一種用于尿蛋白檢測(cè)試紙的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種尿液檢測(cè)領(lǐng)域，特別涉及一種用于尿蛋白檢測(cè)試紙的制備方法及 其應(yīng)用。屬于分析化學(xué)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 許多人類疾病除非到了很晚的時(shí)期，否則不容易被診斷出，因?yàn)槠渖戆Y狀不明 顯。體液組分的輕微變化可意味著體內(nèi)出現(xiàn)問題，因此，檢測(cè)體液成份是尤其重要。尿通 常被用作診斷學(xué)和臨床研究中的生物標(biāo)志，因?yàn)槠涫强梢詮姆乔趾π苑绞饺菀椎孬@得的體 液。尿液中的蛋白質(zhì)和肽的復(fù)雜混合物可反映血清組成和腎功能。尿液中出現(xiàn)過量的蛋白 質(zhì)警示出現(xiàn)了慢性病，例如糖尿病、高血壓和腎臟炎癥相關(guān)的問題等。
[0003] 尿內(nèi)出現(xiàn)蛋白稱為蛋白尿，也即尿蛋白。正常尿液中含少量小分子蛋白，普通尿常 規(guī)檢查測(cè)不出，當(dāng)尿中蛋白增加，尿常規(guī)檢查可以測(cè)出即為蛋白尿。
[0004] 可以導(dǎo)致蛋白尿的原因很多，它們包括：功能性蛋白尿、體位性蛋白尿或病理性蛋 白尿。常見有：劇烈運(yùn)動(dòng)后，發(fā)熱的極期，進(jìn)食高蛋白飲食；胡桃夾現(xiàn)象；各種腎臟病和腎血 管病等。不同病因引起的腰疼臨床表現(xiàn)也不相同，例如： 1.功能性蛋白尿 功能性蛋白尿是一種輕度（24小時(shí)尿蛋白定量一般不超過0.5~1克)、暫時(shí)性蛋白尿， 原因去除后蛋白尿迅速消失。
[0005] 2.病理性蛋白尿 蛋白尿持續(xù)存在，尿中蛋白含量較多，尿常規(guī)檢查常合并有血尿、白細(xì)胞尿和管型尿。 并可伴有其他腎臟病表現(xiàn)，如高血壓、水腫等。病理性蛋白尿主要見于各種腎小球、腎小管 間質(zhì)疾病、遺傳性腎病、腎血管疾病和其他腎臟病。常見的如： (1)原發(fā)性腎小球疾病24小時(shí)尿蛋白定量大于或等于3. 5克，蛋白尿?yàn)槟I臟損害的表 現(xiàn)；（2)繼發(fā)性腎小球疾病24小時(shí)尿蛋白定量一般不超過1. 5~2克；（3)腎小管間質(zhì)疾 病，24小時(shí)尿蛋白定量多< 2克；（4)遺傳性腎病尿蛋白陽性，定量> 400毫克/24小時(shí)。
[0006] 因此，我們要提倡廣大群眾能學(xué)會(huì)一種簡單、方便的、靈敏的在家庭中就能自我定 期跟蹤檢測(cè)，帶有體溫的新鮮尿液中蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)。推廣普及后可從健康人群中，篩查出 患有腎疾病傾向群體。隨著人們對(duì)健康意識(shí)的不斷提高，對(duì)人體生理或病理狀況的動(dòng)態(tài)跟 蹤監(jiān)控，實(shí)現(xiàn)預(yù)警信號(hào)提示、提高慢性病或隱性病的早期檢出率，并通過積極的早期治療提 高康復(fù)率意義重大。
[0007] 因此，制備一種檢測(cè)尿蛋白的試紙使人們能簡單、方便的在家自我檢測(cè)尿液中蛋 白的變化情況，對(duì)低濃度的尿蛋白進(jìn)行定性和定量檢測(cè)具有十分重要的價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目是提供一種用于尿蛋白檢測(cè)試紙的制備方法，且使用簡單、靈敏度高、 選擇性較好的檢測(cè)尿液中蛋白質(zhì)試紙的制備方法，該方法不僅可以定性地檢測(cè)尿液中蛋白 質(zhì)，而且可以定量地檢測(cè)尿液中蛋白質(zhì)，也就是測(cè)定出蛋白質(zhì)的含量范圍，本發(fā)明的目的通 過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。
