一種血糖生成指數(shù)體外檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于食品技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種血糖生成指數(shù)體外檢測方法，通過模擬人體內(nèi)的消化系統(tǒng),消化含50mg碳水化合物的樣品，針對不同消化時間點取樣并加入3,5?二硝基水楊酸，經(jīng)還原反應生成氨基化合物，對氨基化合物進行吸光度檢測，通過理論計算公式計算得血糖生成指數(shù)。該方法縮短了檢測時間，降低了檢測要求，解決了體內(nèi)檢測耗費大量的人力物力的問題。根據(jù)體內(nèi)消化環(huán)境，在實驗過程中模擬其環(huán)境，對樣品進行處理，大大的降低了實驗周期及實驗難度，并且可進行重復的大量的操作。
【專利說明】
一種血糖生成指數(shù)體外檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于食品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種血糖生成指數(shù)體外檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著生活水平的提高，人們對健康日益關(guān)注。然而由于飲食習慣的改變，及人們運 動量的減少，與肥胖相關(guān)的疾病逐漸增多。糖尿病人數(shù)也逐年遞增，因此針對糖尿病人的食 品的開發(fā)具有深遠意義。血糖生成指數(shù)食品的檢測方法對此類食品的開發(fā)具有指導性作 用。
[0003] 食物血糖生成指數(shù)可反映出食物與葡萄糖相比升高血糖的速度和能力。血糖生成 指數(shù)的體內(nèi)檢測方法對受試者的身高體重及健康狀況均有標準要求，而且對受試者的空腹 血糖水平也有嚴格要求。體內(nèi)檢測血糖生成指數(shù)的測試前準備，也對受試者做了較多要求。 且整個體內(nèi)檢測時間跨度為三個月，受試者在每次檢測前12小時必須空腹、禁止喝酒及含 酒精的飲料、避免劇烈運動，對受試者的要求比較多且嚴格。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 根據(jù)以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提出一種血糖生成指數(shù) 體外檢測方法，通過體外模擬人體消化的方法，縮短了檢測時間，降低了檢測要求，解決了 體內(nèi)檢測耗費大量的人力物力的問題。
[0005] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
[0006] 一種血糖生成指數(shù)體外檢測方法，通過模擬人體內(nèi)的消化系統(tǒng)，消化含50mg碳水 化合物的樣品，針對不同消化時間點取樣并加入3,5_二硝基水楊酸，經(jīng)還原反應生成氨基 化合物，對氨基化合物進行吸光度檢測，通過理論計算公式計算得血糖生成指數(shù)。
[0007] 優(yōu)選的，所述模擬人體內(nèi)的消化系統(tǒng)包括加入胃蛋白酶模擬胃消化的步驟及加入 淀粉酶模擬小腸消化的步驟。
[0008] 優(yōu)選的，所述含50mg碳水化合物的樣品的量是通過減重法計算得出，所述的碳水 化合物（％ ) = 1 〇〇-水分-灰分-脂肪-蛋白-膳食纖維（％ )。
[0009] 優(yōu)選的，所述的血糖生成指數(shù)的理論計算公式參見Goni等人在1997年發(fā)表于 Nutrition Research第17卷第三期的文章 "A starch hydrolysis procedure to estimate glycemic index"中建立的方程式GI = 39.71+0.549 XHI，其中GI為血糖生成指 數(shù)，HI為樣品與標準參考物增值面積的百分比。
[0010] 優(yōu)選的，所述的模擬胃消化的步驟包括：向樣品中加入1 〇m 1KC1-HC1水溶液及 200u 1胃蛋白酶溶液，于3 7 °C -40 °C條件下水浴攪拌1 h，所述KC1-HC1水溶液中KC1、HC1、H20 質(zhì)量體積比為3.7275:4.2: lg/ml/1;所述的胃蛋白酶溶液為胃蛋白酶與所述的KC1-HC1水 溶液按質(zhì)量體積比為1: l〇g/ml的混合物。
[0011] 優(yōu)選的，所述的模擬小腸消化的步驟包括：用磷酸緩沖液調(diào)節(jié)樣品的pH = 6-7,然 后加入5ml淀粉酶溶液，所述淀粉酶溶液為淀粉酶與磷酸緩沖液按質(zhì)量體積比為0.02: lmg/ ml的混合物。
[0012] 優(yōu)選的，所述的針對不同消化時間點取樣，包括在0min、30min、60min、90min、 120min、150min、180min 時取樣。
[0013]優(yōu)選的，所述的樣品模擬人體內(nèi)消化后、加入3，5_二硝基水楊酸前需進行滅酶 5min〇
[0014] -種血糖生成指數(shù)體外檢測方法，包括如下步驟：
