滋腎降糖丸組分的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種滋腎降糖丸組分的檢測(cè)方法，包括：用第一類甲醇溶液配制對(duì)照品溶液；用第二類甲醇溶液溶解滋腎降糖丸粉末，制得供試品溶液；采用高效液相色譜法檢測(cè)所述對(duì)照品溶液及供試品溶液，分別獲得對(duì)照品特征圖譜與供試品特征圖譜；比對(duì)特征圖譜，確定滋腎降糖丸的組分。本發(fā)明首次采用HPLC法對(duì)滋腎降糖丸的特征圖譜進(jìn)行研究，并采用同一測(cè)定方法測(cè)得該制劑中的5種成分，通過定性和定量的研究，可更全面的監(jiān)控制劑的內(nèi)在物質(zhì)變化，確保產(chǎn)品的質(zhì)量。
【專利說明】
滋腎降糖丸組分的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及中藥組分檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種滋腎降糖丸組分的檢測(cè)方法及系統(tǒng)。
【背景技術(shù)】
[0002]滋腎降糖丸的功效包括:益氣養(yǎng)陰，滋腎壯骨。用于糖尿病及其它并發(fā)癥、骨質(zhì)疏松等癥。
[0003]作為一種中成藥，消費(fèi)者很關(guān)心滋腎降糖丸的質(zhì)量，其中中藥材多為植物的干燥器官，由于復(fù)雜的自然環(huán)境、社會(huì)狀況以及我國歷史上科技發(fā)展不平衡等多種原因，造成了中藥材在應(yīng)用方面的復(fù)雜性。同一名稱的中藥材可能來自不同基源的植物。同一基源的中藥材由于產(chǎn)地不同、采收季節(jié)和生長年限不同而存在差別。一些中藥材，特別是名貴藥材，常可見到偽品與正品相混淆。由于以上因素的存在，使得不同來源的同種中藥材其化學(xué)組成有可能相同，也有可能不同，這就必然影響到中醫(yī)的臨床療效和中藥的實(shí)驗(yàn)研究，并影響以其為原料生產(chǎn)出的中成藥的化學(xué)組成，從而影響其質(zhì)量和療效。此外，我國中成藥品種繁多，中成藥生產(chǎn)過程中各工藝環(huán)節(jié)的穩(wěn)定性等多種因素對(duì)產(chǎn)品的化學(xué)組成也具有重要的影響。從現(xiàn)有的中藥內(nèi)在檢測(cè)現(xiàn)狀來看，還存在很多問題需逐步解決。其中，最突出的問題之一就是中藥整體化學(xué)特征的表征。
[0004]現(xiàn)今多采用中藥特征圖譜進(jìn)行檢測(cè)，其中中藥特征圖譜是指中藥材經(jīng)過適當(dāng)?shù)奶幚砗螅捎靡欢ǖ姆治鍪侄魏蛢x器檢測(cè)得到，能夠標(biāo)識(shí)其中各種組分群體特征的共有峰的圖譜。它是一種綜合的、可量化的鑒別手段，可用于鑒別中藥材的真?zhèn)?，評(píng)價(jià)中藥材質(zhì)量的均一性和穩(wěn)定性。中藥特征圖譜可分為化學(xué)(成分)特征圖譜和生物特征圖譜。
[0005]但長期以來，滋腎降糖丸的檢測(cè)方法由于缺乏系統(tǒng)的整理和歸類，目前的技術(shù)手段相對(duì)落后，不利于產(chǎn)品質(zhì)量的監(jiān)控。因此建立一套有效的滋腎降糖丸的檢測(cè)方案顯得亟需。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是:提供一種利用HPLC法檢測(cè)滋腎降糖丸組分的方案，可實(shí)現(xiàn)定性定量檢測(cè)，更全面監(jiān)控制劑的內(nèi)在物質(zhì)變化，確保產(chǎn)品質(zhì)量。
[0007]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:提供一種滋腎降糖丸組分的檢測(cè)方法，包括:
[0008]用第一類甲醇溶液配制對(duì)照品溶液；
[0009]用第二類甲醇溶液溶解滋腎降糖丸粉末，制得供試品溶液；
[0010]采用高效液相色譜法檢測(cè)所述對(duì)照品溶液及供試品溶液，分別獲得對(duì)照品特征圖譜與供試品特征圖譜；
[0011]比對(duì)特征圖譜，確定滋腎降糖丸的組分。
[0012]本發(fā)明的有益效果在于:區(qū)別于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明首次采用HPLC法對(duì)滋腎降糖丸的特征圖譜進(jìn)行研究，并采用同一測(cè)定方法測(cè)得該制劑中的5種成分，通過定性和定量的研究，可更全面的監(jiān)控制劑的內(nèi)在物質(zhì)變化，確保產(chǎn)品的質(zhì)量。
