專利名稱：選擇性增加診斷細(xì)胞數(shù)量的新制片方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種痰細(xì)胞學(xué)檢查中的痰檢制片方法。
目前用于呼吸系統(tǒng)疾病組織細(xì)胞學(xué)的診斷方法有痰細(xì)胞學(xué)檢查、纖維支氣管鏡活檢及針吸細(xì)胞學(xué)檢查等方法。痰細(xì)胞學(xué)檢查是唯一一種對(duì)人體無(wú)損害，并能對(duì)肺病疾病進(jìn)行診斷的方法。它取樣容易、經(jīng)濟(jì)無(wú)害，能用于許多疾病，如炎疹、腫瘤的診斷。
目前在世界范圍內(nèi)通用的常規(guī)痰檢制片方法，是將痰液直接涂于載玻片上，不僅涂片面積大，而且痰液中能用于診斷的細(xì)胞成分少，粘液成分多、炎性細(xì)胞多、干擾大，不利于醫(yī)生和掃描儀器從痰液中找到相關(guān)的細(xì)胞成分，用于診斷肺癌，其陽(yáng)性率僅15％左右，故使其不能在臨床診斷中發(fā)揮其應(yīng)有的作用。
本發(fā)明的目的是針對(duì)上述問(wèn)題，旨在提供一種可選擇性提高涂片中有助于臨床診斷的細(xì)胞數(shù)量，以利于醫(yī)生和掃描儀能快速有效地診斷的制片方法，它還可用于宮頸刮片細(xì)胞、胸腔積液、腹腔積液、腦積液、食道、胃、腸刷片標(biāo)片的制片。
本發(fā)明目的的實(shí)現(xiàn)方式為，選擇性增加診斷細(xì)胞數(shù)量的新制片方法，取診斷液振蕩打勻后，放入離心機(jī)中離心5-20分鐘，去除上清液，向沉淀部分中加入0.1-10％二硫蘇糖醇消化30-60分鐘，待用。
用固定液配制兩種密度不同的細(xì)胞分離液、固定液采用Sedfix,4-10％福爾馬林或75％酒精，細(xì)胞分離液采用Percoll或蔗糖。
按先比重小、后比重大的順序?qū)?-15ml細(xì)胞分離液加入50ml離心管中再加入診斷液后，以2000-4000轉(zhuǎn)/分的速度離心分離10-30分鐘，取出與診斷有關(guān)的成分，棄去上清液及其它細(xì)胞成分。
用固定液對(duì)沉淀部分再次離心清洗后，將沉淀的細(xì)胞打勻、涂片、干后染色。
下面參照附圖對(duì)本發(fā)明詳細(xì)說(shuō)明。


圖1用細(xì)胞分離液分離痰液步驟及結(jié)果示意2本發(fā)明和常規(guī)方法涂片面積及所含細(xì)胞對(duì)比3采用本發(fā)明的支氣管沖洗細(xì)胞掃描狀態(tài)圖。
本發(fā)明采用兩種比重不同的細(xì)胞分離液2、3按圖1所示的步驟將痰液1用離心分離的方式分離成細(xì)胞液4和細(xì)胞液5兩層，從右邊的彩色圖片可見(jiàn)，細(xì)胞液4中絕大部分為炎性細(xì)胞，只有極少量上皮細(xì)胞，而與診斷有關(guān)的細(xì)胞則分離在細(xì)胞液5中。
本發(fā)明細(xì)胞分離液的配制方法為，取瑞典Pharmacia，公司生產(chǎn)的Percoll或蔗糖用固定液Sedfix、4-10％福爾馬林或75％酒精中的任一種配成不同比重的兩種液體，兩種液體加入離心管中。兩種分離液具體為Percoll液體1d1 1.70-1.096液體2d2 1.010-1.060蔗糖 液體1重量％ 70-95％液體2 40-65％。
