本發(fā)明涉及移植物抗宿主病診斷，具體地，涉及檢測(cè)外周血中b細(xì)胞表面標(biāo)記物的試劑在制備診斷試劑盒中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、造血干細(xì)胞移植(allo-hematopoietic?stem?cells?transplantation,hsct)已成為臨床治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤和造血系統(tǒng)先天性疾病最有效的手段。移植物抗宿主病(graft-versus-host?disease，gvhd)是異基因造血干細(xì)胞移植的主要并發(fā)癥，是移植后非復(fù)發(fā)死亡的主要原因之一。gvhd是由供體淋巴細(xì)胞識(shí)別宿主(受體)抗原，發(fā)生同種異基因免疫反應(yīng)，攻擊宿主組織器官而產(chǎn)生的一系列臨床表現(xiàn)。gvhd根據(jù)其發(fā)生時(shí)間、病理特征分為急性gvhd(acute?gvhd,agvhd)和慢性gvhd(chronic?gvhd，cgvhd)。agvhd主要是由于放化療預(yù)處理引起受者組織炎癥性損傷，供體t淋巴細(xì)胞激活后，產(chǎn)生大量炎癥因子(ifn-γ、tnf-α、il-1等)，攻擊宿主靶組織(皮膚、黏膜、肝、腸道)所致。與agvhd主要由供者t細(xì)胞導(dǎo)致所不同，cgvhd的發(fā)病機(jī)理更加復(fù)雜，抗原遞呈細(xì)胞遷移至次級(jí)淋巴器官，引起多種t輔助細(xì)胞(如th1/tc1細(xì)胞、th17細(xì)胞、tfh細(xì)胞)與產(chǎn)生自身抗體的b細(xì)胞激活與分化，從而導(dǎo)致皮膚、粘膜、胃腸道、腺體等靶組織的損傷與纖維化，表現(xiàn)出類(lèi)似于自身免疫性疾病的免疫病理特征。

2、cgvhd發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，病人的臨床表現(xiàn)多樣，個(gè)體差異很大，病程遷延不愈，假如不給予及時(shí)、合適的干預(yù)，將會(huì)嚴(yán)重影響病人的生活質(zhì)量，甚至危及生命。盡管多種新型免疫抑制劑的出現(xiàn)，為cgvhd的提供了有效的治療手段，但是由于往往不能在發(fā)病的早期予以干預(yù)，所以治療效果并不穩(wěn)定。因此，迫切需要有效的措施，及早確診疾病，或者對(duì)病人細(xì)分，針對(duì)性的制定治療方案。唯有這樣，方能提高cgvhd的臨床治療效果，而形成有效措施的關(guān)鍵在于找到準(zhǔn)確、及時(shí)反映cgvhd病情的指標(biāo)。

3、遺憾的是，目前cgvhd確診和病情評(píng)判主要依賴于病人的臨床表現(xiàn)和病理學(xué)指標(biāo)，這導(dǎo)致病情的監(jiān)測(cè)滯后且不準(zhǔn)確。當(dāng)前的病情評(píng)價(jià)系統(tǒng)無(wú)法滿足早確診和細(xì)分cgvhd病人的臨床需求。因此，探尋敏感、特異的細(xì)胞或分子標(biāo)志，并據(jù)此建立動(dòng)態(tài)反映病情發(fā)展的監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，是破解cgvhd診治困境的關(guān)鍵一環(huán)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供檢測(cè)外周血中b細(xì)胞表面標(biāo)記物的試劑在制備診斷試劑盒中的應(yīng)用。

2、本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供檢測(cè)外周血中b細(xì)胞表面標(biāo)記物的試劑在制備診斷移植物抗宿主病試劑盒中的應(yīng)用。

3、本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供檢測(cè)外周血中b細(xì)胞表面標(biāo)記物的試劑在制備診斷移植物抗宿主病試劑盒中的應(yīng)用。

4、本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種診斷試劑盒。

5、本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種診斷外周血中b細(xì)胞表面標(biāo)記物的試劑的組合物。

6、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過(guò)以下方案予以實(shí)現(xiàn)的：

7、檢測(cè)外周血中b細(xì)胞表面標(biāo)記物的試劑在制備診斷移植物抗宿主病試劑盒中的應(yīng)用，所述b細(xì)胞表面標(biāo)記物為兩個(gè)陰性表面標(biāo)志物：cd20和/或cd268，以及六個(gè)陽(yáng)性表面標(biāo)志物：cd5、cd27、cd38、cd86、cd269和/或cd319。

8、即b細(xì)胞表面不表達(dá)cd20和cd268，同時(shí)b細(xì)胞表面表達(dá)cd5、cd27、cd38、cd86、cd269和cd319的患者為cgvhd和non-gvhd患者。

9、cgvhd患者為已經(jīng)發(fā)生慢性移植物抗宿主病的患者。

10、non-gvhd患者為尚未發(fā)生慢性移植物抗宿主病的但是日后會(huì)發(fā)生慢性移植物抗宿主病的患者。

11、優(yōu)選地，所述b細(xì)胞表面標(biāo)記物為陰性表面標(biāo)志物cd20，以及陽(yáng)性表面標(biāo)志物：cd27和/或cd86。

