瘧原蟲的檢測方法和檢測系統(tǒng)的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種瘧原蟲的檢測方法和檢測系統(tǒng)。
【背景技術(shù)】
[0002]瘧疾是經(jīng)按蚊叮咬或輸入帶瘧原蟲者的血液而感染瘧原蟲所引起的蟲媒傳染病，是一種嚴(yán)重危害人類健康的疾病，瘧疾的早期診斷對瘧疾的防治意義重大。瘧色素是瘧原蟲感染人后，在宿主紅細(xì)胞內(nèi)消化血紅蛋白產(chǎn)生的黑色不溶的副產(chǎn)物，可以用于判斷是否存在瘧原蟲感染。
[0003]目前瘧色素的檢測是瘧疾檢測的一個重要方向，它不僅能用于診斷瘧疾的感染，也是反應(yīng)臨床治療效果的一個重要指標(biāo)。但目前瘧色素的檢測方法存在檢測信號弱且靈敏度較低的缺點，其原因很大一部分與瘧色素在紅細(xì)胞內(nèi)含量少且缺乏很好的提取方案有關(guān)。
[0004]拉曼光譜技術(shù)作為一種集光學(xué)、物理學(xué)、信息學(xué)、光譜學(xué)及材料學(xué)等多學(xué)科的于一體的檢測技術(shù)，在生命科學(xué)領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。瘧色素在拉曼激光照射下會產(chǎn)生特異性的拉曼峰，即特征峰。拉曼激光檢測瘧色素的主要缺點在于瘧色素含量少導(dǎo)致拉曼信號弱，從而導(dǎo)致檢測靈敏度較低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]基于此，有必要提供一種檢測靈敏度較高的瘧原蟲的檢測方法和檢測系統(tǒng)。
[0006]一種瘧原蟲的檢測方法，包括如下步驟:
[0007]提供待測樣本，并且對所述待測樣本進(jìn)行處理得到紅細(xì)胞懸液；
[0008]配制含有濃度為0.lg/L?0.5g/L的皂素的裂解液；
[0009]將所述紅細(xì)胞懸液與所述裂解液按照體積比為1:5?20混合并充分裂解后進(jìn)行離心并保留第一沉淀，接著將所述第一沉淀充分裂解后進(jìn)行離心并保留第二沉淀，接著用生理鹽水洗滌所述第二沉淀至少三次后進(jìn)行離心并保留第三沉淀；
[0010]采用拉曼激光照射所述第三沉淀并且收集得到拉曼信號；以及
[0011]對所述拉曼信號進(jìn)行分析從而判斷所述待測樣本中是否含有瘧原蟲。
[0012]在一個實施例中，所述待測樣本包括血液樣本、陰性對照樣本和陽性對照樣本中的至少一種；
[0013]對所述待測樣本進(jìn)行處理得到紅細(xì)胞懸液的操作為:對待測樣本進(jìn)行抗凝處理后3000rpm離心15min并棄去上清，將沉淀與生理鹽水按照體積比為1:2?5混合得到所述紅細(xì)胞懸液。
[0014]在一個實施例中，所述裂解液中還含有濃度為8g/L?10g/L的NaCl、濃度為0.lg/L ?0.3g/L 的 KCl、濃度為 3.5g/L ?4.0g/L 的 Na2HPO4.Iffi2O 以及濃度為 0.2g/L ?
0.3g/L 的 K2HPO4。
[0015]在一個實施例中，將所述紅細(xì)胞懸液與所述裂解液按照體積比為1:5?20混合并充分裂解的操作中，充分裂解的溫度為36°C?38°C，充分裂解的時間為1min?15min ；
[0016]將所述第一沉淀充分裂解的操作中，充分裂解的溫度為37°C，充分裂解的時間為1min ?15min。
[0017]在一個實施例中，所述進(jìn)行離心并保留第一沉淀的操作中，離心的轉(zhuǎn)速為3000rpm ?5000rpm，離心的時間為 1min ?15min ；
[0018]所述進(jìn)行離心并保留第二沉淀的操作中，離心的轉(zhuǎn)速為3000rpm?5000rpm，離心的時間為1min?15min ；
[0019]所述進(jìn)行離心并保留第三沉淀的操作中，離心的轉(zhuǎn)速為3000rpm?5000rpm，離心的時間為1min?15min。
[0020]一種瘧原蟲的檢測系統(tǒng)，包括:
[0021]樣本處理模塊，用于對提供的待測樣本進(jìn)行處理得到紅細(xì)胞懸液；
[0022]配制模塊，用于配制含有濃度為0.lg/L?0.5g/L的皂素的裂解液；
[0023]裂解模塊，用于將所述紅細(xì)胞懸液與所述裂解液按照體積比為1:5?20混合并充分裂解后進(jìn)行離心并保留第一沉淀，接著將所述第一沉淀充分裂解后進(jìn)行離心并保留第二沉淀，接著用生理鹽水洗滌所述第二沉淀至少三次后進(jìn)行離心并保留第三沉淀；
