用于豆制品和飲料中堿性嫩黃o快速檢測的拉曼光譜法及試劑配方與使用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種色素類違禁添加物的快速檢測技術(shù)，尤其設(shè)及豆制品和飲料中堿 性嫩黃0現(xiàn)場快速檢測的拉曼光譜法、試劑配方及使用方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 食品安全問題已成為全球關(guān)注的焦點(diǎn)，食品安全事件波及面廣，造成的社會(huì)影響 和經(jīng)濟(jì)損失巨大，也對(duì)人類生活環(huán)境乃至健康安全構(gòu)成越來越嚴(yán)重的威脅。蘇丹紅事件、吊 白塊事件W及紅屯、鴨蛋風(fēng)波，引起了國內(nèi)外的廣泛關(guān)注。一次次的食品安全問題和危機(jī)檢 驗(yàn)著食品監(jiān)管部口的能力，如何保障食品安全成為全社會(huì)共同關(guān)注的問題。
[0003] 堿性嫩黃0堿性嫩黃0,，別名鹽基淡黃0、鹽基槐黃、堿性巧光黃GR等，英文名稱 為Basicflavine0,是一種芳香胺類堿性工業(yè)染料，可用于蠶絲、膳絕、皮革、紙、麻的染 色，但嚴(yán)禁作為食品添加劑。毒理學(xué)資料表明堿性嫩黃0對(duì)皮膚黏膜有輕度刺激，可引起結(jié) 膜炎、皮炎和上呼吸道刺激癥狀，人接觸或者吸入堿性嫩黃0都會(huì)引起中毒，長期接觸會(huì)致 癌。因此中國衛(wèi)生部將其列在《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑 品種名單（第一批）至（第五批）》中，禁止在食品中使用。但在食品中非法添加非食用色 素的現(xiàn)象在市場上已經(jīng)層出不窮，如堿性澄、堿性嫩黃0等，該些為工業(yè)用途的化工產(chǎn)品， 屬于食品中的禁用添加物質(zhì)，卻被多次檢測出來。目前，食品中堿性澄的測定尚無國家標(biāo)準(zhǔn) 方法，國內(nèi)有一些相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道檢測堿性嫩黃0的方法主要有，高效液相色譜法和高效 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。質(zhì)譜法雖然靈敏度高，但是，其前處理步驟復(fù)雜，儀器設(shè)備的投入 比較大，難于普及推廣，且前處理操作復(fù)雜，時(shí)間冗長，有機(jī)溶劑污染環(huán)境。
[0004] 對(duì)于常見的快速檢測技術(shù)，往往缺乏配套的樣品前處理技術(shù)，導(dǎo)致基質(zhì)干擾嚴(yán)重， 檢測結(jié)果不準(zhǔn)確，不能對(duì)違禁非法添加樣品進(jìn)行準(zhǔn)確、可靠的檢測與控制。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種豆制品和飲料中非法添加物堿性嫩黃0的快速檢測方 法，采用提取萃取處理技術(shù)和表面增強(qiáng)拉曼光譜法對(duì)食品中是否添加了堿性嫩黃0進(jìn)行快 速檢測，成本低廉，可現(xiàn)場應(yīng)用。
[0006] 為適應(yīng)上述需求，本發(fā)明提供簡單的食品（如豆制品、飲料）前處理方法，提供檢 測試劑配方及其制備方法，提供堿性嫩黃0現(xiàn)場快速的定性和定量分析方法。其步驟如下：
[0007] 1.提取
[0008] 用85%~90%的己膳水溶液作為試樣提取試劑。準(zhǔn)確稱取豆制品（豆皮、腐竹、 豆排卷）試樣1.Og，加入4ml提取劑與試樣混勻，于室溫、8000~1000化pm下離屯、2~5 分鐘，吸取離屯、后的上層溶液，加入2ml提取劑，禍旋1~3分鐘，W8000~1000化pm離屯、 1~3分鐘，棄去上層溶液，下層含待測物溶液，將己膳的提取劑溶液用一次蒸饋水或去離 子水按3 : 1的質(zhì)量比稀釋，過0. 22ym濾膜過濾，待測；取飲料（功能性飲料和碳酸性飲 料）稱取10血、混勻、離屯、，在8000巧m下離屯、3min，過0. 22濾膜待測。濾液加入至預(yù)先加 好一定量試劑A和B的檢測池中。
[0009] 2.提取試劑配方及使用方法
[0010] 豆制品（豆皮、腐竹、豆排卷）；提取劑4血（己膳的3. 5ml，一次蒸饋水或去離子水 0.5ml);萃取劑：含有飽和己膳的正己燒溶液。
[0011] 3.檢測
[0012] 將濾液加入至預(yù)先加好一定量試劑A和B的檢測池中，禍旋或搖振均勻，置檢測池 于便拉曼光譜儀檢測室中在200~2500cnTi的范圍內(nèi)進(jìn)行拉曼光譜掃描得到拉曼光譜圖， 拉曼譜圖中如在780cnTi(波數(shù)誤差<IScnfi)處有特征峰，則判斷樣品添加了堿性嫩黃0， 反之則判定樣品沒有添加堿性嫩黃0。本發(fā)明的拉曼光譜法，所述水為二次蒸饋水或去離子 水。
[0013] 4.試劑A為銀膠體水溶液，按照公知的方法制備即可；試劑B為可使A凝聚的含 C1-1的電介質(zhì)，C1-1濃度范圍為0. 1M~0.65M，優(yōu)選為0.lM;pH為1-9,優(yōu)選為7。
[0014] 所述試劑的用量如下：
[0015] (1)試劑A;100-300yL，優(yōu)選為lOOuL;
[0016] (2)試劑B;100-300uL，優(yōu)選為 100uL。
[0017] 0)試樣濾液的加樣量；100-500yL，豆制品優(yōu)選為100yL、飲料優(yōu)選為400yL。
