一種左旋龍腦的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種左旋龍腦的檢測(cè)方法，該方法利用以八元瓜環(huán)與原黃素制備得到的超分子配合物作為探針S，以該探針S對(duì)左旋龍腦進(jìn)行定性和定量檢測(cè)，具體包括熒光探針S與左旋龍腦標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及樣品的測(cè)定三個(gè)步驟。本發(fā)明具有無需昂貴儀器、分析成本較低且簡單、靈敏、快速的特點(diǎn)。
【專利說明】
一種左旋龍腦的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明屬于分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種左旋龍腦的檢測(cè)方法。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003] 左旋龍腦為菊科植物艾納香的新鮮葉提取物，常被用于中成藥、高檔香料及食品 調(diào)香添加劑中，鑒于左旋龍腦具有抑菌、抗炎、活血、祛風(fēng)、消腫等作用，因此，測(cè)定左旋龍腦 的含量對(duì)研究其相關(guān)產(chǎn)品的功效具有重要意義。
[0004] 由于其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，左旋龍腦不具有紫外及熒光光譜。目前，已報(bào)道的左旋龍腦分析 方法主要采用毛細(xì)管氣相色譜法及高效液相色譜法，這些檢測(cè)方法存在檢測(cè)儀器昂貴、樣 品前處理復(fù)雜、分析成本高及有機(jī)溶劑使用過多的問題。因此，設(shè)計(jì)一種簡單、靈敏、快速的 左旋龍腦檢測(cè)方法是很必要的。
[0005] 熒光分子探針，由于具有高靈敏度、測(cè)試成本低廉、樣品處理及操作簡單、測(cè)定方 法快捷、無需昂貴儀器設(shè)備、易實(shí)現(xiàn)可視化和實(shí)時(shí)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)而備受青睞。目前，尚未見利 用熒光探針檢測(cè)左旋龍腦的相關(guān)報(bào)道。
[0006]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種無需昂貴儀器、分析成本較低且簡單、靈敏、快速的左 旋龍腦的檢測(cè)方法。
[0008] 本發(fā)明的一種左旋龍腦的檢測(cè)方法，該方法利用以八元瓜環(huán)與原黃素制備得到的 超分子配合物作為探針S，以該探針S對(duì)左旋龍腦進(jìn)行定性和定量檢測(cè)，具體包括以下步驟： (1) 熒光探針S與左旋龍腦標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制： 準(zhǔn)確稱取15. lmg八元瓜環(huán)與4.9mg原黃素混合，用二次蒸餾水配制成100 ml、八元瓜環(huán) 與原黃素摩爾濃度比為1:2、摩爾濃度為1.0X l(T4mol/L的熒光探針S溶液； 準(zhǔn)確稱取7.7mg左旋龍腦，用二次蒸餾水溶液配制成500ml、摩爾濃度為1.0 X 10-4 mol/L的左旋龍腦標(biāo)準(zhǔn)溶液； (2) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： 取10 ml容量瓶7個(gè)，每瓶加入1.0 ΧΚΓ4 mol/L熒光探針S溶液500ul后，分別準(zhǔn)確加入 0、50 · 0、100 · 0、150 · 0、200 · 0、250 · 0、300 · Oul 1 · 0 X 10-4mo 1/L 左旋龍腦標(biāo)準(zhǔn)溶液，用二次蒸 餾水定容至刻度，搖勻，室溫放置10_20min后，固定激發(fā)波長443nm進(jìn)行熒光發(fā)射光譜測(cè)定， 以左旋龍腦濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)511nm下熒光發(fā)射光譜強(qiáng)度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； (3) 樣品的測(cè)定： I、樣品前處理:取成分中含左旋龍腦的常規(guī)產(chǎn)品2ml，加入20ml無水乙醇混勻，再加入 