一種治療神經(jīng)根型頸椎病的中藥制劑的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種治療神經(jīng)根型頸椎病的中藥制劑的含量檢測方法。該方法通過高效液相色譜法進(jìn)行測定，包括川芎的含量測定、白芍的含量測定、葛根的含量測定中的一種或幾種。本發(fā)明提供的治療神經(jīng)根型頸椎病的中藥制劑含量測定方法，對治療神經(jīng)根型頸椎病的中藥制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了提高、完善，與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)相比，該方法操作簡便、快速、檢測成本低、測定結(jié)果準(zhǔn)確，且能較全面反映其配方組成，確保了治療神經(jīng)根型頸椎病中藥制劑質(zhì)量的安全、均一、穩(wěn)定、有效、可控。
【專利說明】
一種治療神經(jīng)根型頸椎病的中藥制劑的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種中藥復(fù)方制劑的檢測方法，特別涉及一種治療神經(jīng)根型頸椎病中 藥制劑的檢測方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 頸痛顆粒收載于中國藥典2015年版一部。具有活血化瘀、行氣止痛的功效。用于神 經(jīng)根型頸椎病屬血瘀氣滯、脈絡(luò)閉阻證。證見頸、肩及上肢疼痛，發(fā)僵或竄麻、竄痛。
[0003] 頸痛顆粒是由如下重量配比的藥材制成的：三七250克、川芎750克、延胡索500克、 羌活1000克、白芍750克、威靈仙1000克、葛根750克。頸痛膠囊由于效果良好，經(jīng)臨床驗證， 療效顯著，在臨床上備受患者青睞。目前頸痛顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載了川芎、延胡索乙素、紫花 前胡苷、芍藥苷、齊墩果酸、葛根的鑒別試驗，未對其進(jìn)行含量測定;頸痛顆粒含量測定項下 僅收載了三七中人參皂苷的含量測定方法，現(xiàn)有技術(shù)中也未發(fā)現(xiàn)對于頸痛顆粒的其他質(zhì)量 檢測方法。因此，造成頸痛顆粒質(zhì)量檢測不精準(zhǔn)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有待提高。
[0004] 中國專利文件CN 105168392A-種速效心痛滴丸及其含量測定方法，公開了川芎 的含量測定方法，上述專利中檢測的是川芎中的藁本內(nèi)酯，而并未檢測川芎中的阿魏酸。
[0005] 中國專利文件CN 101738437A檢測治療抑郁癥的中藥解郁丸中芍藥苷含量的方 法；中國專利文件CN 103852541A-種治療糖尿病的中藥制劑中粉葛的含量測定方法，公開 了一種治療糖尿病的中藥制劑中粉葛的含量測定方法；以上均是芍藥或葛根有效成分的單 獨檢測，頸痛顆粒組方復(fù)雜，若每一個有效成分都單獨檢測，檢測成本較高。
[0006] 綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)中無能夠準(zhǔn)確測定頸痛顆粒中川芎、芍藥、葛根成分含量的方 法，而對其他藥材中的川芎、芍藥、葛根的含量測定方法也并不適用于頸痛顆粒制劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種治療神經(jīng)根型頸椎病的中藥制劑 的檢測方法。
[0008] 發(fā)明概述
[0009] 本發(fā)明使用高效液相色譜法對一種治療神經(jīng)根型頸椎病中藥制劑中的川芎、芍 藥、葛根進(jìn)行了含量測定，該方法操作簡便，分析數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，確保產(chǎn)品質(zhì)量安全、穩(wěn)定、可控。
[0010] 術(shù)語說明：
[0011] 頸痛顆粒:收載于中國藥典2015年版一部。是由如下重量配比的原料制成的：三七 250克、川芎750克、延胡索500克、羌活1000克、白芍750克、威靈仙1000克、葛根750克。
[0012] 本發(fā)明所述的治療神經(jīng)根型頸椎病的中藥制劑包括頸痛顆粒以及按照頸痛顆粒 的配方組成制備而成的藥學(xué)上可接受的任何劑型。
[0013] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0014] -種治療神經(jīng)根型頸椎病中藥制劑的檢測方法，包括如下含量測定方法中的一種 或幾種：
[0015] (1)川芎的含量測定
[0016] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：
[0017] 照中國藥典2015年版通則0512高效液相色譜法測定；
[0018]以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比為3-8:22-27:70的乙腈-甲醇-質(zhì)量濃度〇. 5-1.0 %冰醋酸為流動相，檢測波長為321nm;
[0019] 對照品溶液的制備：取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀 釋制成每lmL含20-30yg的溶液，即得；
[0020] 供試品溶液的制備:取頸痛顆粒研細(xì)，取4_6g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密 加入體積分?jǐn)?shù)70-90 %甲醇50-60mL，密塞，稱定重量，振搖，超聲30-45分鐘，放冷，用體積分 數(shù)70-90%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0021] 測定法:分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液各10此，注入高效液相色譜 儀，測定，即得；
