婦科斷紅飲膠囊中益母草成分的鑒別方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及婦科斷紅飲膠囊中益母草成分的鑒別方法，包括供試品溶液的制備、對照品溶液的制備以及照薄層色譜法鑒別；其中，所述供試品溶液的制備包括以下步驟：取婦科斷紅飲膠囊內(nèi)容物1.4～1.8g，溶于25～35ml無水乙醇，80～100℃回流提取，過濾后收集濾液，蒸干，所得殘渣加7ml～10ml水溶解，以3000～5000轉(zhuǎn)/分鐘離心后取上清液，蒸干，上樣于活性炭?氧化鋁柱，用無水乙醇洗脫后收集洗脫液、蒸干、用無水乙醇溶解，取上清液作為供試品溶液。采用本發(fā)明提供鑒別方法，供試品溶液在展板時無拖尾，分離效果好，顯色斑點清晰，在高濕度環(huán)境下可實現(xiàn)快速、準(zhǔn)確鑒別，穩(wěn)定性好。
【專利說明】
婦科斷紅飲膠囊中益母草成分的鑒別方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及中成藥中有效成分的鑒別，具體涉及婦科斷紅飲膠囊中益母草成分的鑒別方法。
【背景技術(shù)】
[0002]婦科斷紅飲膠囊是株洲千金藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的獨家產(chǎn)品，由赤芍、益母草、三七、仙鶴草、地榆炭、蒲黃炭等六味藥材組成，經(jīng)提取制成的純中藥復(fù)方制劑，具有涼血，化瘀，止血的功效。用于功能失調(diào)性子宮出血，表現(xiàn)為月經(jīng)過多，經(jīng)期延長，中醫(yī)診斷為“漏證”，辯證屬血熱者，癥見經(jīng)血量多，或淋漓不凈，色深紅或紫紅，質(zhì)粘稠，夾有少量血塊，伴有面赤頭暈，煩躁易怒，口干喜飲，便秘尿赤。處方中的益母草為君藥，有活血、祛淤、調(diào)經(jīng)、利尿消腫、收縮子宮的作用。
[0003]專利文獻CN101919942A公開了一種治療婦科功血疾病的中藥組合物膠囊劑的質(zhì)量控制方法，具體公開了以下內(nèi)容:取所述膠囊內(nèi)容物0.9g?1.5g，加乙醇22mL?38mL，加熱回流0.5h?I.5h，放冷，濾過，濾液濃縮至2.5mL?7.5mL，加于內(nèi)徑5mm?15mm、活性炭
0.3g?0.7g、100目?120目中性氧化招Ig?3g的活性炭-氧化招柱上，用15mL?45mL乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加0.2mL?0.SmL乙醇溶解，作為供試品溶液;取益母草對照藥材
1.5g?4.5g，與供試品溶液同法制成對照藥材溶液;取鹽酸水蘇堿對照品，加乙醇制成濃度為2.5mg/mL?7.5mg/mL的溶液，作為對照品溶液;吸取上述三種溶液各10μ1，以正丁醇:鹽酸:水為3?5:0.5?1.5:0.2?0.8的混合溶液為展開劑，進行薄層色譜法試驗，噴以稀碘化鉍鉀試液顯色，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。然而，該方法在實際操作中，存在展板時間長，顯色時間長，靈敏度不高，受環(huán)境濕度影響大等問題，影響了婦科斷紅飲膠囊的生產(chǎn)與質(zhì)量控制。
[0004]《中國藥典2015版》第一部第290頁公開了益母草的鑒別方法;其公開的供試品溶液制備方法為，鮮品干燥后粉碎，溶于無水乙醇，離心，取上清液作為供試品溶液;另取鹽酸水蘇堿對照品，加無水乙醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液;照薄層色譜法為:吸取上述兩種溶液各5?1ml，分別點于同一娃膠G薄層板上，以丙酮-無水乙醇-鹽酸(10:6:1)為展開劑，展開，取出，晾干，在105°C加熱15分鐘，放冷，噴以稀碘化鉍鉀試液-三氯化鐵試液(10:1)混合溶液至斑點顯色清晰。在實際操作中，以該方法制備婦科斷紅飲膠囊的供試品溶液并檢測，供試品難以實現(xiàn)有效分離，目標(biāo)斑點模糊，且目標(biāo)斑點之間的Rf值有差異，難以實現(xiàn)對益母草成分的準(zhǔn)確鑒別。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種針對婦科斷紅飲膠囊中益母草成分的鑒別方法，該方法專屬性強、耐用性、靈敏度高，可作為該制劑的重要質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
[0006]具體而言，本發(fā)明提供了一種婦科斷紅飲膠囊中益母草成分的鑒別方法，所述方法包括供試品溶液的制備、對照品溶液的制備以及照薄層色譜法鑒別。
