專利名稱：熒光圖像光密度計的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對二維展開于TLC片(薄膜色譜分析片)上含有經(jīng)熒光標(biāo)記了的磷脂質(zhì)等樣品點的樣品片進行測定的二維熒光光密度計。
作為測定展開于TLC片上的樣品的二維光密度計，有測定光在TLC片上往復(fù)掃描，并在與此正交的方向上平移來進行測定的飛點掃描方式的光密度計。
而且這樣的光密度計是由經(jīng)過樣品的測定光的反射光和透射光來測定其吸光度的。
作為飛點掃描方式，有如實施例

圖1所示的，由與中心的距離一致變化的螺旋狀光縫Sr，和具有該螺旋狀光縫Sr的在光縫圓板24的半徑方向上延伸并與螺旋狀光縫Sr配合的固定光縫Sfix來限制光束，通過螺旋狀光縫Sr的往復(fù)旋轉(zhuǎn)運動而使樣品面上的光束沿左右方向顯示的方式。使光束在樣品面上顯示的場合，光束根據(jù)掃描方向的位置具有強度不同的所謂位置分布。光束之所以有位置分布，可考慮為是螺旋狀光縫的槽穴寬的不均勻性，光學(xué)系統(tǒng)的屬性特別是照射到固定光縫Sfix上光的強度分布或使光束沿左右方向顯示的場合由于光路傾斜而使入射到探測器的光通量變化等原因。
這樣的位置分布對于從樣品發(fā)出的反射光和透射光測定吸光度的光密度計例如可由半透半反鏡取出照射光的一部分來進行監(jiān)測。
可考慮將對展開于樣品片上的樣品成分進行熒光標(biāo)記的熒光圖光密度計用作為光密度計。通過熒光標(biāo)記樣品成品、由激勵光激勵樣品測定其熒光，能比已有的測定吸光度的方法進行高靈敏度的測定。然而對于熒光圖光密度計按已有的方式是無法修正位置分布。
本發(fā)明目的在于在按飛點掃描方式實現(xiàn)熒光圖光密計時修正位置分布。
在本發(fā)明中，作出激勵光強度的修正表，通過用修正表的值除從樣品發(fā)出的熒光，進行位置分布修正，并除掉位置分布成分。除去位置分布成分用的修正表例如通過測定加入熒光劑的TLC片而得到。
為此本發(fā)明中包括對測定片掃描照射激勵光束的激勵光學(xué)系統(tǒng);檢測從測定片的激勵光照射位置發(fā)出的熒光的熒光檢測系統(tǒng);將至少在激勵光掃描范圍內(nèi)一樣地加入熒光劑的片裝上作為測定片，將測定時的熒光數(shù)據(jù)與測定片上的掃描方向的位置信息一起存儲的修正表;將樣品片裝上作為測定片將測定時的熒光檢測數(shù)據(jù)由存儲于所述修正表中的測定片上掃描方向的同一位置的熒光數(shù)據(jù)除去的運算部。
圖1是示出一實施例的構(gòu)成圖。
圖2是示出光束掃描的激勵光強度的位置分布的圖。
圖3是示出測定樣品片時的熒光強度的圖。
圖4是示出位置分布修正功能的框圖。
圖5是示出飛點方式的掃描的圖。
圖6是示出作出修正表順序的流程圖。
圖7是示出測定樣品的流程圖。
其中，26為步進電機，24為圓板，Sr為螺旋狀光縫，Sfix為固定光縫，34為測定片，40為熒光濾光片，42為熒光用光電倍增管，46為Ⅳ變換器，48為A-D變換器，50為CPU，52為電機驅(qū)動電路，54為修正表，56為運算部。
圖1表示第一實施例。