[0022] (2)葛根、芍藥的含量測定
[0023]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：
[0024] 照中國藥典2015年版通則0512高效液相色譜法測定；
[0025]以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比20-30:70-80的甲醇-質(zhì)量濃度 0 ? 1-0 ? 3 %磷酸為流動相，葛根素檢測波長為250nm，芍藥苷檢測波長為230nm;
[0026] 對照品溶液的制備：取葛根素對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀 釋制成每lmL含80-90yg的溶液，即得;取芍藥苷對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶 解并稀釋制成每lmL含60-70yg的溶液，即得；
[0027] 供試品溶液制備:取頸痛顆粒研細(xì)，取4_6g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加 入體積分?jǐn)?shù)為50-70 %甲醇50-60mL，密塞，稱定重量，振搖，超聲30-45分鐘，放冷，用體積分 數(shù)50-70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0028] 測定法:分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液各10此，注入高效液相色譜 儀，測定，即得。
[0029] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述的（1)川芎的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗中流 動相為體積份數(shù)比6:24:70的乙腈-甲醇-質(zhì)量濃度0.5%冰醋酸。
[0030] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述的（2)葛根、芍藥的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 中流動相為體積份數(shù)比25:75的甲醇-質(zhì)量濃度0.1 %磷酸。
[0031] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述的（1)川芎的含量測定或（2)葛根、芍藥的含量測定色譜 條件與系統(tǒng)適用性試驗中流動相流速為1. OmL/min。
[0032]根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述的（1)川芎的含量測定或（2)葛根、芍藥的含量測定供試 品溶液的制備中超聲處理時間為30分鐘。
[0033]根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述的（1)川芎的含量測定供試品溶液的制備中提取溶劑甲 醇溶液的體積分?jǐn)?shù)為70%。
[0034]根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述的（2)葛根、芍藥的含量測定中提取溶劑甲醇溶液的體積 分?jǐn)?shù)為50 %。
[0035]根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的，一種治療神經(jīng)根型頸椎病中藥制劑的檢測方法，包括 如下含量測定方法中的一種或幾種：
[0036] (1)川芎的含量測定
[0037]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：
[0038] 照中國藥典2015年版通則0512高效液相色譜法測定；
[0039]以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比6: 24: 70的乙腈-甲醇-質(zhì)量濃 度0 ? 5 %冰醋酸為流動相，檢測波長為321nm;
[0040] 對照品溶液的制備：取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀 釋制成每lmL含20yg的溶液，即得；
[0041 ]供試品溶液的制備:取頸痛顆粒研細(xì)，取4g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加 入體積分?jǐn)?shù)70 %甲醇50mL，密塞，稱定重量，振搖，超聲30分鐘，放冷，用體積分?jǐn)?shù)70 %甲醇 補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0042] 測定法:分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液各10此，注入高效液相色譜 儀，測定，即得；
[0043] (2)葛根、芍藥的含量測定
[0044]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：
[0045] 照中國藥典2015年版通則0512高效液相色譜法測定；
[0046] 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比25: 75的甲醇-質(zhì)量濃度0.1% 磷酸為流動相，葛根素檢測波長為250nm，芍藥苷檢測波長為230nm;