3-5 g無水硫酸鈉干燥，減壓抽濾收集濾液，將所得濾液于水浴45°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，得 提取物;將提取物以l〇ml二次蒸餾水漩渦震蕩5-15min，得樣品溶液； π、樣品檢測(cè)： a) 標(biāo)準(zhǔn)曲線法:取10ml容量瓶3個(gè)，分別加入50ul以10ml二次蒸餾水漩渦震蕩5-15min 后得到的樣品溶液和500ul 1 .OX l(T4m〇l/L熒光探針S溶液，用二次蒸餾水定容至刻度，搖 勾，室溫放置10_20min后，固定激發(fā)波長443nm，發(fā)射波長51 lnm，測(cè)定焚光發(fā)射光譜強(qiáng)度，根 據(jù)熒光強(qiáng)度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品溶液中左旋龍腦的濃度，實(shí)驗(yàn)平行測(cè)定3次，取平均值； b) 標(biāo)準(zhǔn)加入法:取10 ml容量瓶5個(gè)，分別加入50ul以10ml二次蒸餾水漩渦震蕩5-15min 后得到的樣品溶液、500ul 1.0 X 10-4mol/L熒光探針S溶液后，依次加入0、25.0、50.0、75.0、 100.0 ul 1.0 X l(T4m〇l/L左旋龍腦標(biāo)準(zhǔn)溶液，用二次蒸餾水定容至刻度，搖勻，室溫放置 10-20min后，固定激發(fā)波長443nm，發(fā)射波長51 lnm，測(cè)定焚光發(fā)射光譜強(qiáng)度，根據(jù)焚光強(qiáng)度 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，延長標(biāo)準(zhǔn)曲線與橫坐標(biāo)的交點(diǎn)，計(jì)算樣品溶液中左旋龍腦的含量，實(shí)驗(yàn)平行 測(cè)定3次，取平均值。
[0009] 上述的一種左旋龍腦的檢測(cè)方法，其中：所述標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程為：If=0.50c+ 42.8，左旋龍腦檢出限為5.12 X 10-8mol/L，線性范圍為0.0-3.0 X 10-6mol/L。
[0010] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有明顯有益效果，從以上技術(shù)方案可知:本發(fā)明是基于 八元瓜環(huán)可使原黃素的熒光發(fā)生猝滅從而形成超分子配合物熒光探針S，當(dāng)在熒光探針S中 加入左旋龍腦后，左旋龍腦與探針S形成新的三元復(fù)合物，使猝滅的熒光得到恢復(fù)，利用此 種超分子化合物的熒光開關(guān)效應(yīng)，從而建立的一種左旋龍腦的檢測(cè)方法。
[0011]在水溶液中，單獨(dú)存在的熒光探針S，固定激發(fā)波長443nm，狹縫5nm，電壓550v時(shí)熒 光發(fā)射波長511nm處熒光強(qiáng)度值弱，左旋龍腦無熒光光譜性質(zhì)，在探針S中加入左旋龍腦后， 溶液熒光發(fā)射光譜對(duì)應(yīng)511nm處熒光發(fā)射強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，并在365nm紫外燈下觀察到黃綠色 強(qiáng)熒光，結(jié)果表明探針S對(duì)左旋龍腦具有識(shí)別檢測(cè)性能。通過在相同條件下，于探針S+左旋 龍腦水溶液中加入可能存在的干擾物質(zhì)(樟腦、乙醇、聚乙二醇）后對(duì)比熒光發(fā)射強(qiáng)度的實(shí) 驗(yàn)表明，該熒光體系具有一定的抗干擾性。
[0012] 本發(fā)明所提供的左旋龍腦的檢測(cè)方法較傳統(tǒng)毛細(xì)管氣相色譜法，高效液相色譜法 檢測(cè)左旋龍腦更為快速、簡單、靈敏，且能夠?qū)崿F(xiàn)大批樣品的快速現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。
[0013]
【附圖說明】
[0014] 圖1是熒光探針S溶液熒光光譜法檢測(cè)左旋龍腦的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖（激發(fā)波長為443nm， 狹縫5nm，電壓550v); 圖2是可能存在的干擾物質(zhì)對(duì)體系的干擾實(shí)驗(yàn)圖。
[0015]
