)線、喹諾酮類(lèi)抗生素檢測(cè)線、磺胺類(lèi)抗生素檢測(cè)線、頭孢類(lèi)抗生素檢測(cè)線和羊抗鼠質(zhì)控線。
[0019]所述的大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)抗生素檢測(cè)線與所述的β-內(nèi)酰胺抗生素檢測(cè)線并排、所述的四環(huán)素類(lèi)抗生素檢測(cè)線與所述的喹諾酮類(lèi)抗生素檢測(cè)線并排、所述的磺胺類(lèi)抗生素檢測(cè)線與所述的頭孢類(lèi)抗生素檢測(cè)線并排。
[0020]所述的大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)抗生素檢測(cè)線為大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)抗生素-載體蛋白，所述的β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素檢測(cè)線為內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素-載體蛋白，所述的四環(huán)素類(lèi)抗生素檢測(cè)線為四環(huán)素類(lèi)抗生素-載體蛋白，所述的喹諾烷酮類(lèi)抗生素檢測(cè)線為喹諾烷酮類(lèi)抗生素-載體蛋白，所述的磺胺類(lèi)抗生素檢測(cè)線為磺胺類(lèi)抗生素-載體蛋白，所述的頭孢類(lèi)抗生素檢測(cè)線為頭孢類(lèi)抗生素檢測(cè)線。所述的載體蛋白為牛血清白蛋白。
[0021 ] 一種膠體金的制備方法:
[0022]用雙蒸去離子水將質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%氯金酸稀釋成質(zhì)量分?jǐn)?shù)至0.01%，置磁力加熱棒攪拌器上攪拌煮沸，煮沸后每10ml氯金酸加入5ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%檸檬酸三鈉，溶液的顏色會(huì)由淺黃變蘭色，然后變深蘭，最后變?yōu)榧t色，當(dāng)溶液的顏色完全變?yōu)橥该鞯募t色時(shí)，繼續(xù)回流，1min后停止加熱，冷卻至室溫后用雙蒸去離子水補(bǔ)充至原體積并于4°C避光保存。
[0023]—種β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素特異性抗體-膠體金標(biāo)記物制備方法:
[0024](I)以目測(cè)法確定膠體金與待標(biāo)記抗體用量比例，用0.lmol/L的碳酸鉀調(diào)節(jié)膠體金溶液至7.2，將抗體用pH為7.6，0.lmol/L的磷酸鹽緩沖液逐級(jí)稀釋為5?40yg/ml，各取
0.1ml按順序加入一系列裝有Iml膠體金的試管中，5min后在上述試管內(nèi)分別加入0.1ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%氯化鈉，混勻，靜置2h后觀察結(jié)果。從加入抗體濃度為lOyg/ml的試管開(kāi)始，膠體金溶液的顏色基本一致，因此穩(wěn)定Iml膠體金最適抗體量是I Oyg/ml。
[0025](2)在磁力攪拌下，在1ml膠體金中加入β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素特異性隆抗體10ml，繼續(xù)攪拌混勻lOmin，加入0.2mll0%BSA，靜置離心30min，棄上清液，沉淀物用含質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1 %的牛血清白蛋白、0.5 %的表面活性劑，pH為7.2的0.2mol/L磷酸鹽緩沖液洗滌兩次，即可得到已純化的金標(biāo)抗體溶液，置4°C備用。按同樣的方法制備其他金標(biāo)抗體溶液。
[0026]抗生素檢測(cè)試紙條的靈敏度試驗(yàn)
[0027]大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)抗生素、β-內(nèi)酞胺類(lèi)抗生素、四環(huán)素類(lèi)抗生素、喹諾烷酮類(lèi)抗生素、頭孢類(lèi)抗生素和磺胺類(lèi)抗生素分別用PH為7的0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液稀釋成不同濃度，然后用本發(fā)明的試紙條進(jìn)行檢測(cè)，將不同濃度的抗生素滴加到試紙條的樣品墊。結(jié)果表明，本試紙條的檢測(cè)靈敏度分別為:紅霉素10yg/L、螺旋霉素8yg/L、青霉素G 4yg/L，阿莫西林4μg/L、金霉素15yg/L、土霉素30yg/L、諾氟沙星60yg/L、氧氟沙星100yg/L、磺胺多辛100yg/L、磺胺嚓咤100yg/L、頭抱哇諾20yg/L、頭抱洛寧20yg/L。
[0028]本發(fā)明的抗生素檢測(cè)試紙，能夠?qū)和蛞褐卸喾N抗生素的聯(lián)合檢測(cè)，使用方便、快速，不需要專(zhuān)業(yè)操作，適合家庭使用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種抗生素檢測(cè)試紙，其特征在于，包括樣品吸收墊、樣品結(jié)合墊、反應(yīng)膜和樣品吸水墊。2.如權(quán)利要求1所述的抗生素檢測(cè)試紙，其特征在于，所述的樣品吸水墊為濾紙塊。3.如權(quán)利要求1所述的抗生素檢測(cè)試紙，其特征在于，所述的樣品結(jié)合墊包被有β_內(nèi)酰胺特異性抗體-膠體金標(biāo)記物、四環(huán)素特異性抗體-膠體金標(biāo)記物、喹諾酮特異性抗體-膠體金標(biāo)記物、大環(huán)內(nèi)脂特異性抗體-膠體金標(biāo)記物、磺胺特異性抗體-膠體金標(biāo)記物和頭孢特異性抗體-膠體金標(biāo)記物。4.如權(quán)利要求1所述的抗生素檢測(cè)試紙，其特征在于，所述的反應(yīng)膜為硝酸纖維素膜，其上面依此包被有大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)抗生素檢測(cè)線、β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素檢測(cè)線、四環(huán)素類(lèi)抗生素檢測(cè)線、喹諾酮類(lèi)抗生素檢測(cè)線、磺胺類(lèi)抗生素檢測(cè)線、頭孢類(lèi)抗生素檢測(cè)線和羊抗鼠質(zhì)控線。5.如權(quán)利要求4所述的抗生素檢測(cè)試紙，其特征在于，所述的大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)抗生素檢測(cè)線與所述的內(nèi)酰胺抗生素檢測(cè)線并排、所述的四環(huán)素類(lèi)抗生素檢測(cè)線與所述的喹諾酮類(lèi)抗生素檢測(cè)線并排、所述的磺胺類(lèi)抗生素檢測(cè)線與所述的頭孢類(lèi)抗生素檢測(cè)線并排。6.如權(quán)利要求4所述的抗生素檢測(cè)試紙，其特征在于，所述的大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)抗生素檢測(cè)線為大環(huán)內(nèi)脂類(lèi)抗生素-載體蛋白，所述的內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素檢測(cè)線為內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素-載體蛋白，所述的四環(huán)素類(lèi)抗生素檢測(cè)線為四環(huán)素類(lèi)抗生素-載體蛋白，所述的喹諾烷酮類(lèi)抗生素檢測(cè)線為喹諾烷酮類(lèi)抗生素-載體蛋白，所述的磺胺類(lèi)抗生素檢測(cè)線為磺胺類(lèi)抗生素-載體蛋白，所述的頭孢類(lèi)抗生素檢測(cè)線為頭孢類(lèi)抗生素檢測(cè)線。7.如權(quán)利要求6所述的抗生素檢測(cè)試紙，其特征在于，所述的載體蛋白為牛血清白蛋白。
【文檔編號(hào)】G01N33/543GK106093380SQ201610528012
【公開(kāi)日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年7月6日
【發(fā)明人】徐佳
【申請(qǐng)人】哈爾濱貝貝凱爾科技發(fā)展有限公司