[0047] 對照品溶液的制備：取葛根素對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀 釋制成每lmL含80yg的溶液，即得;取芍藥苷對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解 并稀釋制成每lmL含60yg的溶液，即得；
[0048]供試品溶液制備:取頸痛顆粒研細(xì)，取4g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入 體積分?jǐn)?shù)70 %甲醇50mL，密塞，稱定重量，振搖，超聲30分鐘，放冷，用體積分?jǐn)?shù)70 %甲醇補 足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0049] 測定法:分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液各10此，注入高效液相色譜 儀，測定，即得。
[0050] 本發(fā)明的有益效果：
[0051] 本發(fā)明使用高效液相色譜法對一種治療神經(jīng)根型頸椎病中藥制劑中的川芎、芍 藥、葛根進(jìn)行了含量測定，本發(fā)明中采用同一個樣品處理方法，同一個液相檢測條件，雙波 長檢測白芍和葛根的有效成分芍藥苷及葛根素，檢測靈敏度高，方法重現(xiàn)性好，同時大大節(jié) 省了樣品分析檢測成本。與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)相比，本發(fā)明的檢測方法操作簡便、快速、檢測成本低、 測定結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好、且能較全面反映頸痛顆粒制劑的配方組成。本發(fā)明可用于對頸痛 顆粒制劑進(jìn)行含量測定。
【附圖說明】：
[0052]圖1為阿魏酸含量測定陰性對照色譜圖；橫坐標(biāo)是時間，單位:分鐘；縱坐標(biāo)是電 壓，單位:微伏。
[0053]圖2為阿魏酸對照品高效液相色譜圖；橫坐標(biāo)是時間，單位:分鐘；縱坐標(biāo)是電壓， 單位:微伏。
[0054]圖3為頸痛顆粒中阿魏酸含量檢測色譜圖；橫坐標(biāo)是時間，單位:分鐘;縱坐標(biāo)是電 壓，單位:微伏。
[0055]圖4為阿魏酸線性關(guān)系圖；橫坐標(biāo)是濃度，單位:mg/mL;縱坐標(biāo)是峰面積，單位:微 伏?秒。
[0056]圖5為15101073批頸痛顆粒中阿魏酸含量檢測色譜圖；橫坐標(biāo)是時間，單位:分鐘； 縱坐標(biāo)是電壓，單位:微伏。
[0057]圖6為15101074批頸痛顆粒中阿魏酸含量檢測色譜圖；橫坐標(biāo)是時間，單位:分鐘； 縱坐標(biāo)是電壓，單位:微伏。
[0058]圖7為15101075批頸痛顆粒中阿魏酸含量檢測色譜圖；橫坐標(biāo)是時間，單位:分鐘； 縱坐標(biāo)是電壓，單位:微伏。
[0059] 圖8為葛根素含量測定陰性對照色譜圖；橫坐標(biāo)是時間，單位:分鐘；縱坐標(biāo)是電 壓，單位:微伏。
[0060] 圖9為葛根素對照品高效液相色譜圖；橫坐標(biāo)是時間，單位:分鐘；縱坐標(biāo)是電壓， 單位:微伏。
[0061 ]圖10為頸痛顆粒中葛根素含量檢測色譜圖；橫坐標(biāo)是時間，單位:分鐘；縱坐標(biāo)是 電壓，單位:微伏。
[0062]圖11為芍藥苷含量測定陰性對照色譜圖；橫坐標(biāo)是時間，單位:分鐘；縱坐標(biāo)是電 壓，單位:微伏。
[0063]圖12為芍藥苷對照品高效液相色譜圖；橫坐標(biāo)是時間，單位:分鐘；縱坐標(biāo)是電壓， 單位:微伏。
[0064]圖13為頸痛顆粒中芍藥苷含量檢測色譜圖；橫坐標(biāo)是時間，單位:分鐘；縱坐標(biāo)是 電壓，單位:微伏。
[0065]圖14為葛根素線性關(guān)系圖；橫坐標(biāo)是濃度，單位:mg/mL;縱坐標(biāo)是峰面積，單位:微 伏?秒。
[0066]圖15為芍藥苷線性關(guān)系圖；橫坐標(biāo)是濃度，單位:mg/mL;縱坐標(biāo)是峰面積，單位:微 伏?秒。
[0067]圖16為15101073批頸痛顆粒中葛根素含量檢測色譜圖；橫坐標(biāo)是時間，單位:分 鐘;縱坐標(biāo)是電壓，單位:微伏。
[0068]圖17為15101074批頸痛顆粒中葛根素含量檢測色譜圖；橫坐標(biāo)是時間，單位:分 鐘;縱坐標(biāo)是電壓，單位:微伏。
[0069]圖18為15101075批頸痛顆粒中葛根素含量檢測色譜圖；橫坐標(biāo)是時間，單位:分 鐘;縱坐標(biāo)是電壓，單位:微伏。
[0070] 圖19為15101073批頸痛顆粒中芍藥苷含量檢測色譜圖；橫坐標(biāo)是時間，單位：分 鐘;縱坐標(biāo)是電壓，單位:微伏。
[0071] 圖20為15101074批頸痛顆粒中芍藥苷含量檢測色譜圖；橫坐標(biāo)是時間，單位：分 鐘;縱坐標(biāo)是電壓，單位:微伏。
[0072]圖21為15101075批頸痛顆粒中芍藥苷含量檢測色譜圖；橫坐標(biāo)是時間，單位:分 鐘;縱坐標(biāo)是電壓，單位:微伏。
【具體實施方式】
[0073]下面結(jié)合實驗例和實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明，但不限于此。
[0074]實驗例1:川芎的含量測定 [0075] 1.儀器、試藥和供試樣品
[0076] 儀器：高效液相色譜儀:waters e2695，waters2998二極管陣列檢測器，Empower3 工作站;MEITLER TOLEDO XPE205電子天平；