【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面通過實(shí)施例配合實(shí)驗(yàn)結(jié)果來進(jìn)一步說明本發(fā)明的有益效果。
[0017] -種左旋龍腦的檢測(cè)方法，包括以下步驟： (1)熒光探針S與左旋龍腦標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制： 準(zhǔn)確稱取15. lmg八元瓜環(huán)與4.9mg原黃素混合，用二次蒸餾水配制成100 ml、八元瓜環(huán) 與原黃素摩爾濃度比為1: 2、摩爾濃度為1.0 X 10_4mol/L的熒光探針S溶液； 準(zhǔn)確稱取7.7mg左旋龍腦，用二次蒸餾水溶液配制成500ml、摩爾濃度為1. Ο X 10-4 mol/L的左旋龍腦標(biāo)準(zhǔn)溶液； (2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： 取10 ml容量瓶7個(gè)，每瓶加入1.0 Χ10-4 mol/L熒光探針S溶液500ul后，分別準(zhǔn)確加 入0、50 · 0、100 · 0、150 · 0、200 · 0、250 · 0、300 · Oul 1 · 0 X 10-4mo 1/L左旋龍腦標(biāo)準(zhǔn)溶液，用二次 蒸餾水定容至刻度，搖勾，室溫放置l〇min后，固定激發(fā)波長443nm進(jìn)行焚光發(fā)射光譜測(cè)定， 每組實(shí)驗(yàn)平行測(cè)定三次，以左旋龍腦濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)三次實(shí)驗(yàn)中51 lnm下熒光發(fā)射光譜 強(qiáng)度平均值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0018] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，左旋龍腦響應(yīng)的濃度線性范圍為0.0-3.0Xl(T6m〇l/L，檢出限為 5.12Xl(TV 〇l/L，不同濃度的左旋龍腦可使體系的熒光強(qiáng)度發(fā)生不同程度的增強(qiáng)，該方法 可用于左旋龍腦的定量檢測(cè)。見圖1。
[0019] 注:將上述標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制中用二次蒸餾水定容至刻度、搖勻后，室溫放置的時(shí)間調(diào) 整為15min或20min，均可得到相同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0020] (3)樣品的測(cè)定： I、樣品前處理:取成分中含左旋龍腦的空氣清新劑2ml，加入20ml無水乙醇混勻，再加 入3g無水硫酸鈉干燥，減壓抽濾收集濾液，將所得濾液于水浴45 °C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，得提 取物；以前述方法平行處理最終得兩份提取物，其中一份以l〇ml乙腈漩渦震蕩5min，另一份 用10ml二次蒸餾水漩渦震蕩5min，得樣品溶液； Π、樣品檢測(cè)： a) 高效液相色譜法:將以10ml乙腈漩渦震蕩5min后得到的樣品溶液送樣，以高效液相 色譜法測(cè)定其中左旋龍腦的含量； b) 標(biāo)準(zhǔn)曲線法:取10ml容量瓶3個(gè)，分別加入50ul以10ml二次蒸餾水漩渦震蕩5min后得 到的樣品溶液和500ul 1 .OX l(T4m〇l/L熒光探針S溶液，用二次蒸餾水定容至刻度，搖勻，室 溫放置l〇min后，固定激發(fā)波長443nm，發(fā)射波長51 lnm，測(cè)定熒光發(fā)射光譜強(qiáng)度，根據(jù)熒光強(qiáng) 度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品溶液中左旋龍腦的濃度，實(shí)驗(yàn)平行測(cè)定3次，取平均值； c) 標(biāo)準(zhǔn)加入法:取10 ml容量瓶5個(gè)，分別加入50ul以10ml二次蒸餾水漩渦震蕩5min后 得到的樣品溶液、500ul 1.0 X ΙθΛιοΙ/L熒光探針S溶液后，依次加入0、25.0、50.0、75.0、 100.0 ul 1.0 X l(T4m〇l/L左旋龍腦標(biāo)準(zhǔn)溶液，用二次蒸餾水定容至刻度，搖勻，室溫放置 10min后，固定激發(fā)波長443nm，發(fā)射波長51 lnm，測(cè)定焚光發(fā)射光譜強(qiáng)度，根據(jù)焚光強(qiáng)度繪制 標(biāo)準(zhǔn)曲線，延長標(biāo)準(zhǔn)曲線與橫坐標(biāo)的交點(diǎn)，計(jì)算樣品溶液中左旋龍腦的含量，實(shí)驗(yàn)平行測(cè)定 3次，取平均值。