[0007]其中，所述供試品溶液的制備包括以下步驟:取婦科斷紅飲膠囊內(nèi)容物1.4?1.Sg,溶于25?35ml無水乙醇，80?100 °C回流提取，放冷、過濾后收集濾液，蒸干，所得殘渣加7ml?1ml水溶解，以3000?5000轉(zhuǎn)/分鐘離心后取上清液，蒸干，上樣于活性炭-氧化鋁柱，用無水乙醇洗脫后收集洗脫液，蒸干，所得殘渣用無水乙醇溶解，取上清液作為供試品溶液。
[0008]優(yōu)選地，所述供試品溶液的制備包括以下步驟:取婦科斷紅飲膠囊內(nèi)容物1.5g?1.7g，溶于28ml?32ml無水乙醇，80?100°C回流提取50min?70min，放冷、過濾后收集濾液，水浴蒸干，所得殘渣加7ml?9ml水溶解，以3800?4200轉(zhuǎn)/分鐘離心8min?12min，取上清液，水浴蒸干，上樣于活性炭-氧化鋁柱，用無水乙醇洗脫后收集洗脫液，蒸干，所得殘渣用無水乙醇溶解，取上清液作為供試品溶液。
[0009]更優(yōu)選地，所述供試品溶液的制備包括以下步驟:取婦科斷紅飲膠囊內(nèi)容物1.6g，溶于30ml無水乙醇，90 0C回流提取60min，放冷、過濾后收集濾液，水浴蒸干，所得殘渣加8ml水溶解，以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心1min，取上清液，水浴蒸干后加5ml無水乙醇溶解，上樣于用無水乙醇潤濕的活性炭-氧化鋁柱，所述活性炭-氧化鋁柱的內(nèi)徑20mm，其填料由活性炭0.5g和200?300目氧化鋁2g均勻混合而成；用30ml無水乙醇洗脫后收集洗脫液，蒸干，所得殘渣用Iml無水乙醇溶解，取上清液作為供試品溶液。
[0010]所述供試品溶液的制備方法中，為了實現(xiàn)優(yōu)異的樣品純化效果，所述活性炭-氧化鋁柱的填料由活性炭和200?300目中性氧化鋁以重量比4?6:15?25均勻混合而成。
[0011 ]作為一種優(yōu)選方案，所述活性炭-氧化招柱的內(nèi)徑可選用15mm或20_，優(yōu)選為內(nèi)徑20mm;所述活性炭-氧化招柱的填料可由活性炭0.4?0.6g和200?300目氧化招1.5?2.5g均勻混合而成，所述活性炭和200?300目中性氧化鋁均市售可得。
[0012]在上述活性炭-氧化鋁柱的規(guī)格條件下，所述用無水乙醇洗脫的洗脫體積為20ml?40ml，優(yōu)選為28ml?32ml，進一步優(yōu)選為30ml。
[0013]本發(fā)明所述對照品溶液包括陽性對照，即益母草對照溶液。所述益母草對照溶液的制備方法為:取益母草藥材2.9g?3.lg，采用與制備供試品溶液相同的方法制備。本發(fā)明所述對照品溶液還進一步包括鹽酸水蘇堿對照品溶液和陰性對照溶液;所述鹽酸水蘇堿對照品溶液的制備方法為:取鹽酸水蘇堿對照品，加無水乙醇溶解至濃度為4.8?5.2mg/ml，優(yōu)選為5mg/ml;所述陰性對照溶液是以不含有益母草成分(其余成分完全相同)的婦科斷紅飲膠囊為樣品，采用與供試品溶液完全相同的方法制備而成。
[0014]本發(fā)明所述照薄層色譜法鑒別采用的展開劑由丙酮、無水乙醇和鹽酸以體積比9?11:5?7: I組成，優(yōu)選以體積比10:6: I組成。
[0015]所述照薄層色譜法鑒別中，采用展開劑展開、晾干后，優(yōu)選先在100?110°C加熱10?20min，放冷后噴以8?12%硫酸乙醇溶液，在100?110°C烘干2?4min，再噴以顯色劑進行顯色。
[0016]所述照薄層色譜法鑒別采用的顯色劑由稀碘化鉍鉀溶液與1%三氯化鐵乙醇溶液以體積比8?12:1混合而成，優(yōu)選以體積比1:1混合而成。所述稀碘化鉍鉀溶液的配置方法參見《中國藥典》2010版一部附錄VIB。
[0017]作為本發(fā)明的一種優(yōu)選方案，所述婦科斷紅飲膠囊中益母草成分的鑒別方法包括以下步驟:
[0018](I)供試品溶液的制備:取婦科斷紅飲膠囊內(nèi)容物1.4?1.8g，溶于25?35ml無水乙醇，80?100 °C回流提取50min?70min，放冷、過濾后收集濾液，水浴蒸干，所得殘渣加7ml?1ml水溶解，以3000?5000轉(zhuǎn)/分鐘離心8min?12min，取上清液，水浴蒸干，上樣于活性炭-氧化招柱，所述活性炭-氧化招柱的內(nèi)徑為15mm或20mm，其填料由活性炭0.4?0.6g和200?300目氧化招1.5?2.5g均勾混合而成；用20ml?40ml無水乙醇洗脫后收集洗脫液，蒸干，所得殘渣用0.5ml?1.5ml無水乙醇溶解，取上清液作為供試品溶液；