[0015] 1)取20g樣品粉碎，過20目篩，通過減重法計算得出含50mg碳水化合物的樣品的 量，取過篩后的含50mg碳水化合物的樣品放入酶反應器中；
[0016] 2)模擬胃消化：向酶反應器中加入10ml KC1-HC1溶液，200ul胃蛋白酶溶液，于37 °C_40°C條件下水浴攪拌lh;
[0017] 3)模擬小腸消化：向酶反應器中加入磷酸緩沖液，使溶液pH值在6-7,然后加5ml淀 粉酶溶液，開始計時；
[0018] 4)在 〇111；[11、30111；[11、60111；[11、90111；[11、120111；[11、150111；[11、180111；[11消化時間點分別取11111測 試液于離心管中，并沸水浴滅酶5min，滅酶后冷卻；
[0019] 5)取冷卻后的測試液0.1ml于試管中，加水至2ml，加入2mlDNS，然后將試管放入沸 水浴中加熱6min，冷卻后轉(zhuǎn)移至容量瓶中，定容搖勻，待檢測；
[0020] 6)分光光度計預熱30min，狀態(tài)切換至A，波長為520nm，用蒸餾水調(diào)零，將Omg/ml、 0.2mg/ml、0 ? 4mg/ml、0 ? 6mg/ml、0 ? 8mg/ml、1 ? Omg/ml、1 ? 2mg/ml、1 ? 4mg/ml葡萄糖標準溶液 進樣檢測，得葡萄糖標準液的濃度及吸光度，作出標準曲線；
[0021] 7)對測試液進行吸光度檢測，將測試液的吸光度代入標準曲線中，得樣品的葡萄 糖濃度并計算出樣品的相對葡萄糖濃度，對標準參考物進行吸光度檢測，將標準參考物的 吸光度代入標準曲線中，得標準參考物的葡萄糖濃度并計算出標準參考物的相對葡萄糖濃 度，通過樣品及標準參考物的相對葡萄糖濃度計算出HI值，將HI值帶入理論計算公式GI = 39 ? 71+(0 ? 549 XHI)中計算得 GI 值。
[0022] 優(yōu)選的，所述的標準參考物為白面包。
[0023] 優(yōu)選的，所述的相對葡萄糖濃度為樣品進行3〇111；[11、60111；[11、90111；[11、120111；[11、150111；[11、 180min消化后的葡萄糖濃度減去樣品在Omin時葡萄糖濃度。
[0024] 本發(fā)明有益效果是:本發(fā)明血糖生成指數(shù)體外檢測方法通過體外模擬人體消化的 方法，縮短了檢測時間，降低了檢測要求，解決了體內(nèi)檢測耗費大量的人力物力的問題。根 據(jù)體內(nèi)消化環(huán)境，在實驗過程中模擬其環(huán)境，對樣品進行處理，大大的降低了實驗周期及實 驗難度，并且可進行重復的大量的操作。
【附圖說明】
[0025] 圖1是葡萄糖標準溶液中葡萄糖濃度與吸光度的關(guān)系曲線圖；
[0026] 圖2是白面包的消化時間與吸光度之間的關(guān)系曲線圖；
[0027] 圖3是本發(fā)明實施例的消化時間與吸光度之間的關(guān)系曲線圖。
【具體實施方式】
[0028] 下面通過對實施例的描述，對本發(fā)明作進一步詳細的說明，以幫助本領(lǐng)域技術(shù)人 員對本發(fā)明的發(fā)明構(gòu)思、技術(shù)方案有更完整、準確和深入的理解。
[0029] -種血糖生成指數(shù)體外檢測方法，包括如下步驟：
[0030] 1)取20g樣品粉碎，過20目篩，取過篩后的含50mg碳水化合物的樣品放入酶反應器 中；
[0031 ] 2)模擬胃消化：向酶反應器中加入10ml KC1-HC1溶液，200ul胃蛋白酶溶液，于37 °C_40°C條件下水浴攪拌lh;
[0032] 3)模擬小腸消化：向酶反應器中加入磷酸緩沖液，使溶液pH值在6-7,然后加5ml淀 粉酶溶液，開始計時；
[0033] 4)在 〇111；[11、30111；[11、60111；[11、90111；[11、120111；[11、150111；[11、180111；[11消化時間點分別取11111測 試液于離心管中，并沸水浴滅酶5min，滅酶后冷卻；
[0034] 5)取冷卻后的測試液0.1ml于試管中，加水至2ml，加入2mlDNS，然后將試管放入沸 水浴中加熱6min，冷卻后轉(zhuǎn)移至容量瓶中，定容搖勻，待檢測；
[0035] 6)分光光度計預熱30min，狀態(tài)切換至A，波長為520nm，用蒸餾水調(diào)零，將Omg/ml、 0.2mg/ml、0 ? 4mg/ml、0 ? 6mg/ml、0 ? 8mg/ml、1 ? Omg/ml、1 ? 2mg/ml、1 ? 4mg/ml葡萄糖標準溶液 進樣檢測，得葡萄糖標準液的濃度及吸光度，作出標準曲線；
[0036] 7)對測試液進行吸光度檢測，將測試液的吸光度代入標準曲線中，得樣品的葡萄 糖濃度并計算出樣品的相對葡萄糖濃度，對白面包進行吸光度檢測，將白面包的吸光度代 入標準曲線中，得白面包的葡萄糖濃度并計算出白面包的相對葡萄糖濃度，通過樣品及白 面包的相對葡萄糖濃度計算出HI值，將HI值帶入理論計算公式GI = 39.71 + (0.549 XHI)中 計算得GI值。
[0037] 下表1為樣品和白面包在不同消化時間點的吸光度和相對葡糖糖濃度值：
[0038] 表1
【主權(quán)項】
