一種牡丹皮配方顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種牡丹皮配方顆粒的薄層色譜鑒別方法和含量測(cè)定方法，屬于中藥 質(zhì)量檢測(cè)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 牡丹皮配方顆粒為毛茛科植物牡丹PaeoniasuffruticosaAndr的干燥根皮制成 的配方顆粒，氣芳香，味微苦而澀，具有清熱涼血，活血化瘀等功效，主要用于：熱入營(yíng)血，溫 毒發(fā)斑，吐血衄血，夜熱早涼，無汗骨蒸，經(jīng)閉痛經(jīng)，跌撲傷痛，癰腫瘡毒。
[0003] 中藥配方顆粒是以符合炮制規(guī)范的單味中藥飲片為原料，采用現(xiàn)代制藥工業(yè)的先 進(jìn)工藝和方法，經(jīng)提取、濃縮、干燥、制粒制成一定規(guī)格供醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床配方使用的制成品， 是中藥飲片的一種補(bǔ)充形式，可供臨床醫(yī)生替代中藥飲片使用，變傳統(tǒng)中藥湯劑的大包飲 片用砂鍋合煎、過濾飲服等繁雜操作為規(guī)范化工業(yè)大生產(chǎn)、小包裝、水沖即服。與傳統(tǒng)中藥 飲片相比，工業(yè)化批量生產(chǎn)的中藥配方顆粒，品質(zhì)更加均一，依據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)的結(jié)果（數(shù) 據(jù)和圖譜）重現(xiàn)性好，既保持了原中藥飲片的藥性、藥味和藥效，又具有不需煎煮，療效確 切，使用、攜帶方便，安全等優(yōu)點(diǎn)，是傳統(tǒng)中藥飲片與時(shí)俱進(jìn)的產(chǎn)物，是"源于飲片，高于飲 片"的現(xiàn)代中藥湯劑。中藥配方顆粒不僅用于中醫(yī)臨床配方，還可用作中成藥的原料藥品、 保健食品、食品、日用化妝品、精細(xì)化工品、獸用藥品等方面。它將成為介于中藥飲片和中成 藥之間的一個(gè)新興產(chǎn)業(yè)。
[0004] 與傳統(tǒng)的中藥煎劑相比，中藥配方顆粒具有免煎易服，易儲(chǔ)存，攜帶方便等優(yōu)點(diǎn)。 但中藥配方顆粒經(jīng)過一系列工序的加工后已失去藥材的外形特征，難以靠性狀鑒別來對(duì)藥 材進(jìn)行鑒定，且在其質(zhì)量控制上也與原藥材有所不同。薄層色譜法操作簡(jiǎn)單，方便，適用于 中藥材及各種中藥制劑的定性鑒別。高效液相色譜法靈敏度高，適用于各種制劑的定量分 析。本發(fā)明采用薄層色譜法對(duì)牡丹皮配方顆粒進(jìn)行定性鑒別，同時(shí)采用高效液相色譜法對(duì) 其中的丹皮酚進(jìn)行含量測(cè)定，旨在建立一種牡丹皮配方顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，該方法可用 于牡丹皮配方顆粒的質(zhì)量控制，對(duì)保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性及臨床用藥的有效性與安全性具 有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供牡丹皮配方顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，該方法包括：（1)薄層 色譜鑒別方法測(cè)定方法和（2)高效液相色譜法含量測(cè)定方法。其中：
[0006] (1)薄層鑒別：取本品粉末lg，加乙醚10ml，密塞，振搖10分鐘，濾過，濾液揮干， 殘?jiān)颖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取牡丹皮對(duì)照藥材0. 5g，加乙醚10ml，密塞，振 搖10分鐘，濾過，濾液揮干，殘?jiān)颖?ml使溶解。再取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每lml 含5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2010年版一部附錄VIB的薄層色譜法試驗(yàn)， 吸取上述溶液各10μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)已烷-醋酸乙酯（3:1)為展開 劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品 色譜中，在與對(duì)照品色譜及對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)。
[0007] (2)含量測(cè)定：照高效液相色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄VID)測(cè)定；
[0008] 色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以四氫呋喃-4%磷酸水溶液 (70:30)為流動(dòng)相；DAD檢測(cè)器檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm，柱溫30°C，流速：lml/min。
[0009] 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取丹皮酚對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶 液，即得。