[0019](2)益母草對照溶液的制備:取益母草藥材2.9g?3.lg，采用與制備供試品溶液相同的方法，制備益母草對照溶液；
[0020]鹽酸水蘇堿對照品溶液的制備:取鹽酸水蘇堿對照品，加無水乙醇溶解至濃度為4.8?5.2mg/ml；
[0021 ] (3)照薄層色譜法鑒別:取所述供試品溶液、益母草對照溶液和鹽酸水蘇堿對照品溶液各10?15μ1，平行點樣于同一塊娃膠G板上，以體積比為9?11:5?7: I的丙酮_無水乙醇-鹽酸為展開劑展開，晾干后，在100?110°C加熱10?20min，放冷，噴以8?12%硫酸乙醇溶液，在100?110 °C烘干2?4min，再噴以體積比為8?12:1的稀碘化鉍鉀試液_1 %三氯化鐵乙醇混合溶液，日光下檢視，即可。
[0022 ]進一步優(yōu)選地，所述方法包括以下步驟:
[0023](I)供試品溶液的制備:取婦科斷紅飲膠囊內(nèi)容物1.5g?1.7g，溶于28ml?32ml無水乙醇，80?100°C回流提取50min?70min，放冷、過濾后收集濾液，水浴蒸干，所得殘渣加7ml?9ml水溶解，以3800?4200轉(zhuǎn)/分鐘離心8min?12min，取上清液，水浴蒸干，上樣于活性炭-氧化招柱，所述活性炭-氧化招柱的內(nèi)徑為15mm或20mm，其填料由活性炭0.4?0.6g和200?300目氧化招1.5?2.5g均勾混合而成；用28ml?32ml無水乙醇洗脫后收集洗脫液，蒸干，所得殘渣用0.8ml?1.2ml無水乙醇溶解，取上清液作為供試品溶液；
[0024](2)益母草對照溶液的制備:取益母草藥材2.9g?3.lg，采用與制備供試品溶液相同的方法，制備益母草對照溶液；
[0025]鹽酸水蘇堿對照品溶液的制備:取鹽酸水蘇堿對照品，加無水乙醇溶解至濃度為4.8?5.2mg/ml；
[0026](3)照薄層色譜法鑒別:取所述供試品溶液、益母草對照溶液和鹽酸水蘇堿對照品溶液各10?15μ1，平行點樣于同一塊娃膠G板上，以體積比為9?11:5?7: I的丙酮_無水乙醇-鹽酸為展開劑展開，晾干后，在100?110°C加熱10?20min，放冷，噴以8?12%硫酸乙醇溶液，在100?110 °C烘干2?4min，再噴以體積比為8?12:1的稀碘化鉍鉀試液_1 %三氯化鐵乙醇混合溶液，日光下檢視，即可。
[0027]作為發(fā)明的最優(yōu)選方案，所述方法包括以下步驟:
[0028](I)供試品溶液的制備:取婦科斷紅飲膠囊內(nèi)容物1.6g，溶于30ml無水乙醇，90°C回流提取60min，放冷、過濾后收集濾液，水浴蒸干，所得殘渣加8ml水溶解，以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心lOmin，取上清液，水浴蒸干后加5ml無水乙醇溶解，上樣于用無水乙醇潤濕的活性炭-氧化鋁柱，所述活性炭-氧化鋁柱的內(nèi)徑20mm，其填料由活性炭0.5g和200?300目氧化鋁2g均勻混合而成；用30ml無水乙醇洗脫后收集洗脫液，蒸干，所得殘渣用Iml無水乙醇溶解，取上清液作為供試品溶液；
[0029](2)益母草對照溶液的制備:取益母草藥材3g，采用步驟(I)所述方法，制備益母草對照溶液；
[0030]鹽酸水蘇堿對照品溶液的制備:取鹽酸水蘇堿對照品，加無水乙醇溶解至濃度為5mg/ml；
[0031 ] (3)照薄層色譜法鑒別:取所述供試品溶液、益母草對照溶液和鹽酸水蘇堿對照品溶液各10μ1，平行點樣于同一塊硅膠G板上，以體積比為10:6:1的丙酮-無水乙醇-鹽酸為展開劑展開，晾干后，在105 °C加熱15min，放冷，噴以10 %硫酸乙醇溶液，在105 °C烘干3min，再噴以體積比為10:1的稀碘化鉍鉀試液-1 %三氯化鐵乙醇混合溶液，日光下檢視，即可。
[0032]經(jīng)實際鑒別，所述方法得到的供試品色譜與對照品和對照藥材色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，方法可行。
[0033]本發(fā)明提供的婦科斷紅飲膠囊中益母草成分的鑒別方法，采用本發(fā)明提供鑒別方法，供試品溶液在展板時無拖尾，分離效果好，顯色斑點清晰，在高濕度環(huán)境下可實現(xiàn)快速、準(zhǔn)確鑒別，穩(wěn)定性好，可以有效的用于婦科斷紅飲膠囊的鑒別。
【附圖說明】
[0034]圖1為實施例1所述鑒別結(jié)果的示意圖；其中，序號I?6依次代表:1、批號20130701的樣品，2、批號20130901的樣品，3、批號20131101的樣品，4、益母草對照，5、鹽酸水蘇堿對照，6、陰性對照。
[0035]圖2為對比例3所述鑒別結(jié)果的示意圖；