[0077] 對照品：阿魏酸對照品（中國藥品生物制品檢定所)批號:0773_9910;
[0078] 供試樣品：頸痛顆粒（山東明仁福瑞達(dá)制藥股份有限公司）批號：15101073、 15107074、15101075。
[0079] 2 ?色譜條件
[0080] 照高效液相色譜法（中國藥典2015年版通則0512)測定。
[00811以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比6: 24: 70的乙腈-甲醇-質(zhì)量濃 度0.5 %冰醋酸為流動相，檢測波長為321nm，流速1. OmL/min。
[0082] 3.對照品的制備：取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀釋 制成每lmL含20yg的溶液，即得。
[0083] 4.供試品溶液制備：取頸痛顆粒適量，研細(xì)，取約4g，精密稱定，置具塞的錐形瓶 中，精密加入70 %甲醇50mL，密塞，稱定重量，振搖，超聲30分鐘，放冷，用70 %甲醇補足減失 的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0084] 5.提取方法選擇實驗
[0085] 表1提取方法選擇表
[0086]
[0087]結(jié)果表明：超聲較浸泡提取更加充分，故選擇超聲為供試品的處理方法。
[0088] 6.提取溶劑選擇實驗
[0089]表2提取溶劑選擇表
[0091]結(jié)果表明：體積分?jǐn)?shù)70 %甲醇與甲醇提取效果基本一致，甲醇成本較高，考慮本品 的溶解性及安全性，選擇70 %甲醇為提取溶劑。
[0092] 7.提取時間選擇實驗
[0093] 表3提取時間選擇表
[0095] 結(jié)果表明：阿魏酸在30min與45min時，提取程度基本一致，說明阿魏酸在30min時 已經(jīng)基本提取完畢，故選擇30min為提取時間。
[0096] 8.系統(tǒng)適用性試驗及陰性干擾試驗
[0097] 在上述色譜條件下，分別精密量取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10y 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見附圖1-3。結(jié)果表明，供試品色譜圖中阿魏酸與其相鄰色 譜峰的分離度大于1.5,且陰性對照無干擾。
[0098] 9.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備和線性關(guān)系考察
[0099] 精密量取阿魏酸對照品貯備溶液(49.4yg/mL) 2mL、3mL、4mL、5mL、6mL，分別置1 OmL 容量瓶中，用體積分?jǐn)?shù)70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，各精密進(jìn)樣10yl，以峰面積(A)對對照品 濃度(C)線性關(guān)系良好。阿魏酸線性關(guān)系見圖4。
[0100] 表4阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果表
[0101]
[0102] 回歸方程:y = 53537x_1637
[0103] 相關(guān)系數(shù):R = 〇. 9997
[0104] 10 ?精密度試驗
[0105] 分別精密量取阿魏酸對照品溶液lOiil，注入液相色譜儀，各連續(xù)測定6次，記錄峰 面積并計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD = 0.63%。結(jié)果表明，儀器精密度良好。
[0106] 表5阿魏酸精密度數(shù)據(jù)表
[0108] 11.穩(wěn)定性試驗
[0109] 供試品溶液制備完成后，精密吸取lOiil，注入液相色譜儀，記錄色譜峰面積，以后 每隔2小時測定一次，考察6小時，計算峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD = 0.60%。結(jié)果表明，供 試品中阿魏酸在6小時內(nèi)溶液穩(wěn)定性良好。
[0110]表6穩(wěn)定性數(shù)據(jù)表
[0112] 12.重復(fù)性試驗
[0113] 取本品，重復(fù)測定6次，計算樣品中阿魏酸的含量，RSD=1.57%。結(jié)果表明，分析方 法重復(fù)性良好。
[0114]表7重復(fù)性數(shù)據(jù)表
[0116] 13 ?回收率試驗
[0117] 精密稱取同一批樣品6份，精密加入阿魏酸對照品，此功能定其含量，計算回收率， 阿魏酸平均回收率為96.80 %，RSD = 1.35 %。表明該測定方法測定結(jié)果準(zhǔn)確。
[0118]表8回收率數(shù)據(jù)表
[0120] 14.樣品測定
[0121] 取頸痛顆粒3批，測定并計算阿魏酸的含量，結(jié)果如下。
[0122] 表9含量數(shù)據(jù)表
[0123]

[0124] 阿魏酸含量高效液相檢測圖譜見圖5-圖7。
[0125] 結(jié)論：15101073、15101074及15101075批頸痛顆粒中阿魏酸的含量分別為： 0.9 lmg/g、0.90mg/g、0.92mg/g。本發(fā)明含量測定方法能夠穩(wěn)定檢測出頸痛顆粒中主藥川； 中阿魏酸的含量，檢測靈敏度高，方法重現(xiàn)性好。
[0126] 綜上:本發(fā)明含量測定的方法通過控制頸痛顆粒中主藥川芎中阿魏酸的含量，從 而控制制劑的質(zhì)量。本法比較了不同溶劑、不同提取時間、不同提取方法等供試品處理方 法，同時研究發(fā)現(xiàn)了以體積份數(shù)比30:70的甲醇-質(zhì)量濃度0.5 %冰醋酸流動相的檢測方法。