[0021] 檢測(cè)結(jié)果見下表。
[0022] 采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法及標(biāo)準(zhǔn)加入法對(duì)樣品中左旋龍腦含量測(cè)定結(jié)果表明，本發(fā)明與傳 統(tǒng)高效液相色譜法檢測(cè)結(jié)果一致，且方法重現(xiàn)性較好。
[0023]注:將上述樣品檢測(cè)中無水硫酸鈉的質(zhì)量調(diào)整為4g或5g、漩渦震蕩的時(shí)間調(diào)整為 lOmin或15min、室溫放置的時(shí)間調(diào)整為15min或20min，均可得到相同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0024] (4)干擾物質(zhì)對(duì)體系的干擾實(shí)驗(yàn)： 將可能存在的干擾物質(zhì)(樟腦、乙醇、聚乙二醇)稱取適量用二次蒸餾水配制成一定濃 度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
[0025] a)在10.0 ml容量瓶中加入濃度為1.0X10_4mol/L熒光探針S溶液0.5ml，1.0X ΙθΛιοΙ/L左旋龍腦標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5ml，二次蒸餾水定容至刻度，搖勻，室溫放置10分鐘，此時(shí) 熒光探針S，左旋龍腦摩爾濃度比為1:1; b)在10.0 ml容量瓶中加入濃度為1.0X10_4mol/L熒光探針S溶液0.5 ml，1.0X10_4 mol/L左旋龍腦標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5ml，以及1.0 X l(T4m〇l/L樟腦標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2ml，二次蒸餾水定 容至刻度，搖勻，室溫放置10分鐘；在10.0 ml容量瓶中加入濃度為1.0Xl(T4m〇l/L熒光探 針S溶液0.5 ml，1.0X10-4 mol/L左旋龍腦標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5ml，以及1.0X10-Vol/L乙醇標(biāo) 準(zhǔn)溶液0.5ml，二次蒸餾水定容至刻度，搖勻，室溫放置10分鐘;在10.0 ml容量瓶中加入濃 度為1.0X10-4mol/L探針S水溶液0.5 ml，1.0X10-4 mol/L左旋龍腦標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5ml，以 及5.0 X l(T3m〇l/L聚乙二醇標(biāo)準(zhǔn)溶液lml，二次蒸餾水定容至刻度，搖勻，室溫放置10分鐘； 固定相同激發(fā)波長443nm，狹縫5nm，電壓550v，測(cè)定511nm下兩組溶液焚光發(fā)射光譜強(qiáng) 度，每組實(shí)驗(yàn)平行測(cè)定3次，取平均值。
[0026]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)樟腦濃度低于2μΜ，乙醇、聚乙二醇含量為左旋龍腦含量的100倍 時(shí)，對(duì)左旋龍腦的檢測(cè)均不造成干擾。見圖2。