[0036]圖3為實驗例I所述鑒別結(jié)果的示意圖；其中，圖3A為自制薄層硅膠G板，圖3B為預(yù)制薄層硅膠G板，圖3C為高效薄層硅膠G板；圖3A?3C中，序號I?6依次代表:1、批號20130701的樣品，2、批號20130901的樣品，3、批號20131101的樣品，4、益母草對照，5、鹽酸水蘇堿對照，6、陰性對照。
[0037]圖4為實驗例2所述鑒別結(jié)果的示意圖；其中，圖4A為5°C下的鑒別結(jié)果，圖4B為30°(:下的鑒別結(jié)果；圖4A、4B中，序號I?6依次代表:1、批號20130701的樣品，2、批號20130901的樣品，3、批號20131101的樣品，4、益母草對照，5、鹽酸水蘇堿對照，6、陰性對照。
[0038]圖5為實驗例3所述鑒別結(jié)果的示意圖；其中，圖5A為濕度30%下的鑒別結(jié)果，圖5B為濕度75%下的鑒別結(jié)果；圖5A、5B中，序號I?6依次代表:1、批號20130701的樣品，2、批號20130901的樣品，3、批號20131101的樣品，4、益母草對照，5、鹽酸水蘇堿對照，6、陰性對照。
【具體實施方式】
[0039]以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
[0040]以下各實施例中涉及的儀器以及試劑包括:939全自動薄層制板器(重慶南岸貝爾德儀器技術(shù)廠)；薄層層析硅膠(化學(xué)純，青島海洋化工有限公司)；活性炭(株洲石英化玻有限公司)；中性氧化鋁(上海納輝干燥試劑廠)；正丁醇(分析純，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司)；鹽酸(分析純，株洲石英化玻有限公司)；丙酮(分析純，株洲石英化玻有限公司)；無水乙醇(分析純，株洲石英化玻有限公司)；水(純化水，臨用前制備)。
[0041 ] 實施例1
[0042]按照以下方法鑒別婦科斷紅飲膠囊中的益母草成分:
[0043](I)供試品溶液的制備:取婦科斷紅飲膠囊內(nèi)容物1.6g，溶于30ml無水乙醇，90°C回流提取60min，放冷、過濾后收集濾液，水浴蒸干，所得殘渣加8ml水溶解，以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心lOmin，取上清液，水浴蒸干后加5ml無水乙醇溶解，上樣于用無水乙醇潤濕的活性炭-氧化鋁柱，所述活性炭-氧化鋁柱的內(nèi)徑20mm，其填料由活性炭0.5g和200?300目氧化鋁2g均勻混合而成；用30ml無水乙醇洗脫后收集洗脫液，蒸干，所得殘渣用Iml無水乙醇溶解，取上清液作為供試品溶液；
[0044](2)益母草對照溶液的制備:取益母草藥材3g，采用步驟(I)所述方法，制備益母草對照溶液；
[0045]鹽酸水蘇堿對照品溶液的制備:取鹽酸水蘇堿對照品，加無水乙醇溶解至濃度為5mg/ml；
[0046](3)照薄層色譜法鑒別:取所述供試品溶液、益母草對照溶液、鹽酸水蘇堿對照品溶液以及陰性對照各ΙΟμΙ，平行點樣于同一塊硅膠G板上，以體積比為10:6:1的丙酮-無水乙醇-鹽酸為展開劑展開，晾干后，在105 °C加熱15min，放冷，噴以10 %硫酸乙醇溶液，在105°C烘干3min，再噴以體積比為10:1的稀碘化鉍鉀試液-1 %三氯化鐵乙醇混合溶液，日光下檢視，即可。
[0047]本實施例采用以上方法，分別鑒別了株洲千金藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的生產(chǎn)批號分別為20130701、20130901、20131101的三個不同批次的婦科斷紅飲膠囊，鑒別結(jié)果如圖1所示。由圖1可知，采用本實施例所述方法進行鑒別，3組供試品與益母草對照在相同位置顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，展板無拖尾，目標(biāo)斑點清晰。
[0048]實施例2
[0049]與實施例1相比，區(qū)別僅在于，所述步驟(I)中:取婦科斷紅飲膠囊內(nèi)容物1.7g，溶于32ml無水乙醇，100 °C回流提取70min，放冷、過濾后收集濾液，水浴蒸干，所得殘渣加9ml水溶解，以4200轉(zhuǎn)/分鐘離心12min，取上清液，水浴蒸干后加5ml無水乙醇溶解，上樣于用無水乙醇潤濕的活性炭-氧化鋁柱;其余步驟與實施例1相同。
[0050]本實施例采用以上方法，分別鑒別了株洲千金藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的生產(chǎn)批號分別為20130701、20130901、20131101的三個不同批次的婦科斷紅飲膠囊；由鑒別結(jié)果可知，3組供試品與益母草對照在相同位置顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，展板無拖尾，目標(biāo)斑點清晰。
