本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說，尤其涉及一種陰離子/非離子型PAM中丙烯酰胺殘留量的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

PAM是丙烯酰胺均聚物和各種共聚物的統(tǒng)稱，是重要的水溶性聚合物，并兼具絮凝性、增稠性、耐剪切性、降阻性、分散性等性能，作為一種高技術(shù)含量、高附加值的重要化工產(chǎn)品，已廣泛應(yīng)用在采油、化工、造紙、紡織、制糖、醫(yī)藥、環(huán)保、建材、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等部門和領(lǐng)域并已滲透到人們的日常生活中。我們知道PAM在工業(yè)化生產(chǎn)過程中受外界干擾因素較多，導(dǎo)致合成的產(chǎn)品中單體丙烯酰胺的含量難以控制，而丙烯酰胺又是公認(rèn)的致癌物質(zhì)和神經(jīng)致毒劑，世界衛(wèi)生組織的《環(huán)境衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)49-丙烯酰胺》對(duì)此作出了嚴(yán)格要求。為了防止丙烯酰胺進(jìn)入環(huán)境，危害人們的身體健康，必須對(duì)PAM中殘留丙烯酰胺嚴(yán)格檢測(cè)。目前較為準(zhǔn)確的對(duì)丙烯酰胺檢測(cè)方法，是使用高效液相色譜和氣相色譜進(jìn)行檢測(cè)，其中高效液相色譜法執(zhí)行的GB/T22312-2008《塑料聚丙烯酰胺殘留丙烯酰胺含量測(cè)定方法》。該方法中樣品的前處理時(shí)間較長，其原理是利用萃取劑對(duì)樣品長時(shí)間的浸取，當(dāng)產(chǎn)品中單體的含量和萃取劑中的含量，形成一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡時(shí)，丙烯酰胺得以充分釋放到萃取劑中，達(dá)到最大值。如果沒有外界條件干預(yù)的話，這一浸取時(shí)間通常在24小時(shí)以上，然后再通過高效液相色譜分析。這一方法樣品的前處理復(fù)雜，時(shí)間長，誤差比較大，色譜的分離效果不理想，對(duì)于生產(chǎn)PAM的企業(yè)，使用該方法檢測(cè)產(chǎn)品中的丙烯酰胺的含量，難以適應(yīng)企業(yè)對(duì)產(chǎn)品檢測(cè)快速、準(zhǔn)確分析的要求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的檢測(cè)時(shí)間長，繁瑣，工序步驟較多等缺陷，而提出的一種陰離子/非離子型PAM中丙烯酰胺殘留量的檢測(cè)方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種陰離子/非離子型PAM中丙烯酰胺殘留量的檢測(cè)方法，包括如下步驟：

S1、酸洗多壁碳納米管：多壁碳納米管的活化為了除去多壁碳納米管在生產(chǎn)過程殘留的催化劑及其他雜質(zhì)，并且在多壁碳納米管表面添加上羧基(-COOH)和羥基(-OH)，將2.0g多壁碳納米管溶于100mlL的混合酸中，加熱攪拌3.0h后過濾；

S2、過濾后純化的多壁碳納米管用超純水洗至中性，置于60℃的真空干燥箱中，干燥12h；

S3、殼聚糖交聯(lián)多壁碳納米管的合成：以多壁碳納米管為支撐載體，將殼聚糖交聯(lián)于多壁碳納米管表面；

S4、殼聚糖交聯(lián)多壁碳納米管MSPD-HPLC聯(lián)用檢測(cè)陰離子/非離子型PAM中丙烯酰胺殘留量；液相色譜條件：采用VP-ODS C18反相柱4.6mm×150mm的柱進(jìn)行分離；流動(dòng)相比例色譜甲醇/DDW＝20/80，流速0.8mL/min，柱溫箱40℃，進(jìn)樣量20微升，檢測(cè)波長204nm。

優(yōu)選的，所述殼聚糖交聯(lián)多壁碳納米管的合成具體步驟如下：

a首先，將100mg的多壁碳納米管溶解于20mL一定濃度的殼聚糖乙酸溶液中(乙酸含量為2％)，為了提高多壁碳納米管的分散效果，加入0.1g的SDS；

b其次，將混合物超聲30min后加入一定量1％的戊二醛；

c再次，混合物繼續(xù)超聲120min后將其在轉(zhuǎn)速10000rmp的離心機(jī)離心分離,30min，在DDW/甲醇＝1/1的條件下產(chǎn)品索氏清洗8h；

d最后，將制備好的多壁碳納米管在60℃真空條件下干燥24h。

優(yōu)選的，在S4中，檢測(cè)陰離子/非離子型PAM中丙烯酰胺殘留量的預(yù)先處理具體過程如下：

a殼聚糖交聯(lián)多壁碳納米管作為基質(zhì)分散固相萃取吸附劑，對(duì)陰離子/非離子型PAM中丙烯酰胺殘留量的提取分離效果，將1.0g基質(zhì)分別與1.0g，2.0g，3.0g，4.0g的吸附劑混合，在研缽內(nèi)充分研磨5min后，將混合物移入空的UCT SPE柱中；