[0027] 以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非對(duì)本發(fā)明作任何形式上的限制，任何未 脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡單修改、等 同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種左旋龍腦的檢測(cè)方法，其特征在于:利用以八元瓜環(huán)與原黃素制備得到的超分 子配合物作為探針S，以該探針S對(duì)左旋龍腦進(jìn)行定性和定量檢測(cè)，具體包括以下步驟： (1) 熒光探針S與左旋龍腦標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制： 準(zhǔn)確稱取15. lmg八元瓜環(huán)與4.9mg原黃素混合，用二次蒸餾水配制成100 ml、八元瓜環(huán) 與原黃素摩爾濃度比為1:2、摩爾濃度為1.0X l(T4mol/L的熒光探針S溶液； 準(zhǔn)確稱取7.7mg左旋龍腦，用二次蒸餾水溶液配制成500ml、摩爾濃度為1.0 X 1(T4 mol/ L的左旋龍腦標(biāo)準(zhǔn)溶液； (2) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： 取10 ml容量瓶7個(gè)，每瓶加入1.0ΧΠΓ4 mol/L熒光探針S溶液500ul后，分別準(zhǔn)確加入 0、50 · 0、100 · 0、150 · 0、200 · 0、250 · 0、300 · Oul 1 · 0 X 10-4mo 1/L 左旋龍腦標(biāo)準(zhǔn)溶液，用二次蒸 餾水定容至刻度，搖勻，室溫放置10_20min后，固定激發(fā)波長443nm進(jìn)行熒光發(fā)射光譜測(cè)定， 以左旋龍腦濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)511nm下熒光發(fā)射光譜強(qiáng)度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； (3) 樣品的測(cè)定： 1、 樣品前處理：取成分中含左旋龍腦的常規(guī)產(chǎn)品2ml，加入20ml無水乙醇混勻，再加入 3-5 g無水硫酸鈉干燥，減壓抽濾收集濾液，將所得濾液于水浴45°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，得 提取物;將提取物以l〇ml二次蒸餾水漩渦震蕩5-15min，得樣品溶液； Π 、樣品檢測(cè)： a) 標(biāo)準(zhǔn)曲線法:取10ml容量瓶3個(gè)，分別加入50ul以10ml二次蒸餾水漩渦震蕩5-15min 后得到的樣品溶液和500ul 1 .OX l(T4m〇l/L熒光探針S溶液，用二次蒸餾水定容至刻度，搖 勾，室溫放置10_20min后，固定激發(fā)波長443nm，發(fā)射波長51 lnm，測(cè)定焚光發(fā)射光譜強(qiáng)度，根 據(jù)熒光強(qiáng)度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品溶液中左旋龍腦的濃度，實(shí)驗(yàn)平行測(cè)定3次，取平均值； b) 標(biāo)準(zhǔn)加入法:取10 ml容量瓶5個(gè)，分別加入50ul以10ml二次蒸餾水漩渦震蕩5-15min 后得到的樣品溶液、500ul 1.0 X 10-4mol/L熒光探針S溶液后，依次加入0、25.0、50.0、75.0、 100.0 ul 1.0 X l(T4m〇l/L左旋龍腦標(biāo)準(zhǔn)溶液，用二次蒸餾水定容至刻度，搖勻，室溫放置 10-20min后，固定激發(fā)波長443nm，發(fā)射波長51 lnm，測(cè)定焚光發(fā)射光譜強(qiáng)度，根據(jù)焚光強(qiáng)度 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，延長標(biāo)準(zhǔn)曲線與橫坐標(biāo)的交點(diǎn)，計(jì)算樣品溶液中左旋龍腦的含量，實(shí)驗(yàn)平行 測(cè)定3次，取平均值。2. 如權(quán)利要求1所述的一種左旋龍腦的檢測(cè)方法，其特征在于:所述標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程 為：lf=0.50c+42.8，左旋龍腦檢出限為5.12 X 10-8mol/L，線性范圍為0.0-3.0 X 10-6mol/L。
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK105866081SQ201610209318
【公開日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年4月6日
【發(fā)明人】黃英, 席蕓蕓, 唐青, 張靜, 陶朱, 康冀川, 王魯
【申請(qǐng)人】貴州大學(xué)