復(fù)方石淋通制劑的多指標(biāo)成分同時(shí)測定方法及指紋圖譜構(gòu)建方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明一種復(fù)方石淋通制劑的多指標(biāo)成分同時(shí)測定方法，以及復(fù)方石淋通制劑指 紋圖譜的構(gòu)建方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 復(fù)方石淋通中藥方包括廣金錢草、石韋、海金沙、滑石粉、忍冬藤五味藥材。該方具 有清熱利濕，通淋排石功效，可用于膀胱濕熱，石淋澀痛，尿路結(jié)石，泌尿系感染屬肝膽膀胱 濕熱者。此外，還有文獻(xiàn)報(bào)道其對泌尿系統(tǒng)感染常見的細(xì)菌具有不同程度的抑制作用；能明 顯防治乙二醇、氯化銨誘發(fā)的腎結(jié)石形成，有明顯的利尿作用及抗炎作用；并有顯著的鎮(zhèn)痛 作用。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中，根據(jù)復(fù)方石淋通中藥方，已制得多種劑型復(fù)方石淋通制劑。通常的制 備工藝一般為：分別將四味藥材(除滑石粉外）進(jìn)行水提醇沉，采用真空干燥，將干膏合并混 勻，并加入處方量的滑石粉和適量的輔料，即制備成片劑、顆粒劑、膠囊劑等多種劑型。
[0004] 例如，復(fù)方石淋通膠囊采用中藥廣金錢草1500g、石韋500g、海金沙500g、滑石粉 25g、忍冬藤500g，分別將四味藥材(除滑石粉外)進(jìn)行水提醇沉，采用真空干燥，將干膏合并 混勻，并加入處方量的滑石粉和適量的輔料，混勻，95%乙醇制顆粒，干燥，裝入膠囊，即得。
[0005] 復(fù)方石淋通包括廣金錢草、石韋、海金沙和忍冬藤，所含成分復(fù)雜多樣。據(jù)文獻(xiàn)報(bào) 道，廣金錢草主要成分包括黃酮類、酚酸類、生物堿類、揮發(fā)性成分和多糖等，石韋主要成分 包括三萜類、黃酮類、咕酮類、揮發(fā)油和留體等，海金沙藥用部位包括全草、成熟孢子、根及 根莖，目前2010版藥典只收載了海金沙干燥成熟孢子為藥材。海金沙全草、根及根莖中的 化學(xué)成分主要包括揮發(fā)油、黃酮類、酚酸類等，對于海金沙孢子中與其功能主治相關(guān)的有效 成分還不是很清楚，忍冬藤主要成分包括酚酸類、皂苷類、黃酮類、揮發(fā)油類等。
[0006] 但復(fù)方石淋通膠囊現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn) (YBZ04472009)，該標(biāo)準(zhǔn)"鑒別"項(xiàng)采用TLC法對廣金錢草進(jìn)行鑒別：取復(fù)方石淋通膠囊內(nèi) 容物，用有機(jī)溶劑超聲提取，萃取，合并乙酸乙酯層，蒸干，殘?jiān)鼜?fù)溶，作為供試品溶液；同法 制備成對照藥材溶液；供試品溶液和對照藥材溶液點(diǎn)板于聚酰胺薄膜上，采用適宜展開劑 展開，顯色劑顯色，進(jìn)行藥材鑒別。"含量測定"項(xiàng)采用高效液相色譜法測定指標(biāo)性成分綠 原酸：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-〇. 5%磷酸（11 :89)為流動(dòng)相；檢測波長為 326nm。用有機(jī)溶劑超聲處理膠囊內(nèi)容物，制備成供試品溶液；取綠原酸對照品制備成對照 品溶液；采用外標(biāo)法計(jì)算綠原酸含量。該標(biāo)準(zhǔn)未對其他有效成分進(jìn)行定量檢測，存在一定局 限性，不能全面反映中藥產(chǎn)品的質(zhì)量水平。
[0007] 指紋圖譜技術(shù)是新發(fā)展的中藥質(zhì)量控制方法。指紋圖譜能較全面地反映中藥及其 制劑中所含化學(xué)成分的種類與數(shù)量，可對藥物品質(zhì)進(jìn)行整體描述和評價(jià)。多指標(biāo)成分同時(shí) 測定聯(lián)合指紋圖譜技術(shù)是進(jìn)一步發(fā)展的質(zhì)量控制方法，既注重宏觀特征，又監(jiān)控多個(gè)有效 成分的含量，可實(shí)現(xiàn)微觀和宏觀的有機(jī)結(jié)合，符合中醫(yī)藥整體、宏觀、復(fù)雜的特點(diǎn)，可從整體 上評價(jià)和控制中藥制劑的質(zhì)量，是中藥現(xiàn)代化關(guān)鍵技術(shù)之一。