[0051 ] 實施例3
[0052]與實施例1相比，區(qū)別僅在于，所述步驟(I)中:取婦科斷紅飲膠囊內(nèi)容物1.5g，溶于28ml無水乙醇，80°C回流提取50min，放冷、過濾后收集濾液，水浴蒸干，所得殘渣加7ml水溶解，以3800轉(zhuǎn)/分鐘離心8min，取上清液，水浴蒸干后加5ml無水乙醇溶解，上樣于用無水乙醇潤濕的活性炭-氧化鋁柱;其余步驟與實施例1相同。
[0053]本實施例采用以上方法，分別鑒別了株洲千金藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的生產(chǎn)批號分別為20130701、20130901、20131101的三個不同批次的婦科斷紅飲膠囊；由鑒別結(jié)果可知，3組供試品與益母草對照在相同位置顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，展板無拖尾，目標(biāo)斑點清晰。
[0054]實施例4
[0055]與實施例1相比，區(qū)別僅在于，所述步驟(I)具體為:取婦科斷紅飲膠囊內(nèi)容物1.4g，溶于25ml無水乙醇，80°C回流提取50min，放冷、過濾后收集濾液，水浴蒸干，所得殘渣加7ml水溶解，以3000轉(zhuǎn)/分鐘離心8min，取上清液，水浴蒸干后加5ml無水乙醇溶解，上樣于用無水乙醇潤濕的活性炭-氧化鋁柱，所述活性炭-氧化鋁柱的內(nèi)徑20mm，其填料由活性炭
0.4g和200?300目氧化鋁1.5g均勻混合而成；用20ml無水乙醇洗脫后收集洗脫液，蒸干，所得殘渣用Iml無水乙醇溶解，取上清液作為供試品溶液;其余步驟與實施例1相同。
[0056]本實施例采用以上方法，分別鑒別了株洲千金藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的生產(chǎn)批號分別為20130701、20130901、20131101的三個不同批次的婦科斷紅飲膠囊；由鑒別結(jié)果可知，3組供試品與益母草對照在相同位置顯相同顏色的斑點，且陰性對照無干擾;斑點清晰程度略差于實施例1?3。
[0057]實施例5
[0058]與實施例1相比，區(qū)別僅在于，所述步驟(I)具體為:取婦科斷紅飲膠囊內(nèi)容物
1.Sg，溶于35ml無水乙醇，100°C回流提取70min，放冷、過濾后收集濾液，水浴蒸干，所得殘渣加1ml水溶解，以5000轉(zhuǎn)/分鐘離心12min，取上清液，水浴蒸干后加5ml無水乙醇溶解，上樣于用無水乙醇潤濕的活性炭-氧化鋁柱，所述活性炭-氧化鋁柱的內(nèi)徑15mm，其填料由活性炭0.6g和200?300目氧化鋁2.5g均勻混合而成；用40ml無水乙醇洗脫后收集洗脫液，蒸干，所得殘渣用Iml無水乙醇溶解，取上清液作為供試品溶液;其余步驟與實施例1相同。
[0059]本實施例采用以上方法，分別鑒別了株洲千金藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的生產(chǎn)批號分別為20130701、20130901、20131101的三個不同批次的婦科斷紅飲膠囊；由鑒別結(jié)果可知，3組供試品與益母草對照在相同位置顯相同顏色的斑點，且陰性對照無干擾;斑點清晰程度略差于實施例1?3。
[0060]對比例I
[0061]與實施例1相比，區(qū)別僅在于，所述步驟(I)中，取婦科斷紅飲膠囊內(nèi)容物1.2g，溶于30ml無水乙醇，90 0C回流提取60min，放冷、過濾后收集濾液，水浴蒸干，所得殘渣加7ml水溶解，以5500轉(zhuǎn)/分鐘離心8min，取上清液;其余操作與實施例1相同。
[0062]本對比例采用以上方法，分別鑒別了株洲千金藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的生產(chǎn)批號分別為20130701、20130901、20131101的三個不同批次的婦科斷紅飲膠囊；由鑒別結(jié)果可知，采用本對比例所述方法進行鑒別，目標(biāo)斑點之間的Rf值有差異，難以準(zhǔn)確判斷供試品與益母草對照的斑點是否在相同位置，且斑點清晰程度差于實施例1?5。
[0063]對比例2