[0018] 5.本發(fā)明所述拉曼光譜儀的激光光源發(fā)射波長為785nm，是手持式、便攜式或臺(tái) 式儀器。目前，中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院、中檢國研（北京）科技有限公司、必達(dá)泰克公司 可提供滿足測試要求的便攜式拉曼光譜儀。
[0019] 利用本發(fā)明時(shí)，后期的數(shù)據(jù)采集及結(jié)果分析步驟如下：
[0020] (1)用便攜式拉曼光譜儀進(jìn)行檢測，激光能量參數(shù)選擇300mw，積分參數(shù)選擇3次， 該兩個(gè)參數(shù)調(diào)節(jié)最佳拉曼峰強(qiáng)度，連續(xù)掃描拉曼光譜3次，最后得3次掃描光譜的平均光 譜。每一個(gè)光譜的掃描范圍是200-2500cm-i，完成一個(gè)光譜掃描時(shí)間是Imin。
[0021] (2)用具有背景扣除功能的數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，獲得基線平坦的拉曼圖 譜，由于波數(shù)在200-300cnTi與2100-2500畑14之間譜圖無明顯特征峰且譜圖之間差別很小， 所W選擇300-2100cnTi之間作為本實(shí)驗(yàn)的考察范圍。
[0022] (3)對(duì)比陰性豆制品和飲料樣品、陽性豆制品和飲料樣品拉平基線后的拉曼光譜 圖，如780畑1 4 (波數(shù)誤差<IScnfi)處出現(xiàn)了明顯的拉曼峰，且信噪比> 3,則初步判斷為添 加了堿性嫩黃0的陽性樣品，如780cnTi(波數(shù)誤差< 15畑14)處沒有明顯的峰，則初步判斷 為沒有添加堿性嫩黃0的陰性樣品。因此，780cnTi(波數(shù)誤差<IScnfi)處的特征峰是檢測 食品中是否添加了堿性嫩黃0的重要依據(jù)，通過該特征峰可W對(duì)豆制品和飲料樣品堿性嫩 黃0進(jìn)行初篩分析。
[0023] (4)定量分析；根據(jù)780畑14 (波數(shù)誤差< 15畑14)特征頻率處堿性嫩黃0所對(duì)應(yīng)的 相對(duì)信號(hào)強(qiáng)度與其濃度的線性關(guān)系做標(biāo)準(zhǔn)曲線，用該標(biāo)準(zhǔn)曲線可對(duì)豆制品、飲料中堿性嫩 黃0進(jìn)行定量分析。
[0024] 本發(fā)明的表面增強(qiáng)拉曼光譜法，樣品前處理簡單，無需過柱凈化過程，直接采用 振蕩提取，然后將萃取凈化，實(shí)驗(yàn)耗材成本低廉，進(jìn)行食品定性和定量分析，通過拉曼譜圖 780畑1 4 (波數(shù)誤差< 15畑14)是否有堿性嫩黃0特征峰，判斷豆制品和飲料中是否添加堿性 嫩黃0。其豆制品檢出限線性范圍和回收率見表1，飲料檢出限線性范圍和回收率見表2。 該方法操作簡便快速，線性關(guān)系良好，分析結(jié)果直觀可視，如使用便攜式拉曼檢測儀則可實(shí) 現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測，可對(duì)食品中是否添加了堿性嫩黃0進(jìn)行現(xiàn)場快速的定量和定性檢測。
[0025] 表1.飲料中堿性嫩黃0測定結(jié)果
[0026] 口ITv4i Lfl.丄-t-K丄人 T口口/ /T \ /.
12. Lft. rxn / /t \ II~tT-h-t
【附圖說明】
[0029] 圖1是堿性嫩黃0標(biāo)準(zhǔn)品水溶液的表面增強(qiáng)拉曼光譜圖；
[0030]圖2代表性飲料（碳酸飲料）陽性樣品和陰性樣品的表面增強(qiáng)拉曼光譜圖（A.碳 酸飲料陽性樣品；B.碳酸飲料陰性樣品）；
[0031]圖3代表性飲料（功能性飲料）添加堿性嫩黃0的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
[0032] 圖4代表性飲料（功能性飲料）陽性樣品和陰性樣品的表面增強(qiáng)拉曼光譜圖 (A.功能性飲料陽性樣品；B.功能性飲料陰性樣品）；
[0033] 圖5代表性飲料（功能性飲料）添加堿性嫩黃0百草枯的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
[0034] 圖6代表性豆制品（豆皮）陽性樣品和陰性樣品的表面增強(qiáng)拉曼光譜圖（A.豆皮 陽性樣品；B.豆皮陰性樣品）；
[0035] 圖7代表性豆制品（豆皮）添加堿性嫩黃0的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
[0036] 圖8代表性豆制品（腐竹）陽性樣品和陰性樣品的表面增強(qiáng)拉曼光譜圖（A.腐竹 陽性樣品；B.腐竹陰性樣品）；
[0037] 圖9代表豆制品（腐竹）添加堿性嫩黃0的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
[003引圖10代表性豆制品（豆排卷）陽性樣品和陰性樣品的表面增強(qiáng)拉曼光譜圖（A.腐 竹陽性樣品；B.腐竹陰性樣品）；
[0039]圖11代表豆制品（豆排卷）添加堿性嫩黃0的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
【具體實(shí)施方式】
[0040] 實(shí)施例1 一種用于飲料中堿性嫩黃0現(xiàn)場快速檢測的拉曼光譜法，包括W下具體 的步驟：
[00川樣品制備：
[0042]稱取飲料（功能性飲