[0008] 對于復(fù)方石淋通制劑，亟需建立檢測方法，構(gòu)建多指標(biāo)成分同時(shí)測定方法聯(lián)合指 紋圖譜技術(shù)，以更全面準(zhǔn)確的監(jiān)控復(fù)方石淋通制劑的質(zhì)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有的復(fù)方石淋通制劑的質(zhì)量檢測方法所檢測的有效成 分單一，不能全面反應(yīng)復(fù)方石淋通制劑質(zhì)量的缺陷，而提供一種復(fù)方石淋通制劑多指標(biāo)成 分同時(shí)測定方法，以及復(fù)方石淋通制劑指紋圖譜的構(gòu)建方法。
[0010] 本發(fā)明通過文獻(xiàn)調(diào)研，確定了指紋圖譜中與藥效相關(guān)的主要指標(biāo)成分，即綠原酸、 夏佛塔苷、異夏佛塔苷，進(jìn)一步經(jīng)實(shí)驗(yàn)摸索，最終建立了一種專屬性強(qiáng)、操作簡便，且穩(wěn)定 性、精密度、重現(xiàn)性和加樣回收率均良好的檢測方法，從而建立了科學(xué)合理的復(fù)方石淋通制 劑的多指標(biāo)成分指紋圖譜。
[0011] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下： 復(fù)方石淋通制劑多指標(biāo)成分同時(shí)測定包括如下步驟：將復(fù)方石淋通制劑的供試品溶液 進(jìn)行高效液相色譜法檢測，即可；所述的高效液相色譜法的色譜條件為：色譜柱為十八烷 基硅烷鍵合硅膠柱，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為體積百分比0. 1%的甲酸水溶液，含量測定 洗脫梯度如表1所示，檢測波長為335nm ; 表1
[0012] 所述的復(fù)方石淋通中藥方為現(xiàn)有中藥方，其包括廣金錢草、石韋、海金沙、忍冬 藤四味藥材，各藥材重量配比一般為3 : I : 1 : 1，所述的復(fù)方石淋通制劑可為現(xiàn)有 的根據(jù)復(fù)方石淋通中藥方制備的各種劑型的復(fù)方石淋通制劑，例如片劑(如中國專利 CN103263460A公開的復(fù)方石淋通片)、膠囊劑或顆粒劑等。上述復(fù)方石淋通制劑可由下述方 法制得：分別將四味藥材（除滑石粉外）進(jìn)行水提醇沉，采用真空干燥，將干膏合并混勻，并 加入處方量的滑石粉和適量的輔料，按現(xiàn)有方法制成各劑型。
[0013] 所述的復(fù)方石淋通制劑的供試品溶液可按常規(guī)的色譜供試溶液的預(yù)處理方法制 備而得：對于固體制劑的復(fù)方石淋通制劑，可將溶有復(fù)方石淋通制劑的溶液經(jīng)超聲處理，冷 卻，補(bǔ)足減失的重量，取續(xù)濾液，用微孔濾膜過濾，濾液即為供試品溶液。
[0014] 所述的微孔濾膜的孔徑可按常規(guī)條件選擇，一般為0. 22-0. 優(yōu)選0. 45Mffl。各 種類的微孔濾膜均適用本發(fā)明，如聚醚砜微孔濾膜。其中，所述的溶有復(fù)方石淋通制劑的溶 液中的溶劑可為50%甲醇、甲醇、70%甲醇、30%甲醇、水溶液，優(yōu)選50%甲醇。所述的溶劑 的用量以使復(fù)方石淋通制劑的濃度適宜色譜檢測為準(zhǔn)。所述的超聲處理的條件較佳的為 160-250W，頻率 40kHz，超聲 20-60min。
[0015] 所述的高效液相色譜法檢測的進(jìn)樣量根據(jù)色譜檢測領(lǐng)域常規(guī)知識選擇，一般為 2-5〇μL，以 5-2〇μL 為佳。