[0127] 實驗例2:葛根、芍藥的含量測定
[0128] 1.儀器、試藥和供試樣品
[0129] 儀器：高效液相色譜儀:waters e2695，waters2998二極管陣列檢測器，Empower3 工作站;MEITLER TOLEDO XPE205電子天平；
[0130] 對照品：葛根素對照品（中國藥品生物制品檢定所)批號：110752-200511;
[0131] 芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所)批號：110736-200737;
[0132] 供試樣品：頸痛顆粒（山東明仁福瑞達(dá)制藥股份有限公司）批號：15101073、 15101074、15101075。
[0133] 2.色譜條件
[0134] 照高效液相色譜法（中國藥典2015年版通則0512)測定。
[0135] 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比25: 75甲醇-質(zhì)量濃度0.1 %磷 酸為流動相，葛根素檢測波長為250nm，茍藥苷檢測波長為230nm，流速1 .OmL/min。
[0136] 3.對照品的制備:取葛根素對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀釋 制成每lmL含80yg的溶液，即得。取芍藥苷對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解并 稀釋制成每lmL含60yg的溶液，即得。
[0137] 4.供試品溶液制備：取頸痛顆粒適量，研細(xì)，取約4g，精密稱定，置具塞的錐形瓶 中，精密加入70 %甲醇50mL，密塞，稱定重量，振搖，超聲30分鐘，放冷，用70 %甲醇補足減失 的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0138] 5.提取方法選擇實驗
[0139] 表10提取方法選擇表
[0141] 結(jié)果表明：超聲較浸泡提取更加充分，故選擇超聲為供試品的處理方法。
[0142] 6.提取溶劑選擇實驗
[0143] 表11提取溶劑選擇表
[0145] 結(jié)果表明：質(zhì)量濃度40%甲醇、50 %甲醇及70 %甲醇提取效果基本一致，綜合考慮 成本并保證本品中葛根素和芍藥苷能被充分提取，選擇50 %甲醇為提取溶劑。
[0146] 7.提取時間選擇實驗
[0147] 表12提取時間選擇表
[0149] 結(jié)果表明：葛根素和芍藥苷在30min與40min時，提取程度基本一致，說明在30min 時兩種成分已經(jīng)基本提取完畢，故選擇30min為提取時間。
[0150] 8.系統(tǒng)適用性試驗及陰性干擾試驗
[0151 ] 在上述色譜條件下，分別精密量取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10y 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖8-13。結(jié)果表明，供試品色譜圖中葛根素和芍藥苷與 其相鄰色譜峰的分離度大于均1.5，且陰性對照無干擾。
[0152] 9.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備和線性關(guān)系考察
[0153] (1)葛根素標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備和線性關(guān)系考察
[0154] 精密量取葛根素對照品貯備溶液（0.1594mg/mL) 3mL、4mL、5mL、6mL、7mL，分別置 10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，各精密進(jìn)樣lOiil，以峰面積(A)對對照品濃度(C) 線性關(guān)系良好。葛根素線性關(guān)系見圖14。
[0155] 表13葛根素標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果表
[0157] 回歸方程：y = 4 ? 55E+07x- 2 ? 93E+04
[0158] 相關(guān)系數(shù):R = 〇. 9994
[0159] (2)芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備和線性關(guān)系考察
[0160] 精密量取芍藥苷對照品貯備溶液（0.1224mg/mL) 3mL、4mL、5mL、6mL、7mL，分別置 10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，各精密進(jìn)樣lOiil，以峰面積(A)對對照品濃度(C) 線性關(guān)系良好。芍藥苷線性關(guān)系見圖15。
[0161 ]表14芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果表 [0162]
[0163] 回歸方程:y = 1.28E+()7x+6521
[0164] 相關(guān)系數(shù):r = 〇.9997
[0165] 10 ?精密度試驗
[0166] (1)分別精密量取葛根素對照品溶液lOiil，注入液相色譜儀，各連續(xù)測定6次，記錄 峰面積并計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD = 0.25%。結(jié)果表明，儀器精密度良好。
[0167] 表15葛根素精密度數(shù)據(jù)表