b然后用2.0mL的正己烷與2.0ml的甲醇/DDW＝40/60淋洗除雜，再選取不同組成和體積的洗脫液進(jìn)行洗脫；

c最后洗脫液收集后用氮吹至干，再用0.3mL的DDW復(fù)溶，0.22gm的濾頭過濾后進(jìn)高效液相色譜檢測(cè)，進(jìn)樣量為20微升。

優(yōu)選的，所述混合酸為98％的濃硫酸與65％的濃硝酸，且濃硫酸體與濃硝酸的積比1:3。

本發(fā)明的技術(shù)效果和優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明提供的一種陰離子/非離子型PAM中丙烯酰胺殘留量的檢測(cè)方法，與傳統(tǒng)技術(shù)相比，本發(fā)明以殼聚糖交聯(lián)多壁碳納米管為吸附劑的MSPD-HPLC技術(shù)集樣品的萃取與富集于一體提高了對(duì)目標(biāo)物的提取效率、降低了提取過程中的損失，并且該萃取方法大大縮短萃取所用時(shí)間、節(jié)省有機(jī)溶劑使用量。

附圖說明

圖1為陰離子聚丙烯酰胺萃取液色譜圖。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1

一種陰離子/非離子型PAM中丙烯酰胺殘留量的檢測(cè)方法，包括如下步驟：

S1、酸洗多壁碳納米管：多壁碳納米管的活化為了除去多壁碳納米管在生產(chǎn)過程殘留的催化劑等雜質(zhì)，并且在多壁碳納米管表面添加上羧基(-COOH)和羥基(-OH)，將2.0g多壁碳納米管溶于100mlL的混合酸(98％的濃硫酸與65％的濃硝酸，且濃硫酸體與濃硝酸的積比1:3)中，加熱攪拌3.0h后過濾；

S2、過濾后純化的多壁碳納米管用超純水洗至中性，置于60℃的真空干燥箱中，干燥12h；

S3、殼聚糖交聯(lián)多壁碳納米管的合成：以多壁碳納米管為支撐載體，將殼聚糖交聯(lián)于多壁碳納米管表面；

S4、殼聚糖交聯(lián)多壁碳納米管MSPD-HPLC聯(lián)用檢測(cè)陰離子/非離子型PAM中丙烯酰胺殘留量；液相色譜條件：采用VP-ODS C18反相柱4.6mm×150mm的柱進(jìn)行分離；流動(dòng)相比例色譜甲醇/DDW＝20/80，流速0.8mL/min，柱溫箱40℃，進(jìn)樣量20微升，檢測(cè)波長204nm。

所述殼聚糖交聯(lián)多壁碳納米管的合成具體步驟如下：

a首先，將100mg的多壁碳納米管溶解于20mL一定濃度的殼聚糖乙酸溶液中(乙酸含量為2％)，為了提高多壁碳納米管的分散效果，加入0.1g的SDS；

b其次，將混合物超聲30min后加入一定量1％的戊二醛；

c再次，混合物繼續(xù)超聲120min后將其在轉(zhuǎn)速10000rmp的離心機(jī)離心分離,30min，在DDW/甲醇＝1/1的條件下產(chǎn)品索氏清洗8h；

d最后，將制備好的多壁碳納米管在60℃真空條件下干燥24h。

在S4中，檢測(cè)陰離子/非離子型PAM中丙烯酰胺殘留量的預(yù)先處理具體過程如下：

a殼聚糖交聯(lián)多壁碳納米管作為基質(zhì)分散固相萃取吸附劑，對(duì)陰離子/非離子型PAM中丙烯酰胺殘留量的提取分離效果，將1.0g基質(zhì)分別與1.0g，2.0g，3.0g，4.0g的吸附劑混合，在研缽內(nèi)充分研磨5min后，將混合物移入空的UCT SPE柱中；

b然后用2.0mL的正己烷與2.0ml的甲醇/DDW＝40/60淋洗除雜，再選取不同組成和體積的洗脫液進(jìn)行洗脫；

c最后洗脫液收集后用氮吹至干，再用0.3mL的DDW復(fù)溶，0.22gm的濾頭過濾后進(jìn)高效液相色譜檢測(cè)，進(jìn)樣量為20微升。

每個(gè)小批號(hào)取1個(gè)樣進(jìn)行測(cè)試，測(cè)試結(jié)果見圖1。測(cè)得丙烯酰胺含量為0.01603mg/mL，代入公式AM％＝(0.01603×30×10/3.0×1000×0.92)×100％＝0.1742％；

其中AM含量計(jì)算公式：

AM％＝(C×V×a)/m×1000×n×100％；

式中：C—檢測(cè)的濃度，mg/mL；V—加入萃取劑的體積，mL；a—稀釋倍數(shù)；m—稱取PAM的質(zhì)量，g；n—固含量(一般不計(jì))。

最后應(yīng)說明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換,凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。