1. 一種血糖生成指數(shù)體外檢測方法，其特征在于:通過模擬人體內(nèi)的消化系統(tǒng)，消化含 50mg碳水化合物的樣品，針對不同消化時間點取樣并加入3,5_二硝基水楊酸，經(jīng)還原反應 生成氨基化合物，對氨基化合物進行吸光度檢測，通過理論計算公式計算得血糖生成指數(shù)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的血糖生成指數(shù)體外檢測方法，其特征在于:所述模擬人體內(nèi)的 消化系統(tǒng)包括加入胃蛋白酶模擬胃消化的步驟及加入α-淀粉酶模擬小腸消化的步驟。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的血糖生成指數(shù)體外檢測方法，其特征在于:所述含50mg碳水化 合物的樣品的量是通過減重法計算得出，所述的碳水化合物（％ ) = 100-水分-灰分-脂肪-蛋白-膳食纖維（％)。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的血糖生成指數(shù)體外檢測方法，其特征在于:所述的模擬胃消化 的步驟包括：向樣品中加入IOmlKCl-HCl水溶液及200ul胃蛋白酶溶液，于37°C-40°C條件下 水浴攪拌lh，所述KCl-HCl水溶液中KCl、HC1、H 20質(zhì)量體積比為3.7275:4.2: lg/ml/1;所述 的胃蛋白酶溶液為胃蛋白酶與所述的KCl-HCl水溶液按質(zhì)量體積比為1:10g/ml的混合物。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的血糖生成指數(shù)體外檢測方法，其特征在于:所述的模擬小腸消 化的步驟包括：用磷酸緩沖液調(diào)節(jié)樣品的pH=6-7,然后加入5ml淀粉酶溶液，所述淀粉酶溶 液為淀粉酶與磷酸緩沖液按質(zhì)量體積比為0.02: lmg/ml的混合物。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的血糖生成指數(shù)體外檢測方法，其特征在于:所述的針對不同消 化時間點取樣，包括在〇111；[11、3〇111；[11、6〇111；[11、9〇111；[11、12〇111；[11、15〇111；[11、18〇111；[11時取樣。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的血糖生成指數(shù)體外檢測方法，其特征在于:所述的樣品模擬人 體內(nèi)消化后、加入3，5-二硝基水楊酸前需進行滅酶5min。8. 根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項所述的血糖生成指數(shù)體外檢測方法，其特征在于，包括如下 步驟： 1) 取20g樣品粉碎，過20目篩，取過篩后的含50mg碳水化合物的樣品放入酶反應器中； 2) 模擬胃消化：向酶反應器中加入IOml KCl-HCl溶液，200ul胃蛋白酶溶液，于37°C-40 °(：條件下水浴攪拌lh; 3) 模擬小腸消化：向酶反應器中加入磷酸緩沖液，使溶液pH值在6-7,然后加5ml淀粉酶 溶液，開始計時； 4) 在〇111；[11、3〇111；[11、6〇111；[11、9〇111；[11、12〇111；[11、15〇111；[11、18〇111；[11消化時間點分別取11111^測試液 于離心管中，并沸水浴滅酶5min，滅酶后冷卻； 5) 取冷卻后的測試液0.1ml于試管中，加水至2ml，加入2mlDNS，然后將試管放入沸水浴 中加熱6min，冷卻后轉(zhuǎn)移至容量瓶中，定容搖勻，待檢測； 6) 分光光度計預熱30min，狀態(tài)切換至A，波長為520nm，用蒸餾水調(diào)零，將Omg/ml、 0.2mg/ml、0 · 4mg/ml、0 · 6mg/ml、0 · 8mg/ml、1 · Omg/ml、1 · 2mg/ml、1 · 4mg/ml葡萄糖標準溶液 進樣檢測，得葡萄糖標準液的濃度及吸光度，作出標準曲線； 7) 對測試液進行吸光度檢測，將測試液的吸光度代入標準曲線中，得樣品的葡萄糖濃 度并計算出樣品的相對葡萄糖濃度，對標準參考物進行吸光度檢測，將標準參考物的吸光 度代入標準曲線中，得標準參考物的葡萄糖濃度并計算出標準參考物的相對葡萄糖濃度， 通過樣品及標準參考物的相對葡萄糖濃度計算出HI值，將HI值帶入理論計算公式GI = 39 · 71+(0 · 549 X HI)中計算得 GI 值。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的血糖生成指數(shù)體外檢測方法，其特征在于:所述的標準參考物 為白面包。
【文檔編號】G01N21/31GK105911007SQ201610421198
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年6月14日
【發(fā)明人】劉輝, 王成祥, 劉兵軍, 常玉飛
【申請人】安徽平唐微食療科技有限公司