[0170] (2)分別精密量取芍藥苷對照品溶液10yl，注入液相色譜儀，各連續(xù)測定6次，記錄 峰面積并計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD = 0.34%。結(jié)果表明，儀器精密度良好。
[0171] 表16芍藥苷精密度數(shù)據(jù)表
[0173] 11.穩(wěn)定性試驗
[0174] 供試品溶液制備完成后，精密吸取lOiil，注入液相色譜儀，記錄色譜峰面積，以后 每隔2小時測定一次，考察6小時，計算葛根素和芍藥苷峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，葛根素峰面 積RSD = 0.51 %，芍藥苷峰面積RSD = 0.33%。結(jié)果表明，供試品中葛根素和芍藥苷在6小時 內(nèi)溶液穩(wěn)定性良好。
[0175] 衷17葛枏素穩(wěn)定件數(shù)據(jù)衷
[0177]表18芍藥苷穩(wěn)定性數(shù)據(jù)表
[0179] 12.重復(fù)性試驗
[0180] 取本品，重復(fù)測定6次，計算樣品中葛根素和芍藥苷的含量，葛根素 RSD = 0.93%， 芍藥苷RSD = 1.91%。結(jié)果表明，分析方法重復(fù)性良好。
[0181] 表19葛根素重復(fù)性數(shù)據(jù)表
[0184]表20芍藥苷重復(fù)性數(shù)據(jù)表
[0186] 13.回收率試驗
[0187] 精密稱取同一批樣品6份，精密加入葛根素和芍藥苷對照品，此功能定其含量，計 算回收率，葛根素平均回收率為95.31 %，RSD = 1.05%，芍藥苷平均回收率為93.75%，RSD =1.73%，表明該測定方法測定結(jié)果準(zhǔn)確。
[0188] 表21葛根素回收率數(shù)據(jù)表
[0190] 表22芍藥苷回收率數(shù)據(jù)表
[0193] 14.樣品測定
[0194] 取頸痛顆粒3批，測定并計算葛根素和芍藥苷的含量，結(jié)果如下。
[0195] 表23含量數(shù)據(jù)表
[0197] 葛根素含量檢測高效液相色譜圖見圖16-圖18。芍藥苷含量檢測高效液相色譜圖 見圖19-21。
[0198] 結(jié)論：15101073、15101074及15101075批頸痛顆粒中葛根素的含量分別為： 8.2811^/^、8.3111^/^、8.3511^/^ ;茍藥苷的含量分別為3.5311^/^、3.4911^/^、3.5711^/^。本發(fā) 明含量測定方法能夠穩(wěn)定檢測出頸痛顆粒中葛根素和芍藥苷的含量，檢測靈敏度高，方法 重現(xiàn)性好。
[0199] 綜上:本發(fā)明含量測定的方法通過控制頸痛顆粒中主藥葛根中葛根素的含量以及 白芍中芍藥苷的含量，從而控制制劑的質(zhì)量。本法比較了不同溶劑、不同提取時間、不同提 取方法等供試品處理方法，并且研究發(fā)現(xiàn)了以體積份數(shù)比25:75甲醇-0.1%磷酸為流動相 的檢測方法，采用雙波長同時測定葛根素和芍藥苷的含量。
[0200] 以下實施例1-3中所檢測的頸痛顆粒購自山東明仁福瑞達(dá)制藥股份有限公司。
[0201] 實施例1:
[0202] -種治療神經(jīng)根型頸椎病中藥制劑的檢測方法，包括如下含量測定方法：
[0203] (1)川芎的含量測定
[0204]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：
[0205] 照中國藥典2015年版通則0512高效液相色譜法測定；
[0206]以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比6: 24: 70的乙腈-甲醇-質(zhì)量濃 度0 ? 5 %冰醋酸為流動相，檢測波長為321nm;
[0207] 對照品溶液的制備：取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀 釋制成每lmL含20yg的溶液，即得；
[0208] 供試品溶液的制備:取頸痛顆粒研細(xì)，取4g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加 入質(zhì)量濃度70 %甲醇50mL，密塞，稱定重量，振搖，超聲30分鐘，放冷，用質(zhì)量濃度70 %甲醇 補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0209] 測定法:分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液各10此，注入高效液相色譜 儀，測定，即得。
[0210] (2)葛根、芍藥的含量測定
[0211] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：
[0212] 照中國藥典2015年版通則0512高效液相色譜法測定；
[0213] 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比25: 75的甲醇-質(zhì)量濃度0.1 % 磷酸為流動相，葛根素檢測波長為250nm，芍藥苷檢測波長為230nm;
[0214] 對照品溶液的制備：取葛根素對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀 釋制成每lmL含80yg的溶液，即得;取芍藥苷對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解 并稀釋制成每lmL含60yg的溶液，即得；