【附圖說明】
[0013]圖1為本發(fā)明方法實(shí)施例的流程示意圖；
[0014]圖2為本發(fā)明具體實(shí)施例中滋腎降糖丸特征圖譜示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0015]為詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容、所實(shí)現(xiàn)目的及效果，以下結(jié)合實(shí)施方式并配合附圖予以說明。
[0016]本發(fā)明最關(guān)鍵的構(gòu)思在于:用HPLC法對(duì)滋腎降糖丸的特征圖譜進(jìn)行研究，并測(cè)得該制劑成分。
[0017]如圖1所示，本發(fā)明實(shí)施例提供一種滋腎降糖丸組分的檢測(cè)方法，包括:
[0018]S1:用第一類甲醇溶液配制對(duì)照品溶液；
[0019]S2:用第二類甲醇溶液溶解滋腎降糖丸粉末，制得供試品溶液；
[0020]S3:采用高效液相色譜法檢測(cè)所述對(duì)照品溶液及供試品溶液，分別獲得對(duì)照品特征圖譜與供試品特征圖譜；
[0021]S4:比對(duì)特征圖譜，確定滋腎降糖丸的組分。
[0022]本發(fā)明提供一種滋腎降糖丸組分的檢測(cè)方法是目前首次采用HPLC法對(duì)滋腎降糖丸的特征圖譜進(jìn)行研究，并采用同一測(cè)定方法可針對(duì)制劑中的5種成分進(jìn)行測(cè)試，通過定性和定量的研究，可更全面的監(jiān)控制劑的內(nèi)在物質(zhì)變化，確保產(chǎn)品的質(zhì)量。具體包括如下步驟:
[0023](a)制備對(duì)照品溶液:用甲醇溶液配制含三七皂苷Rl、人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、淫羊藿苷、人參皂苷Rb I混合對(duì)照品溶液；
[0024]應(yīng)當(dāng)理解的是，這些物質(zhì)是滋腎降糖丸中主要藥材所含的指標(biāo)或有效成分，因此選擇這些物質(zhì)，對(duì)這些組分進(jìn)行檢測(cè)和監(jiān)控，可更有效反應(yīng)制劑的質(zhì)量。
[0025]具體地，步驟(a)中所述的對(duì)照品溶液濃度均為0.lmg/ml的三七皂苷Rl、人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、淫羊藿苷、人參皂苷Rb I混合對(duì)照品溶液。
[0026](b)制備供試品溶液:取滋腎降糖丸粉末，精密稱定，用100%甲醇溶液溶解，超聲處理，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液;過濾的目的是去除雜質(zhì)，保護(hù)儀器。
[0027]具體地，取滋腎降糖丸粉末0.5-1.5g，精密稱定，置具塞50_100ml錐形瓶中，精密加入70 %甲醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理10-40分鐘，放冷，再稱定重量，用70 %甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。
[0028]在一個(gè)具體實(shí)施例中，取滋腎降糖丸粉末0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70 %甲醇10ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用70 %甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。
[0029 ] 具體地，可精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5-15μ1 (如1微升)進(jìn)行試驗(yàn)。
[0030](c)采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)對(duì)照品溶液或供試品溶液，如注入高效液相色譜儀后在DAD檢測(cè)器(DAD又名PDA,是photo-d1de-detector的簡寫，即圖像-二極管-列陣-檢測(cè)器，屬于紫外檢測(cè)器的一種，用于高效液相色譜，氣相的成分檢測(cè))的信號(hào)反映，之后通過轉(zhuǎn)換成為特定的色譜圖，即滋腎降糖丸特征圖譜；
