一種中藥復(fù)方制劑中赤芍、金銀花多指標(biāo)成分含量測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種中藥復(fù)方制劑的含量測定方法，特別涉及一種中藥復(fù)方制劑中赤 芍和金銀花的含量測定方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 抗感系列制劑（抗感顆粒和抗感膠囊）由金銀花、赤茍、綿馬貫眾等3味藥組成， 處方中3味藥材重量比為3:3:1，具有清熱解毒的功效，用于外感風(fēng)熱引起的感冒?？垢蓄w 粒執(zhí)行《中國藥典》2010年版第一增補(bǔ)本標(biāo)準(zhǔn)；抗感膠囊執(zhí)行國家藥品監(jiān)督管理局國家藥 品標(biāo)準(zhǔn)WS 3-225(X-215)-2002Z。標(biāo)準(zhǔn)收載項(xiàng)目均包括：綠原酸和芍藥苷的薄層色譜鑒別；芍 藥苷的HPLC含量測定。
[0003] 金銀花為方中主藥，上述標(biāo)準(zhǔn)均以綠原酸的薄層色譜鑒別控制金銀花的投料，未 進(jìn)行金銀花內(nèi)含成分的含量測定，這不能制止藥材少投料的問題，難以保證藥物的有效性。 文獻(xiàn)RP-HPLC法測定抗感顆粒中芍藥苷和綠原酸的含量（中國藥房2011年22卷40期 3820頁）提供了抗感顆粒中赤芍和金銀花的含量測定方法，其中金銀花的指標(biāo)成分僅使用 了綠原酸。但綠原酸是一種多種植物共有的成分，甚至在廢棄煙葉中也能分離得到，提取率 達(dá)到1.71%。僅以綠原酸作為指標(biāo)成分，控制金銀花制劑的質(zhì)量顯然是不夠的。文獻(xiàn)HPLC 法同時測定銀黃含片中6個咖啡?？鼘幩犷惓煞值暮浚ㄋ幬锓治鲭s志2012年32卷1期 57頁）對銀黃含片中金銀花藥材6個指標(biāo)成分：3-0-咖啡?？鼘幩?、5-0-咖啡?？鼘幩?、 4-0-咖啡酰奎寧酸、4, 5-0-二咖啡酰奎寧酸、3, 5-0-二咖啡?？鼘幩?、3, 4-0-二咖啡?？?寧酸進(jìn)行含量測定。該文獻(xiàn)在327nm波長處測定，而芍藥苷在327nm左右則沒有吸收，其含 量測定一般使用其最大吸收波長230nm，因而該文獻(xiàn)條件下不能同時實(shí)現(xiàn)芍藥苷的含量測 定。目前，現(xiàn)有技術(shù)中沒有對制劑中芍藥苷和上述6個咖啡?？鼘幩嵬瑫r進(jìn)行含量測定的 方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種中藥復(fù)方制劑中赤芍和金銀花多 成分含量測定方法。其中，赤芍指標(biāo)成分為芍藥苷，金銀花指標(biāo)成分為6個咖啡?？鼘幩幔?包括3-0-咖啡?？鼘幩?、綠原酸（5-0-咖啡?？鼘幩幔?-0_咖啡?？鼘幩?、4, 5-0-二咖啡 酰奎寧酸、3, 5-0-二咖啡酰奎寧酸、3, 4-0-二咖啡?？鼘幩?。
[0005] 術(shù)語說明：
[0006] 抗感顆粒是中國藥典2010年版第一增補(bǔ)本記載的藥品名稱。處方量：金銀花 7〇〇g、赤芍700g、綿馬貫眾233g，制成總量：1000g。
[0007] 抗感膠囊是國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)第38冊記載的 藥品名稱。標(biāo)準(zhǔn)編號：WS3-225(X-215)-2002Z。處方量：金銀花1500g、赤芍1500g、綿馬貫 眾500g，制成總量：450g。
[0008] 發(fā)明概述
[0009] 本發(fā)明使用一個色譜條件同時對中藥復(fù)方制劑中赤芍（芍藥苷）和金銀花（6個 咖啡?？鼘幩幔┻M(jìn)行了含量測定，操作簡便，分析數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。既節(jié)省了分析人員的分析時 間，提高了工作效率，同時又提高了制劑的安全性、有效性及可控性。
[0010] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0011] -種中藥復(fù)方制劑中赤芍、金銀花多指標(biāo)成分含量測定方法，步驟如下：
[0012] 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D的高效液相色譜法測定；
[0013] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：
[0014] 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以體積份數(shù)比0. 1 %~ 1 %的磷酸溶液為流動相B，采用梯度洗脫方式：0min - 14min - 22min - 23min - 38min - 39 min ;乙腈16%-16% -24%-24% -8%，體積份數(shù)比(λ 1%~1%的磷酸溶液：92% -84%- 84%- 76%- 76%- 92%;采用波長切換方式檢測：0~22min，在317~337nm 波長下檢測3-0-咖啡?？鼘幩?、5-0-咖啡?？鼘幩?、4-0-咖啡?？鼘幩幔?2~26min，在 220~240nm波長下檢測芍藥苷；26~38min，在317~337nm波長下檢測4, 5-0-二咖啡 酰奎寧酸、3, 5-0-二咖啡?？鼘幩?、3, 4-0-二咖啡酰奎寧酸；柱溫4~15°C;理論板數(shù)按綠 原酸峰計算應(yīng)不低于2000,按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于5000 ;