[0010] 供試品溶液的制備：取牡丹皮配方顆粒粉末〇. 4g，精密稱定，置10ml量瓶中，加甲 醇適量，超聲振蕩30分鐘，放至室溫，加甲醇至刻度，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液為供試品 溶液。
[0011] 測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液?〇μ1、供試品溶液?〇μ1，注入液相色譜儀，測(cè) 定，即得。
[0012] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，靈敏度高，精密度、穩(wěn)定性好，采用HPLC法測(cè) 定牡丹皮配方顆粒中丹皮酚的含量，峰形好，分離度高，可作為牡丹皮配方顆粒的質(zhì)量控制 和考察工藝穩(wěn)定性的有效技術(shù)手段，對(duì)提商廣品質(zhì)量具有重大意義。
【附圖說明】
[0013] 圖1:牡丹皮配方顆粒TLC圖，1是丹皮酚對(duì)照品；2是對(duì)照藥材；3~8是六批牡 丹皮配方顆粒供試品。
[0014] 圖2:牡丹皮配方顆粒HPLC圖譜，Α是對(duì)照品圖譜；Β是供試品1丹皮酚。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 實(shí)施例1:牡丹皮配方顆粒的薄層色譜鑒別
[0016] 薄層鑒別：取本品粉末lg，加乙醚10ml，密塞，振搖10分鐘，濾過，濾液揮干，殘?jiān)?加丙酮2ml使溶解，作為供試品溶液；另取牡丹皮對(duì)照藥材0. 5g，加乙醚10ml，密塞，振搖 10分鐘，濾過，濾液揮干，殘?jiān)颖?ml使溶解。再取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每lml含 5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照中國(guó)藥典2010年版一部附錄VIB的薄層色譜法試驗(yàn)，吸 取上述溶液各10μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)已烷-醋酸乙酯（3:1)為展開劑， 展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色 譜中，在與對(duì)照品色譜及對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)。
[0017] 實(shí)施例2:牡丹皮配方顆粒的含量測(cè)定方法
[0018] 含量測(cè)定：照高效液相色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄VID)測(cè)定；
[0019] 1、儀器與試藥
[0020] (1)儀器：DioexUltiMate3000高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器，四元梯度泵，變色龍 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。
[0021] (2)試藥：四氫呋喃、甲醇為色譜純?cè)噭‵isherScientific)，水為雙蒸水，其它 試劑均為分析純。丹皮酚對(duì)照品（批號(hào)：110708-200506)購于中國(guó)藥品生物制品檢定所。
[0022] 2、實(shí)驗(yàn)條件
[0023] (1)色譜條件：色譜柱：UnitaryC185uml00A(4. 6_X150mm);流動(dòng)相：四氫呋 喃-4%磷酸水溶液（70:30);檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm;柱溫：30°C;流速：1.OmL/min。
[0024] 3、方法學(xué)考察
[0025] (1)線性范圍的考察：
[0026] 精密量取丹皮酚對(duì)照品溶液1. 5, 2. 0, 3. 0μ1及對(duì)照品儲(chǔ)備液1. 0, 5. 0,10. 0μ1， 注入液相色譜儀進(jìn)行色譜測(cè)定，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，并以峰面積（Υ)對(duì)進(jìn)樣量（X) 進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0027]得回歸方程：Υ= 17. 8017X-L4441，r= 0· 99982;表明丹皮酚在 0· 5008 ~ 12. 52μg范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。
[0028] 結(jié)果見表1。
[0029] 表1丹皮酚對(duì)照品測(cè)定結(jié)果
[0030]
[0031] (2)精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液5μ1重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積積分值RSD < 2%，結(jié)果見表2。
[0032] 表2精密度試驗(yàn)結(jié)果
[0033]
[0034] (3)穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品（批號(hào)：120915)溶液10μ1，按含量測(cè)定項(xiàng)下方法 測(cè)定5次，結(jié)果丹皮酚峰面積積分值的RSD(η= 5) < 2%，表明8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表 3〇
