一種快速檢測保健品中維生素e的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及利用柱色譜法來測試材料，尤其是一種檢測保健品中維生素 E的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 維生素 E是生育酚類化合物的總稱，是苯并二氫呋喃的衍生物，又稱生殖維生素、 生育酚等，是最主要的抗氧化劑之一。其能促進(jìn)性激素分泌，使男子精子活力和數(shù)量增加， 使女子雌性激素濃度增高，提高生育能力，預(yù)防流產(chǎn)，還可用于防治燒傷、凍傷、毛細(xì)血管出 血、更年期綜合癥、美容等方面。近來還發(fā)現(xiàn)維生素 E可抑制眼睛晶狀體內(nèi)的過氧化脂反應(yīng)， 使末梢血管擴(kuò)張，改善血液循環(huán)，預(yù)防近視發(fā)生和發(fā)展。目前，維生素 E廣泛應(yīng)用在食品、保 健品、醫(yī)藥、化妝品等領(lǐng)域，越來越受到人們的關(guān)注。
[0003] 隨著社會(huì)的發(fā)展，市場上出現(xiàn)了越來越多的保健品中標(biāo)明富含各種維生素，劑型 有片劑、沖劑或膠囊劑等，鑒于維生素 E不穩(wěn)定，在空氣中易被氧化，見光易分解的特性，有 的維生素 E多以微膠囊或微粒的形式存在，加上維生素 E是脂溶性維生素，他們較易在體內(nèi) 蓄積，當(dāng)食用過量會(huì)導(dǎo)致中毒。因此，對(duì)含有維生素 E的保健品進(jìn)行測定顯得尤為重要。目 前，食品國家標(biāo)準(zhǔn)方法僅限于GB5413.9-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中維生 素 A、D、E的測定、GB/T5009.82-2003食品中維生素 A和維生素 E的測定、GB19191-2003食品添 加劑天然維生素 E、GB14756-2010食品添加劑維生素 E(dl-a醋酸生育酚）四種檢測方法。而 對(duì)于保健食品生產(chǎn)過程中最主要的原料中維生素 E的測定方法并沒有明確的規(guī)定。通過實(shí) 驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用國標(biāo)的方法檢測維生素 E存在如下問題:前兩種國家標(biāo)準(zhǔn)檢測方法采用皂化提 取法，全部實(shí)驗(yàn)過程費(fèi)時(shí)，操作繁瑣，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程試劑消耗量較大，檢測周期較長。該皂化 法通常適用于維生素含量不高的試樣，可減少脂溶性物質(zhì)的干擾，若采用皂化法對(duì)含有維 生素 E的樣品進(jìn)行處理，會(huì)導(dǎo)致樣品中為維生素 E的嚴(yán)重?fù)p失，從而導(dǎo)致檢測結(jié)果不能真實(shí) 反映樣品中維生素 E的含量，影響檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。因此，用前兩種國家標(biāo)準(zhǔn)檢測方法重 現(xiàn)性差，準(zhǔn)確率低，試劑消耗量大。后兩種國家標(biāo)準(zhǔn)方法所用儀器為氣相色譜法，該方法是 使樣品瞬間氣化，然后通過氫火焰離子化檢測器分離出來，因維生素 E易氧化分解，氣化溫 度為300°C，還需一種內(nèi)標(biāo)物(正三十二烷或十六酸十六醇酯），操作起來比較繁瑣，每次都 需配置內(nèi)標(biāo)物溶液。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了克服現(xiàn)有技術(shù)中皂化法檢測維生素 E存在重現(xiàn)性差、準(zhǔn)確率低、試劑消耗量大 及氣相色譜法檢測維生素 E存在操作繁瑣的不足，本發(fā)明提供一種重現(xiàn)性好、操作簡便、準(zhǔn) 確率高、試劑消耗量小的快速檢測保健品中維生素 E的方法。
[0005] 本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采有的技術(shù)方案為:一種快速檢測保健品中維生素 E的 方法，其特征在于:其經(jīng)過下列步驟： (1)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備： ①分別取維生素 Ε、γ -維生素 Ε、δ-維生素 E各20mg，于50ml容量瓶中，加甲醇適量溶 解，分別用甲醇稀釋至刻度，充分搖勻;經(jīng)ο. 45um濾膜濾過，濾液作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液； ② 按照公式:C=AX 1 X 10/EX 100XVX ΚΓ6分別計(jì)算出各維生素 E標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的濃度； 其中，在所述的公式中， V代表加入各維生素 E標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的量，為300ul; E代表各維生素 E標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1%的比吸光系數(shù)，α-維生素 Ε、γ -維生素 Ε、δ-維生素 E分別 為71、92.8、91.2; Α代表各維生素 Ε的平均紫外吸光值，α-維生素 Ε、γ -維生素 Ε、δ-維生素 