[0031 ]應(yīng)當(dāng)說明的是，高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography\HPLC)又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相栗入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。
[0032]其中色譜條件為:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長為203nm。十八烷基硅烷鍵合硅膠(0DS/C18)屬于反相柱中的填料，這種填料在反相色譜中發(fā)揮著極為重要的作用，它可完成高效液相色譜70?80%的分析任務(wù)。色譜柱為Agilent TC-C18(尺寸為250mm*4.6mm*5ym)，以水為流動(dòng)相A液，乙腈為流動(dòng)相B液，梯度洗脫:0_12min，81%八；12-6011^11，81%-64%厶;流速1.01111/11^11;檢測(cè)波長為20311111。
[0033]另外，在正相色譜中，填料是極性的，官能團(tuán)為一CN氰基、一NH2氨基等。這種方式主要用于分離異構(gòu)體，極性不同的化合物，特別是用來分離不同類型的化合物。因此，本發(fā)明以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。
[0034]選擇203nm波長主要針對(duì)皂苷類成分，參照《中國藥典》選擇的。另外，該波長下各色譜峰干擾小且分離度好，因此選擇此波長。
[0035]在得到滋腎降糖丸的指紋圖譜，圖譜上顯示有11個(gè)特征峰，并有相對(duì)的保留時(shí)間規(guī)定值。如果在生產(chǎn)過程中由于藥材原料的質(zhì)量、生產(chǎn)或貯藏過程等問題導(dǎo)致指紋圖譜中不能顯示完整的11個(gè)特征峰，那么說明滋腎降糖丸的質(zhì)量存在問題。
[0036]如圖2所示，滋腎降糖丸特征圖譜包括三七皂苷Rl (峰2)、人參皂苷Rgl (峰3)、人參皂苷Re (峰4)、淫羊藿苷(峰9，參比峰)和人參皂苷Rbl (峰11) 5個(gè)已知特征峰(這5個(gè)特征峰在對(duì)照品溶液中也可檢測(cè)到，通過比對(duì)，可以確定供試品溶液中含有這5種成分)外，還獲得峰1、5、6、7、8和10共6個(gè)特征峰。
[0037]獲得11個(gè)共有特征峰，依次標(biāo)記，選擇保留時(shí)間為測(cè)定值，其中保留時(shí)間是被測(cè)物質(zhì)如淫羊藿苷進(jìn)入高效液相色譜柱后被檢測(cè)到的時(shí)間，用于定位某一成分在色譜圖中的位置。分別為:21.411111丨11(峰1)、30.776111丨11(峰2)、34.606111丨11(峰3)、35.395111丨11(峰4)、37.32Omina$5)、44.168mina$6)、45.467mina$7)、46.74Omin0$8)、48.271mina$9，#照峰)、57.565min(峰10)、61.115min(峰11);
[0038]參照峰用于計(jì)算“相對(duì)保留時(shí)間”，即選定的特征峰的保留時(shí)間與參照峰的保留時(shí)間之比得出特征峰的相對(duì)保留時(shí)間。峰9為參照峰。
[0039]計(jì)算特征峰1-11的相對(duì)保留時(shí)間，其相對(duì)保留時(shí)間應(yīng)在規(guī)定值的±5%之內(nèi)，即規(guī)定值為:0.444(峰I)、0.638(峰2)、0.717(峰3)、0.733(峰4)、0.773(峰5)、0.915(峰6)、
0.942(峰 7)、0.968(峰 8)、1.000(峰 9，參比峰)、1.193(峰 10)、1.266(峰 11)。
[0040]以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書及附圖內(nèi)容所作的等同變換，或直接或間接運(yùn)用在相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種滋腎降糖丸組分的檢測(cè)方法，其特征在于，包括: 用第一類甲醇溶液配制對(duì)照品溶液； 用第二類甲醇溶液溶解滋腎降糖丸粉末，制得供試品溶液； 采用高效液相色譜法檢測(cè)所述對(duì)照品溶液及供試品溶液，分別獲得對(duì)照品特征圖譜與供試品特征圖譜； 比對(duì)特征圖譜，確定滋腎降糖丸的組分。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述滋腎降糖丸組分的檢測(cè)方法，其特征在于，所述第一類甲醇溶液為純甲醇溶液，所述對(duì)照品溶液包括三七皂苷Rl、人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、淫羊藿苷、人參皂苷Rb I，其濃度為0.lmg/ml。