[0009] 本發(fā)明尿蛋白檢測(cè)試紙是由浸漬了水溶性聚噻吩、四水氯金酸、磷酸二氫鈉、氫氧 化鈉、疏基蛋白酶、聚乙稀醇和濾紙構(gòu)成，在每平方厘米濾紙中含水溶性聚噻吩0. 2~1. Omg， 四水氯金酸0. 4~2. Omg，磷酸二氫鈉0. 2~2. Omg，氫氧化鈉0. 04~1. Omg，疏基蛋白酶 0. 01~0. 05mg，聚乙稀醇0. 5~3. 0 mg。所用的濾紙可以是定量濾紙。
[0010] -種用于尿蛋白檢測(cè)試紙的制備方法，其特征在于，該方法具有以下工藝步驟： (1) 配制溶液A :在反應(yīng)器中，配制含各組分摩爾濃度為，水溶性聚噻吩： L 0X10 3~4· 0X10 3mol/L，四水氯金酸：1· 0X10 3~4· 0X10 3mol/L，磷酸二氫鈉：0· 2~0· 3 mol/L，氫氧化鈉：0. 1~0. 2 mol/L，水溶液，攪拌均勻，得到溶液A ; (2) 配制溶液B :在反應(yīng)器中，按如下組成質(zhì)量百分比加入，去離子水：95~97%，聚乙烯 醇：2~5%，加熱溶解，冷卻至室溫，再加入巰基蛋白酶：0. 1~1. 0%，各組分之和為百分之百， 攪拌溶解，得到溶液B ; (3) 尿蛋白檢測(cè)試紙浸漬：將溶液A與溶液B按體積比為2 :1混合均勻，將濾紙定量濾 紙全部浸入溶液A和溶液B混合溶液中60~120s ; (4) 尿蛋白檢測(cè)試紙成型：取出浸吸溶液的濾紙，在室溫下晾干，或在低于50°C的溫度 下烘干，將此銨試紙裁成0. 2 cmX 5cm長方形小塊，塑封備用，得到淺黃色的尿蛋白檢測(cè)試 紙。
[0011] 所述的水溶性聚噻吩的結(jié)構(gòu)式：
[0012] 所述的水溶性聚噻吩與四水氯金酸的摩爾比為1 :1 ; 所述的巰基蛋白酶為巰基蛋白酶EC3. 4. 22 標(biāo)準(zhǔn)色卡的制作：準(zhǔn)確稱取牛血清蛋白溶于蒸餾水中，配制一系列準(zhǔn)確濃度的含牛血 清蛋白的溶液，牛血清蛋白的濃度從〇到2. 0mg/mL。將尿蛋白檢測(cè)試紙分別浸入各種濃度 的溶液中，6~8s后取出，平放6min后用光譜光度計(jì)或光電積分測(cè)色儀測(cè)得色度。按次值調(diào) 制油墨、涂于銅版紙，即制得標(biāo)準(zhǔn)色卡。蛋白質(zhì)的每一濃度對(duì)應(yīng)于標(biāo)準(zhǔn)色卡上一種顏色。 使用方法：將尿蛋白檢測(cè)試紙浸入新鮮尿液中，6~8s后取出，平放6min后。將該試紙 上所顯的顏色與標(biāo)準(zhǔn)色卡相比較，即可判斷出被測(cè)尿液中蛋白質(zhì)的濃度，試紙上顯出的顏 色隨著蛋白質(zhì)濃度的增加而加深，所顯顏色從淺粉色到紅色。
[0013] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)： (1) 本發(fā)明獲得的尿蛋白檢測(cè)試紙，具有攜帶方便，操作簡便、快速，檢測(cè)直觀，選擇性 好，準(zhǔn)確度和靈敏度較高檢測(cè)； (2) 通過目視比較顯色后的尿蛋白檢測(cè)試紙與標(biāo)準(zhǔn)色卡的顏色便可判斷尿液中蛋白的 含量，非專業(yè)人員就可以進(jìn)行測(cè)試，是居家自測(cè)的理想選擇； (3) 本發(fā)明制備尿蛋白檢測(cè)試紙，所使用的試劑都是普通的化學(xué)試劑無毒、安全可靠， 試紙應(yīng)用范圍廣； (4)制備尿蛋白檢測(cè)試紙的過程要求的條件容易控制，能耗低，操作簡單，屬于清潔生 產(chǎn)工藝，易于大量生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 實(shí)施例1 (1) 配制溶液A :在燒杯中，分別準(zhǔn)確稱取水溶性聚噻吩：0. 5g，四水氯金酸：0. 8g，磷酸 二氫鈉：30g，氫氧化鈉：6g，加去離子水1000 mL，攪拌溶解，得到溶液A ; (2) 配制溶液B :在燒杯中，按如下組成質(zhì)量百分比加入，去離子水：960