[0024]信號收集模塊，用于采用拉曼激光照射所述第三沉淀同時收集得到拉曼信號；以及
[0025]信號分析模塊，用于對所述拉曼信號進(jìn)行分析從而判斷所述待測樣本中是否含有瘧原蟲。
[0026]在一個實施例中，所述樣本處理模塊用于對所述待測樣本進(jìn)行抗凝處理后3000rpm離心15min并棄去上清，將沉淀與生理鹽水按照體積比為1:2?5混合得到所述紅細(xì)胞懸液；
[0027]所述待測樣本包括血液樣本、陰性對照樣本和陽性對照樣本中的至少一種。
[0028]在一個實施例中，所述配制模塊用于配制含有濃度為0.lg/L?0.5g/L的皂素、濃度為8g/L?10g/L的NaCl、濃度為0.lg/L?0.3g/L的KCl、濃度為3.5g/L?4.0g/L的Na2HPO4.12H20 以及濃度為 0.2g/L ?0.3g/L 的 K2HPO4。
[0029]在一個實施例中，所述信號收集模塊為拉曼光譜儀。
[0030]在一個實施例中，所述信號分析模塊采用Vancouver Raman Algorithm軟件去除所述拉曼信號中的熒光信號以及基底信號，然后采用original 8.0分析比對瘧色素的拉曼光譜從而判斷所述待測樣本中是否含有瘧原蟲。
[0031]這種瘧原蟲的檢測方法通過含有皂素的裂解液對紅細(xì)胞懸液進(jìn)行裂解，皂素能夠在紅細(xì)胞膜上產(chǎn)生永久性的小孔使其膜滲透性發(fā)生改變，從而使紅細(xì)胞破裂；對于含有瘧原蟲的紅細(xì)胞而言，皂素使瘧原蟲從紅細(xì)胞內(nèi)釋放出來，再經(jīng)過裂解瘧原蟲細(xì)胞膜從而獲得瘧色素，可使瘧色素濃縮起來。通過結(jié)合含有皂素的裂解液提取瘧色素和拉曼光譜技術(shù)，這種瘧原蟲的檢測方法的檢測靈敏度較高。
【附圖說明】
[0032]圖1為一實施方式的瘧原蟲的檢測方法的流程圖；
[0033]圖2為一實施方式的瘧原蟲的檢測系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0034]圖3為實施例1得到的陽性對照樣本與瘧色素的拉曼光譜對比圖；
[0035]圖4為實施例2得到的陰性對照樣本與瘧色素的拉曼光譜對比圖；
[0036]圖5為實施例3得到的瘧疾感染者血液樣本與陽性對照樣本的拉曼光譜對比圖。
【具體實施方式】
[0037]下面主要結(jié)合附圖及具體實施例對瘧原蟲的檢測方法作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0038]如圖1所示的一實施方式的瘧原蟲的檢測方法，包括如下步驟:
[0039]S10、提供待測樣本，并且對待測樣本進(jìn)行處理得到紅細(xì)胞懸液。
[0040]待測樣本包括血液樣本、陰性對照樣本和陽性對照樣本中的至少一種。
[0041]血液樣本通過抽取血液得到。
[0042]陽性對照樣本可以為在含有正常人紅細(xì)胞的完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)的瘧原蟲。
[0043]陰性對照樣本可以為正常人紅細(xì)胞。
[0044]對待測樣本進(jìn)行處理得到紅細(xì)胞懸液的操作為:對待測樣本進(jìn)行抗凝處理后3000rpm離心15min并棄去上清，將沉淀與生理鹽水按照體積比為1:2?5混合得到紅細(xì)胞懸液。
[0045]具體的，對待測樣本進(jìn)行抗凝處理的操作可以為:將3mL?5mL的待測樣本加入到EDTA抗凝管中混勻。
[0046]S20、配制含有濃度為0.lg/L?0.5g/L的皂素的裂解液。
[0047]具體的，裂解液中還含有濃度為8g/L的NaCl、濃度為0.2g/L的KC1、濃度為3.6g/L 的 Na2HPO4.12H20 以及濃度為 0.24g/L 的 K2HPO4。
[0048]S30、將SlO得到的紅細(xì)胞懸液與S20得到的裂解液按照體積比為1:5?20混合并充分裂解后進(jìn)行離心并保留第一沉淀，接著將第一沉淀充分裂解后進(jìn)行離心并保留第二沉淀，接著用生理鹽水洗滌第二沉淀至少三次后進(jìn)行離心并保留第三沉淀。
[0049]將紅細(xì)胞懸液與裂解液按照體積比為1:5?20混合并充分裂解的操作中，充分裂解的溫度為36°C?38°C，充分裂解的時間為1min?15min ；
[0050]將第一沉淀充分裂解的操作中，充分裂解的溫度為37°C，充分裂解的時間為1min ?15min。
[0051]進(jìn)行離心并保留第一沉淀的操作中，離心的轉(zhuǎn)速為3000rpm?5000rpm，離心的