本發(fā)明方法相對(duì)常規(guī)方法涂片面積小，涂片中所含診斷細(xì)胞多，具體對(duì)比如下涂片面積上皮細(xì)胞數(shù)單位面積上 細(xì)胞儀皮細(xì)胞數(shù)掃描時(shí)間本方法 25mm230000 1200＜20分鐘常規(guī)方法900mm2400 0.4 2小時(shí)涂片面積及涂片中所含上皮細(xì)胞數(shù)的對(duì)比還可見(jiàn)圖2，圖2a、b為常規(guī)方法的結(jié)果，c、d為本發(fā)明方法的結(jié)果。
采用本發(fā)明制片方法所涂的涂片，用掃描儀在短時(shí)間內(nèi)掃描，即可從痰液中檢測(cè)出如圖3中所示的磷狀上皮細(xì)胞6，塵細(xì)胞7、纖毛柱狀上皮細(xì)胞8、肺癌細(xì)胞株9 。
采用本發(fā)明制片方法可有目的地將與診斷有關(guān)的細(xì)胞成分從痰樣中分離出來(lái)，選擇性增加了診斷細(xì)胞肺上皮細(xì)胞，基底細(xì)胞、肺腫瘤細(xì)胞株的數(shù)量，且其數(shù)量比常規(guī)方法提高10-20倍，而與診斷無(wú)關(guān)的細(xì)胞數(shù)又大大減少，從而提高肺癌診斷陽(yáng)性率。
本發(fā)明明顯降低了醫(yī)生和細(xì)胞掃描儀的工作量，提高了工作效率，為大規(guī)模進(jìn)行肺癌普查提供了簡(jiǎn)單、快速和有效的診斷方法，它還可用于其它臨床細(xì)胞學(xué)診斷的標(biāo)本分離，如宮頸刮片、胸腔積液、腹腔積液，腦積液、食道、胃、腸刷片標(biāo)本等，提高不同疾病診斷的陽(yáng)性率。
權(quán)利要求
1.選擇性增加診斷細(xì)胞數(shù)量的新制片方法，其特征在于取診斷液振蕩打勻后，放入離心機(jī)中離心5-20分鐘，去除上清液，向沉淀部分中加入0.1-10％二硫蘇糖醇消化30-60分鐘，待用，用固定液配制兩種密度不同的細(xì)胞分離液，固定液采用Sedfix,4-10％福爾馬林或75％酒精，細(xì)胞分離液采用Percoll或蔗糖，按先比重小、后比重大的順序?qū)?-15ml細(xì)胞分離液加入50ml離心管中再加入診斷液后，以2000-4000轉(zhuǎn)/分的速度離心分離10-30分鐘，取出與診斷有關(guān)的細(xì)胞成分，棄去上清液及其它細(xì)胞成分，用固定液對(duì)沉淀部分再次離心清洗后，將沉淀的細(xì)胞打勻、涂片、干后染色。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于兩Pereoll細(xì)胞分離液的比重分別為1.70-1.096,1.010-1.060。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制片方法，其特征在于兩蔗糖細(xì)胞分離液的濃度分別為70-95％，40-65％。
全文摘要
選擇性增加診斷細(xì)胞數(shù)量的新制片方法,是將痰液經(jīng)振蕩、離心后用不同比重的細(xì)胞分離液對(duì)沉淀部分進(jìn)行離心分離,取含大量與診斷有關(guān)的細(xì)胞的沉淀部分離心清洗后打勻、涂片、干后染色。采用本發(fā)明,能有效地將與診斷有關(guān)的細(xì)胞成分從痰樣中分離出來(lái),使用于診斷的細(xì)胞數(shù)比常規(guī)方法高10—20倍。本發(fā)明為大規(guī)模普查肺癌提供了簡(jiǎn)單快速有效的診斷方法,還可用于胸、腹腔積液、腦積液、食道、胃、腸刷片標(biāo)本的分離處理。
文檔編號(hào)G01N33/50GK1232181SQ9911638
公開(kāi)日1999年10月20日 申請(qǐng)日期1999年3月19日 優(yōu)先權(quán)日1999年3月19日
發(fā)明者孫小蓉 申請(qǐng)人:孫小蓉