[0215] 供試品溶液制備:取頸痛顆粒研細(xì)，取4g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入 質(zhì)量濃度70 %甲醇50mL，密塞，稱定重量，振搖，超聲30分鐘，放冷，用質(zhì)量濃度70 %甲醇補 足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0216] 測定法:分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液各10此，注入高效液相色譜 儀，測定，即得。
[0217] 實施例2:
[0218] -種治療神經(jīng)根型頸椎病中藥制劑的檢測方法，包括如下含量測定方法：
[0219]川考的含量測定：
[0220] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：
[0221] 照中國藥典2015年版通則0512高效液相色譜法測定；
[0222]以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比8: 22: 70的乙腈-甲醇-質(zhì)量濃 度0.8%冰醋酸為流動相，檢測波長為321nm;
[0223] 對照品溶液的制備：取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀 釋制成每lmL含20yg的溶液，即得；
[0224] 供試品溶液的制備:取頸痛顆粒研細(xì)，取4g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加 入體積分?jǐn)?shù)80 %甲醇50mL，密塞，稱定重量，振搖，超聲40分鐘，放冷，用體積分?jǐn)?shù)80 %甲醇 補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0225] 測定法:分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液各10此，注入高效液相色譜 儀，測定，即得。
[0226] 實施例3:
[0227] -種治療神經(jīng)根型頸椎病中藥制劑的檢測方法，包括如下含量測定方法：
[0228]葛根、芍藥的含量測定：
[0229]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：
[0230] 照中國藥典2015年版通則0512高效液相色譜法測定；
[0231 ]以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比28: 72的甲醇-質(zhì)量濃度0.5% 磷酸為流動相，葛根素檢測波長為250nm，芍藥苷檢測波長為230nm;
[0232] 對照品溶液的制備：取葛根素對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀 釋制成每lmL含70yg的溶液，即得;取芍藥苷對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解 并稀釋制成每lmL含60yg的溶液，即得；
[0233] 供試品溶液制備:取頸痛顆粒研細(xì)，取4g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入 體積分?jǐn)?shù)75 %甲醇50mL，密塞，稱定重量，振搖，超聲35分鐘，放冷，用體積分?jǐn)?shù)75 %甲醇補 足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0234] 測定法:分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液各10此，注入高效液相色譜 儀，測定，即得。
【主權(quán)項】
1. 一種治療神經(jīng)根型頸椎病中藥制劑的檢測方法，其特征在于，包括如下含量測定方 法中的一種或幾種： (1) 川芎的含量測定 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗： 照中國藥典2015年版通則0512高效液相色譜法測定； 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比為3-8: 22-27:70的乙腈-甲醇-質(zhì)量 濃度0.5-1.0 %冰醋酸為流動相，檢測波長為321nm; 對照品溶液的制備：取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀釋制 成每ImL含20-30yg的溶液，即得； 供試品溶液的制備:取頸痛顆粒研細(xì)，取4_6g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入 體積分?jǐn)?shù)70-90 %甲醇50-60mL，密塞，稱定重量，振搖，超聲30-45分鐘，放冷，用體積分?jǐn)?shù) 70-90%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法:分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液各IOyL，注入高效液相色譜儀，測 定，即得； (2) 葛根、芍藥的含量測定 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗： 照中國藥典2015年版通則0512高效液相色譜法測定； 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比20-30:70-80的甲醇-質(zhì)量濃度0. ΙΟ · 3 % 磷酸為流動相 ，葛根素檢測波長為 250nm ， 芍藥苷檢測波長為 230nm; 對照品溶液的制備：取葛根素對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀釋制 成每ImL含80-90yg的溶液，即得;取芍藥苷對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解并 稀釋制成每ImL含60-70yg的溶液，即得； 供試品溶液制備:取頸痛顆粒研細(xì)，取4_6g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入體 積分?jǐn)?shù)為50-70 %甲醇50-60mL，密塞，稱定重量，振搖，超聲30-45分鐘，放冷，用體積分?jǐn)?shù) 50-70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法:分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液各IOyL，注入高效液相色譜儀，測 定，即得。