[0064]與實施例1相比，區(qū)別僅在于，采用超聲處理方法制備供試樣品溶液，具體為:取所述膠囊內(nèi)容物1.6g，加乙醇30ml，超聲提取45min，放冷，過濾，濾液水浴蒸干，殘渣加8ml水溶解，以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心1min，取上清液，水浴蒸至近干，加5ml乙醇溶解，，上樣于用無水乙醇潤濕的活性炭-氧化鋁柱;其余步驟與實施例1相同。
[0065]本對比例采用以上方法，分別鑒別了株洲千金藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的生產(chǎn)批號分別為20130701、20130901、20131101的三個不同批次的婦科斷紅飲膠囊；由檢測結(jié)果可知，采用本對比例所述方法進行鑒別，目標(biāo)斑點之間的Rf值有差異，難以準(zhǔn)確判斷供試品與益母草對照的斑點是否在相同位置，且斑點清晰程度差于實施例1?5。
[0066]對比例3
[0067]與實施例1相比，區(qū)別僅在于，采用專利文獻CN101919942A公開的供試樣品處理方法，制備供試樣品溶液，具體為:取所述膠囊內(nèi)容物1.2g，加乙醇30mL，加熱回流lh，放冷，濾過，濾液濃縮至5mL，加于內(nèi)徑10mm、活性炭0.5g、100目-120目中性氧化招2g的活性炭-氧化鋁柱上，用30mL乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加0.5mL乙醇溶解，作為供試品溶液;其余步驟同實施例1。
[0068]本對比例采用以上方法，分別鑒別了株洲千金藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的生產(chǎn)批號分別為20130701、20130901、20131101的三個不同批次的婦科斷紅飲膠囊，鑒別結(jié)果如圖2所示(樣品以及對照品對應(yīng)的位置同實施例1)。由圖2可知，采用本對比例所述方法進行鑒別，展板時出現(xiàn)嚴重拖尾，供試品難以實現(xiàn)有效分離，目標(biāo)斑點模糊;且目標(biāo)斑點之間的Rf值有差異，難以準(zhǔn)確判斷供試品與益母草對照的斑點是否在相同位置。
[0069]對比例4
[0070]與實施例1相比，區(qū)別僅在于，采用專利文獻CN101919942A公開的薄層色譜法進行鑒別，具體為:以正丁醇-鹽酸-水(4:1:0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液至斑點顯色，日光下檢視;其余步驟同實施例1。
[0071]本對比例采用以上方法，分別鑒別了株洲千金藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的生產(chǎn)批號分別為20130701、20130901、20131101的三個不同批次的婦科斷紅飲膠囊；由檢測結(jié)果可知，采用本對比例所述方法進行鑒別，展開時間需6?8小時(實施例1?5僅需I?1.5小時)，需反復(fù)噴顯色劑，顯色時間長達2-3天(實施例1?5可即刻顯色)，且難以準(zhǔn)確判斷供試品與益母草對照的斑點是否顏色相同，斑點清晰度差于實施例1?5。
[0072]對比例5
[0073]采用《中國藥典2015版》第一部第290頁公開的益母草的鑒別方法對婦科斷紅飲膠囊進行檢測;其中:
[0074]供試品溶液制備方法為，取所述膠囊內(nèi)容物1.2g，加乙醇30mL，加熱回流Ih，放冷，過濾，取濾液1ml蒸干，殘渣加無水乙醇Iml使溶解，離心，取上清液作為供試品溶液；
[0075]另取鹽酸水蘇堿對照品，加無水乙醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；
[0076]照薄層色譜法為:吸取上述兩種溶液各5?10μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以丙酮-無水乙醇-鹽酸(10:6:1)為展開劑，展開，取出，瞭干，在105°C加熱15分鐘，放冷，噴以稀碘化鉍鉀試液-三氯化鐵試液(10:1)混合溶液至斑點顯色清晰。
[0077]由檢測結(jié)果可知，采用本對比例所述方法進行鑒別，檢測效果與對比例3類似，展板時出現(xiàn)嚴重拖尾，供試品難以實現(xiàn)有效分離，目標(biāo)斑點模糊;且目標(biāo)斑點之間的Rf值有差異，難以準(zhǔn)確判斷供試品與益母草對照的斑點是否在相同位置。
[0078]實驗例1:不同薄層硅膠板耐用性考察
[0079]采用實施例1提供的方法，對三個批次的藥品進行鑒別。其中，步驟(3)分別用自制薄層硅膠G板、購買自青島海洋集團的預(yù)制薄層硅膠G板及高效薄層硅膠G板試驗，點樣量10μ?;鑒別結(jié)果如圖3所示。