10為鹵鎢燈，12為氘燈，備有2種燈作為光源。14為光源切換鏡，用來將從10或12任一燈發(fā)出的光作為激勵光。16為切換濾光片，可在光路中插入使激勵光成分的光透過的濾光片。18為分光器的入口光縫，20為準(zhǔn)直面鏡，22為衍射光柵。分光器的出口光縫是螺旋狀光縫Sr與固定光縫Sfix。螺旋狀光縫Sr形成在圓板24上，螺旋狀光縫Sr可設(shè)計為從圓板24的中心的距離相對于旋轉(zhuǎn)角單調(diào)變化的形狀。在圓板24上除了螺旋狀光縫Sr以外還圖示了孔穴尺寸相異的幾個光縫25。這些固定光縫25是在固定照射光束進行測定的情況下停下圓板24而被使用的。圓板24在以飛點掃描方式使用時在激勵光透過螺旋狀光縫Sr的范圍內(nèi)可在往復(fù)方向上旋轉(zhuǎn)驅(qū)動。26是驅(qū)動圓板24的步進電機。螺旋狀光縫Sr在與圓板24的半徑方向上延伸的固定光縫Sfix重合。
從分光器發(fā)出的激勵光經(jīng)凹面鏡30與平面鏡32照射到測定片34上。在從面鏡32至測定片34的激勵光光路上配置了水晶窗板36作為半透明反射鏡，由半透明反射鏡36取出的一部分激勵光可由監(jiān)測用光電倍增管38監(jiān)測。激勵光入射到測定片34上，為測定從其激勵部分發(fā)出的熒光經(jīng)過可透過熒光而遮蔽激勵光的濾光片40后配置著熒光用光電倍增管42。為測定測定片34的照射位置的透過光強度，在測定片的里面一側(cè)還配置了透過用光電倍增管44。
測定熒光的光電倍增管42的檢測輸出由Ⅳ變換器變換為電壓值，進一步由AD變換器48變換成數(shù)字信號后，可送到CPU50進行數(shù)據(jù)處理。CPU50還控制著步進電機26的驅(qū)動電路52。
照射測定片34的激勵光有位置分布。位置分布是照射光束掃描方向的位置x與激勵光波長λ的函數(shù)f(x，λ)。裝上加入熒光劑的TLC片作為測定片34，若以單位強度的光激勵出的熒光強度為σ(λ)，則按量子化效率式，熒光強度與激勵光強度之間有比例關(guān)系，因而在由具有如圖2所的位置分布強度f(x，λ)的光激勵TLC片的埸合，其熒光強度就為σ(λ)f(x，λ)。
因而保持住σ(λ)f(x，λ)作為位置修正，并由此除熒光強度σ(λ)f(x，λ)，則射到加入熒光劑的TLC片上的地方為1而獲得一樣的熒光強度。
接著在裝上樣品片作為測定片測定的埸合，若單位強度的光激勵出的熒光為g(x，λ)，g(x，λ)是例如圖3中所示的那樣。由于激勵光的位置分布，由光密度計獲得的信號為g(x，λ)f(x，λ)。由預(yù)先存儲好的位置分布修正表的相同位置的值除這，就會為，g(x，λ)f(x，λ)/σ(λ)f(x，λ)＝g(x，λ)/σ(λ)成為如使用了完全一樣的光源后的比例系數(shù)。
為進行位置分布修正CPU50如圖4所示，完成修正表54與運算部56的功能。在修正表54中存儲裝上加入熒光劑的TLC片作為測定片后的熒光測定值。運算部56將測定出樣品片的熒光強度除以相同掃描位置的修正表的值從而得到經(jīng)位置分布修正后的熒光強度。
用于修正表54與運算部56的掃描方向的位置數(shù)據(jù)可在CPU50中從用來控制步進電機26的數(shù)據(jù)獲得。
圖5中示出了飛點掃描方式的激勵光掃描的例子。
在TLC片58固定的狀態(tài)下對激勵光沿x方向掃描。若在1次掃描中在51點上進行熒光測定，則第26點就是掃描的中心點x方向1次掃描結(jié)束，接著就使TLC片58在y方向上僅僅平移規(guī)定的距離，繼續(xù)進行一x方向上的掃描，其后再使TLC片58在y方向上僅僅平移規(guī)定的距離，重復(fù)如上所述的折線狀掃描。對TLC片作全面的這類掃描。
在位置分布修正表中，對應(yīng)于x方向的1次掃描來存儲x方向的位置數(shù)據(jù)與加入熒光劑TLC片的熒光強度作為修正數(shù)據(jù)。