[0035] 表3穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
[0036]
[0037] (4)重復(fù)性試驗(yàn)：按擬定的含量測(cè)定方法，對(duì)同一批樣品（批號(hào)：120915)分別制5 份供試液，測(cè)得丹皮酚峰面積并計(jì)算含量，RSD< 2%，結(jié)果見表4。
[0038] 表4樣品重復(fù)性試驗(yàn)（η= 2)
[0039]
[0040] (5)同收率試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號(hào)120915)，分別精密加入一定量的丹皮 酚對(duì)照品，按供試品制備與測(cè)定方法，平行做6組，結(jié)果見表5。
[0041] 表5丹皮酚回收率測(cè)定結(jié)果
[0042]
[0043] (6)樣品測(cè)定：
[0044] 取牡丹皮配方顆粒約0. 4g，精密稱定，置10ml量瓶中，加甲醇適量，超聲振蕩30分 鐘，放至室溫，加甲醇至刻度，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液為供試品溶液；分別精密吸取對(duì) 照品溶液10μ1，樣品供試液各10μ1，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果見表6。
[0045] 表6樣品含量測(cè)定結(jié)果（η= 2)
[0046]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種牡丹皮配方顆粒的檢測(cè)方法，該方法包括： (1) 薄層色譜鑒別方法，和 (2) 高效液相色譜法含量測(cè)定方法。2. 權(quán)利要求1所述牡丹皮配方顆粒的檢測(cè)方法，其中所述薄層色譜鑒別方法為：（1)供 試品溶液配制：取牡丹皮配方顆粒粉末lg，加乙醚l〇ml，密塞，振搖10分鐘，濾過，濾液揮 干，殘?jiān)颖?ml使溶解，作為供試品溶液；（2)對(duì)照品溶液配制：另取牡丹皮對(duì)照藥材 0. 5g，加乙醚10ml，密塞，振搖10分鐘，濾過，濾液揮干，殘?jiān)颖?ml使溶解；再取丹皮 酉分對(duì)照品，加丙酮制成每lml含5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；（3)測(cè)定法：照中國(guó)藥典2010 年版一部附錄VIB的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板 上，以環(huán)已烷-醋酸乙酯（3:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇 溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜及對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置 上，顯相同的藍(lán)褐色斑點(diǎn)。3. 權(quán)利要求1所述牡丹皮配方顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，其中所述高效液相色譜法含量測(cè) 定方法為：（1)色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；四氫呋喃-4%磷酸水溶液 (70:30)為流動(dòng)相；DAD檢測(cè)器檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)：274nm;柱溫30°C，流速：lml/min; (2)對(duì)照 品溶液的制備，精密稱取丹皮酚對(duì)照品適量，加甲醇制成每lml含0. 5mg的溶液，即得；(3) 供試品溶液的制備：取牡丹皮配方顆粒粉末〇. 4g，精密稱定，置10ml量瓶中，加甲醇適量， 超聲振蕩30分鐘，放至室溫，加甲醇至刻度，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液為供試品溶液； (4)測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液10μ1、供試品溶液10μ1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即 得。
【專利摘要】一種牡丹皮配方顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，該方法包括薄層色譜鑒別方法和含量測(cè)定方法。采用薄層色譜法對(duì)牡丹皮配方顆粒進(jìn)行定性鑒別，同時(shí)采用高效液相色譜法對(duì)其中的丹皮酚進(jìn)行含量測(cè)定，建立一種牡丹皮配方顆粒的質(zhì)量檢測(cè)方法，使產(chǎn)品質(zhì)量得到了有效控制。
【IPC分類】G01N30/06, G01N30/90, G01N30/02
【公開號(hào)】CN105372378
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410429349
【發(fā)明人】陳鐘, 李軍山, 李英麗, 姜國(guó)志, 劉鐵軍, 高晗, 胡雪嬌
【申請(qǐng)人】神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司
【公開日】2016年3月2日
【申請(qǐng)日】2014年8月28日