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述滋腎降糖丸組分的檢測(cè)方法，其特征在于，稱定滋腎降糖丸粉末0.5?1.5g，并置具塞50-100ml錐形瓶中，加入濃度70 %的甲醇溶液20ml，密塞，稱定重量，超聲處理10-40分鐘，冷卻再稱定重量，用濃度70 %的甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述滋腎降糖丸組分的檢測(cè)方法，其特征在于，稱定滋腎降糖丸粉末0.1g,置具塞75ml錐形瓶中，加入濃度70%的甲醇溶液20ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，冷卻再稱定重量，用濃度70 %的甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述滋腎降糖丸組分的檢測(cè)方法，其特征在于，取相同體積的對(duì)照品溶液及供試品溶液5?15ul注入高效液相色譜儀中，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，進(jìn)行梯度洗脫，在DAD檢測(cè)器檢測(cè)信號(hào)反映，并轉(zhuǎn)換成對(duì)應(yīng)的特征圖譜。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述滋腎降糖丸組分的檢測(cè)方法，其特征在于，取相同體積的對(duì)照品溶液及供試品溶液1ul注入高效液相色譜儀中，所述高效液相色譜儀測(cè)定的色譜條件為:色譜柱為Agilent TC-C18，尺寸250mm*4.6mm*5ym，以水為流動(dòng)相A液，乙腈為流動(dòng)相B液；當(dāng)流動(dòng)相A液濃度為81 %時(shí)，梯度洗脫O?12min;當(dāng)流動(dòng)相A液濃度為64% -81 %時(shí)，梯度洗脫12-60min ；流速為1.0ml/min ；檢測(cè)波長為203nm。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述滋腎降糖丸組分的檢測(cè)方法，其特征在于，獲得對(duì)照品特征圖譜的特征峰及其保留時(shí)間規(guī)定值，及供試品特征圖譜的特征峰及其保留時(shí)間規(guī)定值，比對(duì)保留時(shí)間規(guī)定值，確定供試品成分。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述滋腎降糖丸組分的檢測(cè)方法，其特征在于，對(duì)照品特征圖譜包括5個(gè)特征峰，供試品特征圖譜包括11個(gè)特征峰，并依次標(biāo)記； 且相比對(duì)照品特征圖譜，其中供試品特征圖譜的峰2對(duì)應(yīng)三七皂苷Rl、峰3對(duì)應(yīng)人參皂苷Rgl、峰4對(duì)應(yīng)人參皂苷Re、峰9對(duì)應(yīng)淫羊藿苷及峰11對(duì)應(yīng)人參皂苷Rbl。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述滋腎降糖丸組分的檢測(cè)方法，其特征在于，供試品特征圖譜上的11個(gè)特征峰選擇保留時(shí)間為測(cè)定值，分別為:峰I為21.41 lmin、峰2為30.776min、峰3為34.606minJ$4S35.395minJ$5S37.320minJ$6S44.168minJ$7S45.467minJ$8S46.740min、峰9為48.271min、峰10為57.565min、峰11為61.115min。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述滋腎降糖丸組分的檢測(cè)方法，其特征在于，設(shè)置其中對(duì)應(yīng)淫羊藿苷的峰9為參照峰;并計(jì)算11個(gè)特征峰的相對(duì)保留時(shí)間，其中，相對(duì)保留時(shí)間在規(guī)定值的±5%之內(nèi)。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK106053621SQ201610308238
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年5月11日
【發(fā)明人】李惠林, 陳劍平, 張尚斌, 余曉丹, 鄭平
【申請(qǐng)人】深圳市中醫(yī)院