圖6中示出了修正表作成的順序。
將加入熒光劑的TLC片裝到測定片的位置，在x方向上掃描激勵光測定數(shù)據(jù)，存儲該值。若對它一分掃描結(jié)束前進行時，則使TLC片平移同樣地掃描激勵光測定數(shù)據(jù)。在重復(fù)該動作設(shè)定的次數(shù)后，相對x座標(biāo)對測定數(shù)據(jù)進行平均處理，在修正表中存儲其平均值。
圖7表示了測定的順序。
裝上樣品TLC片作為測定片，一邊掃描一邊測定數(shù)據(jù)，從修正表查詢出相同位置的修正值進行除法運算，這在1分掃描結(jié)束前重復(fù)。1分掃描一結(jié)束就使樣品TLC片在y方向上移動規(guī)定的一步，再在該y位置上一邊掃描激勵光一邊重復(fù)測定與除法運算。
當(dāng)在y方向上1分列的測定一結(jié)束，使樣品TLC片在x方向上移動，再進行折線掃描并重復(fù)測定與除法運算。
對于存儲在修正表中的熒光數(shù)據(jù)是可以用以在x方向上掃描的范圍的中央位置作為基準(zhǔn)的相對值數(shù)據(jù)。在x方向掃描的中央位置上的加入熒光劑的TLC片的熒光測定值為σ(λ)f(0，λ)，任意點的熒光測定值σ(λ)f(x，λ)除以其中央點的熒光測定值后的值，即σ(λ)f(x，λ)/σ(λ)f(0，λ)＝f(x，λ)/f(0，λ)作為修正數(shù)據(jù)存儲在修正表中。該場合相當(dāng)于假定在中央無位置分布的情況，所得的信號有在樣品TLC片的x方向掃描中央點的熒光測定值g(0，λ)f(0，λ)為單位，從而數(shù)據(jù)處理上方便。
在本發(fā)明中是對在光束掃描范圍內(nèi)一樣地加上熒光劑的片測定把測出熒光數(shù)據(jù)作為修正值，除測定實際樣品片時的熒光測定值來進行位置分布修正，因而在飛點掃描方式的光密度計中能實現(xiàn)熒光標(biāo)記樣品測定熒光并進行高靈敏度測定的熒光密度計，而使由位置分布產(chǎn)生的數(shù)據(jù)不隨位置改變。
權(quán)利要求
1.一種飛點掃描方式的熒光圖像光密度計，其特征在于包括對測定片掃描照射激勵光束的激勵光學(xué)系統(tǒng)；檢測從測定片的激勵光照射位置發(fā)出的熒光的熒光檢測系統(tǒng)；將至少在激勵光掃描范圍內(nèi)一樣地加入熒光劑的片裝上作為測定片，將測定出的熒光數(shù)據(jù)與測定片上掃描方向的位置信息一起存儲的修正表；將樣品片裝上作為測定片將測定出的熒光檢測數(shù)據(jù)由存儲于所述修正表中的測定片上掃描方向的同一位置的熒光數(shù)據(jù)除去的運算部。
全文摘要
本發(fā)明的熒光圖像光密度計在實現(xiàn)按飛點方式掃描時對位置分布進行修正。在修正表54中存儲著裝著加入熒光劑的TLC片作為測定片時的熒光測定值，運算部56將測定樣品片時的熒光強度除以相同掃描位置的修正數(shù)據(jù)，而得到經(jīng)位置分布修正后的熒光強度。若用以掃描激勵光的范圍的中央位置作基準(zhǔn)的相對值作為修正表的數(shù)據(jù)，則所得的信號有在樣品片掃描中央點的熒光測定值作為單位從而數(shù)據(jù)處理上方便。
文檔編號G01N30/86GK1064545SQ92100398
公開日1992年9月16日 申請日期1992年1月20日 優(yōu)先權(quán)日1991年1月31日
發(fā)明者新屋和也 申請人:島津制作所