Ε分別為294、 298、298; 10/V X ΚΓ6代表標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋倍數(shù)； ③ 分別取上述步驟①各維生素 Ε中的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液O.lml，用甲醇稀釋定容至10ml，得到 維生素 E的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液； (2) 待測樣品溶液的制備： ① 維生素 E為粉狀樣品:稱取質(zhì)量為m克的待測樣品于50ml容量瓶中，加入5ml、10%淀粉 酶，2ml水，混勾，于60~65°C超聲波水浴處理20~40min，靜置冷卻至室溫，然后加入30~ 40ml甲醇超聲10~20min，放冷用甲醇定容至刻度，搖勾，過0.45um濾膜，待上機(jī)； ② 維生素 E為油狀樣品：稱取質(zhì)量為m克的待測樣品于50ml容量瓶中，加入30~40ml甲 醇超聲10~20min，放冷用甲醇定容至刻度，搖勾，過0.45um濾膜，待上機(jī)； (3) 取步驟(1)的標(biāo)準(zhǔn)品溶液、步驟(2)的待測樣品溶液分別注入高效液相色譜儀中，用 安捷倫反相色譜柱進(jìn)行色譜分離，二極管陣列檢測器檢測，得到標(biāo)準(zhǔn)品溶液色譜圖、待測樣 品溶液色譜圖，通過上述各維生素 E的保留時(shí)間定性判定待測樣品溶液中維生素 E的種類； (4) 通過維生素 E標(biāo)準(zhǔn)品溶液與待測樣品溶液中各維生素 E色譜圖中峰面積的比例關(guān) 系，并根據(jù)各維生素 E標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，分別可獲得待測樣品中各維生素 E的濃度;根據(jù)定容體 積及稱樣量最終可計(jì)算出樣品的含量。
[0006] 所述的高效液相色譜儀的條件為:安捷倫C8或C18柱，其中，柱長150mm或250mm，內(nèi) 徑4 · 6mm，粒徑5um;流動(dòng)相：甲醇+水=98+2或95+5 (V+V);檢測波長：285nm或292nm;流速： 1 ·0~1.2ml/min;柱溫：（30±2)°C;進(jìn)樣量：20ul。
[0007] 所述的二極管陣列檢測器的條件為:檢測波長為204~280nm，色譜峰出峰時(shí)間為： α-維生素 E為8.8 ±0.2min、γ -維生素 E為9.9 ±0.2min、δ-維生素 E為11.1 ±0.2min。
[0008] 進(jìn)一步，高效液相色譜儀的條件為:安捷倫C8柱，其中，柱長150mm，內(nèi)徑4.6mm，粒 徑5um;流動(dòng)相：甲醇+水=98+2(V+V);檢測波長：285nm;流速：1 · 2ml/min;柱溫：（30 ± 2)°C; 進(jìn)樣量:20ul。
[0009] 本發(fā)明利用高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分析，不受樣品揮發(fā)性和溶解性的限制，重 現(xiàn)性好，操作簡便易行，故特別適合維生素 E的鑒定檢測。本發(fā)明具有高效、速度快、靈敏度 高、需要的樣品量少，所需試劑少等優(yōu)點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明。
[0011] 實(shí)施例1 一種快速檢測保健品中維生素 E的方法，其經(jīng)過下列步驟： (1) 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備： ① 分別取α-維生素 Ε、γ -維生素 Ε、δ-維生素 E各20mg，于50ml容量瓶中，加甲醇適量溶 解，分別用甲醇稀釋至刻度，充分搖勻;經(jīng)〇. 45um濾膜濾過，濾液作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液； ② 用下表所述條件用紫外分光光度計(jì)測定各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的吸光值，用各自的比吸光系 數(shù)E，按照公式:C=A X 1 X 10/E X 100 X V X 10-6分別計(jì)算出各維生素 E標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的濃度；
即:V代表加入各維生素 Ε標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的量，為300ul; E代表各維生素 E標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1%的比吸光系數(shù)，α-維生素 Ε、γ -維生素 Ε、δ-維生素 E分別 為71、92.8、91.2; Α代表各維生素 Ε的平均紫外吸光值，α-維生素 Ε、γ -維生素 Ε、δ-維生素 Ε分別為294、 298、298; 10/V X ΚΓ6代表標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋倍數(shù)； ③ 分別取上述步驟①各維生素 Ε中的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.1ml，用甲醇稀釋定容至10ml，得到 維生素 E的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液； (2) 