2. 如權(quán)利要求1所述的治療神經(jīng)根型頸椎病中藥制劑的檢測方法，其特征在于，所述的 (1) 川芎的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗中流動相為體積份數(shù)比6:24:70的乙腈-甲 醇-質(zhì)量濃度0.5 %冰醋酸。3. 如權(quán)利要求1所述的治療神經(jīng)根型頸椎病中藥制劑的檢測方法，其特征在于，所述的 (2) 葛根、芍藥的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗中流動相為體積份數(shù)比25: 75的甲 醇-質(zhì)量濃度0.1 %磷酸。4. 如權(quán)利要求1所述的治療神經(jīng)根型頸椎病中藥制劑的檢測方法，其特征在于，所述的 (1)川芎的含量測定或(2)葛根、芍藥的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗中流動相流速 為1·OmL/min〇5. 如權(quán)利要求1所述的治療神經(jīng)根型頸椎病中藥制劑的檢測方法，其特征在于，所述的 (1)川芎的含量測定或(2)葛根、芍藥的含量測定供試品溶液的制備中超聲處理時間為30分 鐘。6. 如權(quán)利要求1所述的治療神經(jīng)根型頸椎病中藥制劑的檢測方法，其特征在于，所述的 (1) 川芎的含量測定供試品溶液的制備中提取溶劑甲醇溶液的體積分?jǐn)?shù)為70%。7. 如權(quán)利要求1所述的治療神經(jīng)根型頸椎病中藥制劑的檢測方法，其特征在于，所述的 (2) 葛根、芍藥的含量測定中提取溶劑甲醇溶液的體積分?jǐn)?shù)為50%。8. 如權(quán)利要求1所述的治療神經(jīng)根型頸椎病中藥制劑的檢測方法，其特征在于，包括如 下含量測定方法中的一種或幾種： (1) 川芎的含量測定 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗： 照中國藥典2015年版通則0512高效液相色譜法測定； 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比6 :24:70的乙腈-甲醇-質(zhì)量濃度 0 · 5 %冰醋酸為流動相，檢測波長為321nm; 對照品溶液的制備：取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀釋制 成每ImL含20yg的溶液，即得； 供試品溶液的制備:取頸痛顆粒研細(xì)，取4g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入體 積分?jǐn)?shù)70 %甲醇50mL，密塞，稱定重量，振搖，超聲30分鐘，放冷，用體積分?jǐn)?shù)70 %甲醇補足 減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法:分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液各IOyL，注入高效液相色譜儀，測 定，即得； (2) 葛根、芍藥的含量測定 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗： 照中國藥典2015年版通則0512高效液相色譜法測定； 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比25: 75的甲醇-質(zhì)量濃度0.1 %磷酸 為流動相，葛根素檢測波長為250nm，芍藥苷檢測波長為230nm; 對照品溶液的制備：取葛根素對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀釋制 成每ImL含SOyg的溶液，即得;取芍藥苷對照品適量，精密稱定，置量瓶中，用甲醇溶解并稀 釋制成每ImL含60yg的溶液，即得； 供試品溶液制備:取頸痛顆粒研細(xì)，取4g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入體積 分?jǐn)?shù)70 %甲醇50mL，密塞，稱定重量，振搖，超聲30分鐘，放冷，用體積分?jǐn)?shù)70 %甲醇補足減 失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法:分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液各IOyL，注入高效液相色譜儀，測 定，即得。
【文檔編號】G01N30/02GK105929080SQ201610430294
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年6月16日
【發(fā)明人】徐傳彬, 吳維群, 劉杰, 張嬙, 王莉, 劉方升
【申請人】山東明仁福瑞達(dá)制藥股份有限公司