[0015] 對照品溶液的制備：取3-0-咖啡?？鼘幩?、5-0-咖啡酰奎寧酸、4-0-咖啡?？鼘?酸、芍藥苷、4, 5-0-二咖啡?？鼘幩?、3, 5-0-二咖啡?？鼘幩帷?, 4-0-二咖啡?？鼘幩岣鲗?照品適量，精密稱定，加體積百分比40%~60%甲醇制成每1ml含上述7個成分的質(zhì)量濃 度分別為 10 μ g、50 μ g、10 μ g、100 μ g、10 μ g、10 μ g、10 μ g 的混合溶液，即得；
[0016] 供試品溶液的制備：取含有赤芍和金銀花的中藥復(fù)方制劑，混勻，取相當(dāng)于金銀花 藥材0. 3~0. 5g的量，精密稱定或量取，置50ml量瓶中，加入體積百分比40%~60%甲醇 40ml，密塞，超聲處理30~40min，放冷，用體積百分比40%~60%甲醇定容至刻度，搖勾， 濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0017] 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測 定，即得。
[0018] 所述的含有赤芍和金銀花的中藥復(fù)方制劑是指含有赤芍和金銀花的組合物原料 藥，按常規(guī)工藝，加入常規(guī)輔料制備成臨床可接受的任何一種劑型，包括丸劑、散劑、顆粒 劑、片劑、錠劑、煎膏劑、糖漿劑、貼膏劑、合劑、滴丸劑、膠囊劑、酒劑、酊劑、流浸膏劑與浸膏 劑、膏藥、凝膠劑、軟膏劑、搽劑、注射劑、搽劑、洗劑、涂膜劑、栓劑、鼻用制劑、眼用制劑、氣 霧劑、噴霧劑。
[0019] 所述的梯度洗脫方式為梯度性地改變洗脫液的組分（成分、離子強(qiáng)度等）或pH，以 期將層析柱上不同的組分在合理的時間內(nèi)洗脫出來的方法。
[0020] 根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，
[0021] 流動相B磷酸溶液的體積份數(shù)比為0. 4% ;
[0022] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中采用波長切換方式檢測：0~22min，在327nm波長 下檢測3-0-咖啡?？鼘幩?、5-0-咖啡?？鼘幩?、4-0-咖啡酰奎寧酸；22~26min，在230nm 波長下檢測芍藥苷；26~38min，在327nm波長下檢測4, 5-0-二咖啡酰奎寧酸、3, 5-0-二 咖啡?？鼘幩?、3, 4-0-二咖啡酰奎寧酸；柱溫10°C。
[0023] 進(jìn)一步優(yōu)選的，一種原料藥組成為金銀花700g、赤芍700g、綿馬貫眾233g，制成總 量1000 g的中藥復(fù)方制劑抗感顆粒中赤芍、金銀花多指標(biāo)成分含量測定方法，步驟如下：
[0024] 照《中國藥典》2010年版一部附錄VI D的高效液相色譜法測定；
[0025] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：
[0026] 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以體積份數(shù)比0. 4%的磷 酸溶液為流動相B，采用梯度洗脫方式：0min - 14min - 22min - 23min - 38min - 39min ; 乙腈16%- 16%-24%-24%-8%，體積份數(shù)比(λ 4%的磷酸溶液：92%-84% -84%- 76%- 76%- 92% ;采用波長切換方式檢測：0~22min，在327nm波長下檢測 3-0-咖啡?？鼘幩?、5-0-咖啡酰奎寧酸、4-0-咖啡?？鼘幩?；22~26min，在230nm波長下 檢測芍藥苷；26~38min，在327nm波長下檢測4, 5-0-二咖啡?？鼘幩帷?, 5-0-二咖啡酰 奎寧酸、3, 4-0-二咖啡?？鼘幩幔恢鶞豄TC;理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于2000,按芍 藥苷峰計算應(yīng)不低于5000 ;
[0027] 對照品溶液的制備：取3-0-咖啡酰奎寧酸、5-0-咖啡酰奎寧酸、4-0-咖啡?？鼘?酸、芍藥苷、4, 5-0-二咖啡?？鼘幩?、3, 5-0-二咖啡?？鼘幩帷?, 4-0-二咖啡?？鼘幩岣鲗?照品適量，精密稱定，加體積百分比50%甲醇制成每1ml含上述7個成分的質(zhì)量濃度分別為 10 μ g、50 μ g、10 μ g、100 μ g、10 μ g、10 μ g、10 μ g 的混合溶液，即得；
[0028] 供試品溶液的制備：取含有赤芍和金銀花的中藥復(fù)方制劑抗感顆粒，研細(xì)，混勻， 取〇. 6g，相當(dāng)于金銀花藥材0. 42g，精密稱定，置50ml量瓶中，加入體積百分比50%甲醇 40ml，密塞，超聲處理30min，放冷，用體積百分比50%甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾 液，即得；
[0029] 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測 定，即得。
[0030] 中藥復(fù)方制劑抗感顆粒中赤芍含量以芍藥苷計，不得少于5. 5mg/g ;金銀花含量 以5-0-咖啡?？鼘幩嵊嫞坏蒙儆?. lmg/g，以6個咖啡?？鼘幩岬目傊亓坑?，不得少于 5. 6mg/g〇
[0031] 進(jìn)一步優(yōu)選的，一種原料藥