[0080]結(jié)果顯示:使用不同的硅膠G板，供試品色譜中與對照品和對照藥材色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。說明此鑒別方法對不同硅膠G板具有較好的耐用性。
[0081]實驗例2:不同溫度條件下進行鑒別的效果考察
[0082]采用實施例1提供的方法，對三個批次的藥品進行鑒別。其中，步驟(3)分別在5°C和30°C的環(huán)境溫度下進行展開;鑒別結(jié)果如圖4所示。
[0083]結(jié)果顯示:按照上述不同溫條件下進行試驗，供試品色譜中與對照品和對照藥材色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點，且斑點清晰，陰性對照無干擾，說明此鑒別方法在不同的環(huán)境溫度條件下具有較好的耐用性。
[0084]實驗例3:不同濕度條件下展開的薄層色譜條件耐用性考察
[0085]采用實施例1提供的方法，對三個批次的藥品進行鑒別。其中，步驟(3)分別在30%和75 %的環(huán)境濕度下進行展開;鑒別結(jié)果如圖5所示。
[0086]結(jié)果顯示:按照上述不同濕度件下進行試驗，供試品色譜中與對照品和對照藥材色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的斑點，且斑點清晰，陰性對照無干擾，說明此鑒別方法在不同的環(huán)境濕度條件下具有較好的耐用性。
[0087]本實驗例分別采用專利文獻CN101919942A的實施例6、7和8中“D、益母草的鑒別”公開的具體鑒別方案，在75%的環(huán)境濕度下進行展開，結(jié)果顯示，該方法在75%的環(huán)境濕度條件下，在長時間內(nèi)難以實現(xiàn)有效分離和顯色；相比較而言，本發(fā)明實施例1?5提供的方法，僅需展開I?1.5小時、噴顯色劑后3?6h，即可獲得清晰且可以用于準(zhǔn)確鑒別的斑點。
[0088]在所述高濕度的環(huán)境下，本發(fā)明實施例1?5可以獲得清晰完整的斑點，展開所需時間以及獲得可用于準(zhǔn)確鑒別的清晰斑點所需的顯色時間均明顯短于對比例I?5。
[0089]由于本發(fā)明提供鑒別方法受環(huán)境濕度影響小，可適用于我國南方大部分地區(qū)常年潮濕多雨、濕度較大的環(huán)境，穩(wěn)定性高，斑點清晰，明顯縮短了鑒別時間，為婦科斷紅飲膠囊的快速、穩(wěn)定鑒別提供了重要有效的手段。
[0090]雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明、【具體實施方式】及試驗，對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。
【主權(quán)項】
1.婦科斷紅飲膠囊中益母草成分的鑒別方法，其特征在于，包括供試品溶液的制備、對照品溶液的制備以及照薄層色譜法鑒別； 所述供試品溶液的制備包括以下步驟:取婦科斷紅飲膠囊內(nèi)容物1.4?1.Sg，溶于25?35ml無水乙醇，80?10 °C回流提取，放冷、過濾后收集濾液，蒸干，所得殘渣加7ml?I Oml水溶解，以3000?5000轉(zhuǎn)/分鐘離心后取上清液，蒸干，上樣于活性炭-氧化鋁柱，用無水乙醇洗脫后收集洗脫液，蒸干，所得殘渣用無水乙醇溶解，取上清液作為供試品溶液。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述供試品溶液的制備包括以下步驟:取婦科斷紅飲膠囊內(nèi)容物1.5g?1.7g，溶于28ml?32ml無水乙醇，80?100°C回流提取50min?70min，放冷、過濾后收集濾液，水浴蒸干，所得殘渣加7ml?9ml水溶解，以3800?4200轉(zhuǎn)/分鐘離心Smin?12min，取上清液，水浴蒸干，上樣于活性炭-氧化鋁柱，用無水乙醇洗脫后收集洗脫液，蒸干，所得殘渣用無水乙醇溶解，取上清液作為供試品溶液。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述活性炭-氧化鋁柱的填料由活性炭和200?300目中性氧化鋁以重量比4?6:15?25均勻混合而成； 優(yōu)選由活性炭0.4?0.6g和200?300目氧化鋁I.5?2.5g均勻混合而成。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述活性炭-氧化鋁柱的內(nèi)徑為15mm或20mm，優(yōu)選為內(nèi)徑20mm ； 所述用無水乙醇洗脫的洗脫體積為20ml?40ml，優(yōu)選為28ml?32ml。