12、優(yōu)選地，所述診斷移植物抗宿主病為區(qū)分慢性移植物抗宿主病患者與非慢性移植物抗宿主病人員，所述慢性移植物抗宿主病患者包括已經(jīng)發(fā)病和接受造血干細(xì)胞移植且尚未發(fā)病的患者。

13、更優(yōu)選地，所述慢性移植物抗宿主病患者包括已經(jīng)發(fā)病和接受造血干細(xì)胞移植后6個(gè)月內(nèi)尚未發(fā)病的患者。

14、更優(yōu)選地，所述診斷移植物抗宿主病為判斷慢性移植物抗宿主病患者接受治療是否有效。

15、進(jìn)一步優(yōu)選地，計(jì)算外周血淋巴細(xì)胞中，在cd45+和cd19+雙陽(yáng)細(xì)胞中，cd20-細(xì)胞占比與cd27+細(xì)胞占比以及cd86+細(xì)胞占比的乘積，再乘以100的值，作為cgps分值，cgps分值小于1.15的移植后未發(fā)生移植物抗宿主病患病患者發(fā)病概率，比cgps分值大于等于1.15的移植后未發(fā)生移植物抗宿主病患病患者發(fā)病概率低。

16、進(jìn)一步優(yōu)選地，計(jì)算外周血淋巴細(xì)胞中，在cd45+和cd19+雙陽(yáng)細(xì)胞中，cd20-細(xì)胞占比與cd27+細(xì)胞占比以及cd86+細(xì)胞占比的乘積，再乘以100的值，作為cgps分值，cgps分值小于1.505的cgvhd患者出現(xiàn)治療后病情惡化概率，比cgps分值大于等于1.505的cgvhd患者出現(xiàn)治療后病情惡化概率低。

17、本發(fā)明還請(qǐng)求保護(hù)檢測(cè)外周血b細(xì)胞表面標(biāo)記物的試劑在制備診斷人體健康狀態(tài)的試劑盒中的應(yīng)用，所述b細(xì)胞表面標(biāo)記物為兩個(gè)陰性表面標(biāo)志物：cd20和/或cd268，以及六個(gè)陽(yáng)性表面標(biāo)志物：cd5、cd27、cd38、cd86、cd269和/或cd319。

18、優(yōu)選地，所述b細(xì)胞表面標(biāo)記物為陰性表面標(biāo)志物cd20，以及陽(yáng)性表面標(biāo)志物：cd27和/或cd86。

19、優(yōu)選地，所述診斷人體健康狀態(tài)為區(qū)分人體健康，所述人體健康狀態(tài)包括：健康和/或亞健康。

20、更優(yōu)選地，計(jì)算外周血淋巴細(xì)胞中，在cd45+和cd19+雙陽(yáng)細(xì)胞中，cd20-細(xì)胞占比與cd27+細(xì)胞占比以及cd86+細(xì)胞占比的乘積，再乘以100的值，作為hgps分值；hgps分值小于等于0.54，判斷為健康狀態(tài)；hgps分值大于0.54，判斷為亞健康狀態(tài)。

21、本發(fā)明還要求提供一種診斷試劑盒，含有檢測(cè)外周血中b細(xì)胞表面標(biāo)記物的試劑，所述b細(xì)胞表面標(biāo)記物為兩個(gè)陰性表面標(biāo)志物：cd20和/或cd268，以及六個(gè)陽(yáng)性表面標(biāo)志物：cd5、cd27、cd38、cd86、cd269和/或cd319。

22、優(yōu)選地，所述b細(xì)胞表面標(biāo)記物為陰性表面標(biāo)志物cd20，以及陽(yáng)性表面標(biāo)志物：cd27和cd86。

23、優(yōu)選地，所述檢測(cè)外周血中b細(xì)胞表面標(biāo)記物的試劑為基于流式細(xì)胞分析試劑。

24、優(yōu)選地，所述基于流式細(xì)胞分析試劑為基于光譜流式的試劑。

25、本發(fā)明還請(qǐng)求保護(hù)一種檢測(cè)外周血中b細(xì)胞表面標(biāo)記物的試劑的組合物，所述b細(xì)胞表面標(biāo)記物為兩個(gè)陰性表面標(biāo)志物：cd20和/或cd268，以及六個(gè)陽(yáng)性表面標(biāo)志物：cd5、cd27、cd38、cd86、cd269和/或cd319。

26、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

27、本發(fā)明基于外周血b淋巴細(xì)胞的光譜流式數(shù)據(jù)，找到cgvhd特征亞群，明確標(biāo)識(shí)該亞群的8個(gè)表面標(biāo)志物；并進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)僅需其中的3個(gè)表面標(biāo)志物便可精準(zhǔn)定義該cgvhd的b細(xì)胞特征亞群；根據(jù)該3個(gè)表面標(biāo)志物在正常與疾病狀態(tài)下的流式細(xì)胞數(shù)據(jù)，進(jìn)行數(shù)字化轉(zhuǎn)換，建立了區(qū)分cgvhd病情進(jìn)展的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)：cgps(cgvhd?progress?score)；應(yīng)用cgps系統(tǒng)能夠動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)慢性移植物抗宿主病患者的病情，精準(zhǔn)判斷病人是否處于疾病的活躍期；同時(shí)上述3個(gè)表面標(biāo)志物還能夠用于診斷人體健康狀態(tài)，有效區(qū)分健康和亞健康狀態(tài)。