[0016] 所述的色譜柱可為現(xiàn)有的各種型號和規(guī)格的十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，如 4. 6mmX 250mm、4. 6mmX 1 50mm等徑長規(guī)格均可適用，最優(yōu)選4. 6mmX 250mm。
[0017] 特別優(yōu)選 13〇81:〇11-(]18柱（4. 6mmX 250mm)、Unitary-C 18柱（4. 6mmX 250mm)、 311臟;[1：-(]18柱（4. 6mmX 250mm)或 Diamonsil-C 18柱（4. 6mmX 250mm)，最優(yōu)選 Boston-C 18柱 (4. 6mmX 250mm)〇
[0018] 當(dāng)采用本發(fā)明特別優(yōu)選的13〇81:〇11-(：18柱（4. 6mmX250mm)時(shí)，最優(yōu)選含量測定如表 2所示的洗脫梯度； 表2
[0019] 柱溫對分離效果影響不大，可采用常規(guī)的色譜柱可以允許使用的溫度范圍，一般 為 15-50°C，較佳的為 20-40°C。
[0020] 流速對分離效果影響不大，可按本領(lǐng)域常規(guī)方法選擇，一般為0. 5-1. 5 mL/min，較 佳的為〇.8-1.2 111171^11。
[0021] 本發(fā)明的高效液相色譜法理論塔板數(shù)按綠原酸計(jì)算不低于3000。
[0022] 復(fù)方石淋通制劑指紋圖譜構(gòu)建方法由如下步驟組成：將復(fù)方石淋通制劑的供試 品溶液進(jìn)行高效液相色譜法檢測，即可；所述的高效液相色譜法的色譜條件為：色譜柱為 十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為體積百分比0. 1%的甲酸水溶液，指 紋洗脫梯度如表3所示，檢測波長為335nm，再采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)軟件 (國家藥典委2004A I. 0版）模擬生成復(fù)方石淋通制劑指紋圖譜； 表3
[0023] 其中，所檢測的復(fù)方石淋通制劑的樣品份數(shù)為建立指紋圖譜的最低所需要的樣品 份數(shù)以上，一般以10~30為宜，本發(fā)明以10批樣品為例進(jìn)行說明。
[0024] 其中，所述的采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)軟件模擬生成制劑指紋圖譜 按常規(guī)進(jìn)行操作。
[0025] 當(dāng)采用本發(fā)明特別優(yōu)選的13〇81:〇11-(：18柱（4. 6mmX250mm)時(shí)，最優(yōu)選指紋如表4所 示的洗脫梯度； 表4
[0026] 在符合本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實(shí) 例。
[0027] 本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。
[0028] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：1、本發(fā)明在明確了復(fù)方石淋通主要有效成分的基礎(chǔ)上，提供 了一種復(fù)方石淋通制劑多指標(biāo)成分同時(shí)測定方法，以及復(fù)方石淋通制劑指紋圖譜構(gòu)建方 法；2、本發(fā)明的測定方法專屬性強(qiáng)、操作簡便、且具有優(yōu)異的穩(wěn)定性、精密度、重現(xiàn)性和加樣 回收率，可較全面的檢測復(fù)方石淋通制劑中多種主要有效成分，從而構(gòu)建科學(xué)合理的復(fù)方 石淋通指紋圖譜，完整、準(zhǔn)確的評價(jià)復(fù)方石淋通制劑的有效性、安全性、穩(wěn)定性和質(zhì)量均一 性。
[0029]
【附圖說明】圖1為實(shí)施例2采用四種不同色譜柱運(yùn)用指紋色譜條件測定復(fù)方石 淋通膠囊供試品溶液所得色譜圖，圖中A為采用Boston-CV^U. 6mmX250mm)，B為采 用 31