待測樣品溶液的制備： 維生素 E為粉狀樣品：稱取質(zhì)量為m克的待測樣品于50ml容量瓶中，加入5ml、10%淀粉 酶，2ml水，混勻，于60°C超聲波水浴處理40min，靜置冷卻至室溫，然后加入30ml甲醇超聲 20min，放冷用甲醇定容至刻度，搖勾，過0.45um濾膜，待上機(jī)； (3) 取步驟(1)的標(biāo)準(zhǔn)品溶液、步驟(2)的待測樣品溶液分別注入高效液相色譜儀中，用 安捷倫反相色譜柱進(jìn)行色譜分離，二極管陣列檢測器檢測，得到標(biāo)準(zhǔn)品溶液色譜圖、待測樣 品溶液色譜圖，通過上述各維生素 E的保留時(shí)間定性判定待測樣品溶液中維生素 E的種類； (4) 通過維生素 E標(biāo)準(zhǔn)品溶液與待測樣品溶液中各維生素 E色譜圖中峰面積的比例關(guān) 系，并根據(jù)各維生素 E標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，分別可獲得待測樣品中各維生素 E的濃度;根據(jù)定容體 積及稱樣量最終可計(jì)算出樣品的含量。
[0012] 實(shí)施例2 一種快速檢測保健品中維生素 E的方法，其經(jīng)過下列步驟： (1)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備： ① 分別取α-維生素 Ε、γ -維生素 Ε、δ-維生素 E各20mg，于50ml容量瓶中，加甲醇適量溶 解，分別用甲醇稀釋至刻度，充分搖勻;經(jīng)〇. 45um濾膜濾過，濾液作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液； ② 用下表所述條件用紫外分光光度計(jì)測定各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的吸光值，用各自的比吸光系 數(shù)E，按照公式:C=A X 1 X 10/E X 100 X V X 10-6分別計(jì)算出各維生素 E標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的濃度；
即:V代表加入各維生素 Ε標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的量，為300ul; E代表各維生素 E標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1%的比吸光系數(shù)，α-維生素 Ε、γ -維生素 Ε、δ-維生素 E分別 為71、92·8、91·2; Α代表各維生素 Ε的平均紫外吸光值，α-維生素 Ε、γ -維生素 Ε、δ-維生素 Ε分別為294、 298、298; 10/V X ΚΓ6代表標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋倍數(shù)； ③分別取上述步驟①各維生素 Ε中的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.1ml，用甲醇稀釋定容至10ml，得到 維生素 E的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液； (2) 待測樣品溶液的制備： 維生素 E為粉狀樣品：稱取質(zhì)量為m克的待測樣品于50ml容量瓶中，加入5ml、10%淀粉 酶，2ml水，混勻，于65°C超聲波水浴處理30min，靜置冷卻至室溫，然后加入40ml甲醇超聲 1 Omin，放冷用甲醇定容至刻度，搖勾，過0.45um濾膜，待上機(jī)； (3) 取步驟(1)的標(biāo)準(zhǔn)品溶液、步驟(2)的待測樣品溶液分別注入高效液相色譜儀中，用 安捷倫反相色譜柱進(jìn)行色譜分離，二極管陣列檢測器檢測，得到標(biāo)準(zhǔn)品溶液色譜圖、待測樣 品溶液色譜圖，通過上述各維生素 E的保留時(shí)間定性判定待測樣品溶液中維生素 E的種類； (4) 通過維生素 E標(biāo)準(zhǔn)品溶液與待測樣品溶液中各維生素 E色譜圖中峰面積的比例關(guān) 系，并根據(jù)各維生素 E標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，分別可獲得待測樣品中各維生素 E的濃度;根據(jù)定容體 積及稱樣量最終可計(jì)算出樣品的含量。
[0013] 實(shí)施例3 一種快速檢測保健品中維生素 E的方法，其經(jīng)過下列步驟： (1) 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備： ① 分別取α-維生素 Ε、γ -維生素 Ε、δ-維生素 E各20mg，于50ml容量瓶中，加甲醇適量溶 解，分別用甲醇稀釋至刻度，充分搖勻;經(jīng)〇. 45um濾膜濾過，濾液作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液； ② 用下表所述條件用紫外分光光度計(jì)測定各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的吸光值，用各自的比吸光系 數(shù)E，按照公式:C=A X 1 X 10/E X 100 X V X 10-6分別計(jì)算出各維生素 E標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的濃度；
即:V代表加入各維生素 Ε標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液