5.根據(jù)權(quán)利要求1?4任意一項所述的方法，其特征在于，所述對照品溶液包括益母草對照溶液和鹽酸水蘇堿對照品溶液； 所述益母草對照溶液的制備方法為:取益母草藥材2.9g?3.lg，采用與制備供試品溶液相同的方法制備； 所述鹽酸水蘇堿對照品溶液的制備方法為:取鹽酸水蘇堿對照品，加無水乙醇溶解至濃度為4.8?5.2mg/ml，即可。6.根據(jù)權(quán)利要求1?5任意一項所述的方法，其特征在于，照薄層色譜法鑒別采用的展開劑由丙酮、無水乙醇和鹽酸以體積比9?11:5?7:1組成，優(yōu)選以體積比10:6:1組成。7.根據(jù)權(quán)利要求1?6任意一項所述的方法，其特征在于，照薄層色譜法鑒別中，采用展開劑展開、晾干后，先在100?110°C加熱10?20min，放冷后噴以8?12%硫酸乙醇溶液，在100?110°C烘干2?4min，再噴以顯色劑進行顯色。8.根據(jù)權(quán)利要求1?7任意一項所述的方法，其特征在于，照薄層色譜法鑒別采用的顯色劑由稀碘化鉍鉀溶液與I %三氯化鐵乙醇溶液以體積比8?12:1混合而成，優(yōu)選以體積比10:1混合而成。9.婦科斷紅飲膠囊中益母草成分的鑒別方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)供試品溶液的制備:取婦科斷紅飲膠囊內(nèi)容物1.4?1.8g，溶于25?35ml無水乙醇，80?100 °C回流提取50min?70min，放冷、過濾后收集濾液，水浴蒸干，所得殘渣加7ml?1ml水溶解，以3000?5000轉(zhuǎn)/分鐘離心8min?12min，取上清液，水浴蒸干，上樣于活性炭-氧化招柱，所述活性炭-氧化招柱的內(nèi)徑為15mm或20mm，其填料由活性炭0.4?0.6g和200?300目氧化招1.5?2.5g均勾混合而成；用20ml?40ml無水乙醇洗脫后收集洗脫液，蒸干，所得殘渣用0.5ml?1.5ml無水乙醇溶解，取上清液作為供試品溶液； (2)益母草對照溶液的制備:取益母草藥材2.9g?3.lg，采用與制備供試品溶液相同的方法，制備益母草對照溶液； 鹽酸水蘇堿對照品溶液的制備:取鹽酸水蘇堿對照品，加無水乙醇溶解至濃度為4.8?.5.2mg/ml； (3)照薄層色譜法鑒別:取所述供試品溶液、益母草對照溶液和鹽酸水蘇堿對照品溶液各10?15μ1，平行點樣于同一塊娃膠G板上，以體積比為9?11:5?7:1的丙酮_無水乙醇-鹽酸為展開劑展開，晾干后，在100?110°C加熱10?20min，放冷，噴以8?12%硫酸乙醇溶液，在100?110°C烘干2?4min，再噴以體積比為8?12:1的稀碘化鉍鉀試液-1 %三氯化鐵乙醇混合溶液，日光下檢視，即可。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)供試品溶液的制備:取婦科斷紅飲膠囊內(nèi)容物1.5g?1.7g，溶于28ml?32ml無水乙醇，80?100 0C回流提取50min?70min，放冷、過濾后收集濾液，水浴蒸干，所得殘渣加7ml?9ml水溶解，以3800?4200轉(zhuǎn)/分鐘離心8min?12min，取上清液，水浴蒸干，上樣于活性炭_氧化招柱，所述活性炭-氧化招柱的內(nèi)徑為15mm或20mm，其填料由活性炭0.4?0.6g和200?300目氧化招1.5?2.5g均勾混合而成；用28ml?32ml無水乙醇洗脫后收集洗脫液，蒸干，所得殘渣用0.8ml?1.2ml無水乙醇溶解，取上清液作為供試品溶液； (2)益母草對照溶液的制備:取益母草藥材2.9g?3.lg，采用與制備供試品溶液相同的方法，制備益母草對照溶液； 鹽酸水蘇堿對照品溶液的制備:取鹽酸水蘇堿對照品，加無水乙醇溶解至濃度為4.8?.5.2mg/ml； (3)照薄層色譜法鑒別:取所述供試品溶液、益母草對照溶液和鹽酸水蘇堿對照品溶液各10?15μ1，平行點樣于同一塊娃膠G板上，以體積比為9?11:5?7:1的丙酮_無水乙醇-鹽酸為展開劑展開，晾干后，在100?110°C加熱10?20min，放冷，噴以8?12%硫酸乙醇溶液，在100?110°C烘干2?4min，再噴以體積比為8?12:1的稀碘化鉍鉀試液-1 %三氯化鐵乙醇混合溶液，日光下檢視，即可。
【文檔編號】G01N30/90GK105911210SQ201610220329
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年4月11日
【發(fā)明人】張英帥, 凌勇根, 白璐, 伍實花
【申請人】株洲千金藥業(yè)股份有限公司