一種高效快速的紅細(xì)胞沉降劑及其制備方法，該發(fā)明涉及臨床檢驗(yàn)和醫(yī)學(xué)研究等大量使用人全血標(biāo)本的領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：現(xiàn)如今隨著手術(shù)輸血、特殊疾病治療、臨床檢測(cè)及科研工作等的不斷開展，血液標(biāo)本是迫切需要的，但一般使用僅限于去出紅細(xì)胞的血清或血漿，原因之一是紅細(xì)胞在諸多臨床診斷檢測(cè)的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生一定的干擾，其次是在某些層析檢測(cè)裝置中，尤其是免疫檢測(cè)，紅細(xì)胞極有可能是造成液體流動(dòng)障礙的主要因素，因?yàn)橐后w流動(dòng)對(duì)于檢測(cè)中發(fā)生的反應(yīng)很關(guān)鍵，故在多數(shù)情況下使用血液標(biāo)本均需要將紅細(xì)胞紅細(xì)胞從全血標(biāo)本中分離出來(lái)以備進(jìn)行下一步的檢測(cè)、化驗(yàn)、輸血或者科研工作等。因此，研發(fā)一種可高效快速分離血液標(biāo)本中紅細(xì)胞的沉降劑或分離液或其他分離裝置對(duì)臨床和科研具有重要意義。目前，用于分離血液樣本中紅細(xì)胞的方法也很多，但其中一部分往往都是采用離心手段，如美國(guó)專利6673629、4678757、6818180及公開專利申請(qǐng)2004/0202783、2006/0029923等多采用物理或化學(xué)方法分離全血中的紅細(xì)胞，容易產(chǎn)生凝血樣本，且分離不完全，特別是在層析免疫檢測(cè)中常常會(huì)導(dǎo)致一些非特異性結(jié)合或強(qiáng)背景干擾現(xiàn)象，且技術(shù)手段復(fù)雜，較為昂貴，不適于臨床診斷檢測(cè)或大量的科研活動(dòng)。此外還有一些分離材料不能有效獲得高質(zhì)量、存活率高且不含紅細(xì)胞的血液樣本，往往對(duì)檢測(cè)或臨床診斷造成了很大影響。而本發(fā)明研發(fā)出一種既能快速分離紅細(xì)胞，又能保證分離徹底，使得白細(xì)胞和血小板活性較高，且方便經(jīng)濟(jì)實(shí)用的沉降劑，加快了臨床診斷檢測(cè)、手術(shù)輸血及科研工作等應(yīng)用的步伐。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了一種高效快速的紅細(xì)胞沉降劑及其制備方法，該沉降劑為從全血標(biāo)本中分離紅細(xì)胞的優(yōu)選產(chǎn)品，其主要成分為羧甲基淀粉鈉和氯化鈉。淀粉原料本身含有大量的直鏈和支鏈結(jié)構(gòu)，具有較好的吸附性能，改性后的羧甲基淀粉可起到凝集紅細(xì)胞的作用。氯化鈉在其中以生理鹽水的形式存在，能夠穩(wěn)定血漿中的內(nèi)環(huán)境，保證血漿中其他成分的生理活性。將改性淀粉與氯化鈉結(jié)合制備成紅細(xì)胞沉降劑，充分達(dá)到了更加快速安全分離紅細(xì)胞的效果。一種高效快速的紅細(xì)胞沉降劑及其制備方法：1.制備改性淀粉：首先加入干燥過(guò)的適量馬鈴薯淀粉，利用Feton試劑（Fecl2·4H2O和30％H2O2濃度比為1：400～500）創(chuàng)設(shè)氧化還原反應(yīng)條件，再加入與以上淀粉質(zhì)量比為1:0.5～1.5的順丁烯二酸，在30～45℃下攪拌反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為5～10h，加入無(wú)水乙醇至沉淀全部析出，再洗滌至PH試紙不變色，過(guò)濾，烘干制備得到高取代度的改性淀粉；2.制備紅細(xì)胞沉降劑：取一定量的改性淀粉加入0.5～1.0mol/L的堿液中，充分溶解，再添加適量的氯化鈉制成5～9％的改性淀粉+0.9％氯化鈉的溶液，在25～40℃下攪拌30～60min，高壓蒸汽滅菌（121℃，20min）后得到羧甲基淀粉納/氯化鈉紅細(xì)胞沉降劑。本發(fā)明主要是將淀粉改性后形成羧甲基淀粉鈉鹽，并與氯化鈉共混形成羧甲基淀粉納/氯化鈉復(fù)合溶液，由于淀粉的結(jié)構(gòu)使得其具有一定的吸附性能，提高了血漿中紅細(xì)胞的濃度，加之制備成羧甲基淀粉后會(huì)促進(jìn)紅細(xì)胞相互電吸引，利于紅細(xì)胞聚集并形成層疊的輥筒形狀凝塊，由此加速了紅細(xì)胞的沉降，效果極其顯著，安全性高，能夠更加方便快捷地應(yīng)用于全血分離紅細(xì)胞。此外，該沉降劑制備的原料成本低廉，工藝路線簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)環(huán)保，易于規(guī)?；a(chǎn)。具體體實(shí)施方式現(xiàn)結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)闡述，下述實(shí)施例是說(shuō)明性的，不是限定性的，不能以下述說(shuō)明限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例1：改性淀粉的制備：1.稱取3g經(jīng)干燥過(guò)的馬鈴薯淀粉溶于20mL蒸餾水中，攪拌均勻后倒入100mL三頸瓶中，水浴恒溫30℃，攪拌器攪拌，再分別加入2.5g順丁烯二酸和58.7mg四水氯化亞鐵，然后滴加14mL30％雙氧水；2.充分?jǐn)嚢璺磻?yīng)5h后，將三頸瓶放冷至室溫，其中混合物倒入250mL燒杯中用無(wú)水乙醇使白色沉淀完全析出且洗滌至上層清液pH試紙不變色；3.靜置過(guò)濾沉淀，干燥得到粉末；紅細(xì)胞沉降劑的制備：取5g改性淀粉加入0.5mol/L的堿液中，充分溶解，再添加適量的氯化鈉制成5％的改性淀粉+0.9％氯化鈉的溶液，在25℃下攪拌30min，高壓蒸汽滅菌（121℃，20min）后得到羧甲基淀粉納/氯化鈉紅細(xì)胞沉降劑。實(shí)施例2：改性淀粉的制備：1.稱取6g經(jīng)干燥過(guò)的馬鈴薯淀粉溶于40mL蒸餾水中，攪拌均勻后倒入100mL三頸瓶中，水浴恒溫30℃，攪拌器攪拌，再分別加入5g順丁烯二酸和28mg四水氯化亞鐵，然后滴加8mL30％雙氧水；2.充分?jǐn)嚢璺磻?yīng)6.5h后，將三頸瓶放冷至室溫，其中混合物倒入250mL燒杯中用無(wú)水乙醇洗滌至白色沉淀完全析出且上層清液pH試紙不變色；3.靜置過(guò)濾沉淀，干燥得到粉末；紅細(xì)胞沉降劑的制備：取6g改性淀粉加入0.6mol/L的堿液中，充分溶解，再添加適量的氯化鈉制成6％的改性淀粉+0.9％氯化鈉的溶液，在25℃下攪拌40min，高壓蒸汽滅菌（121℃，20min）后得到羧甲基淀粉納/氯化鈉紅細(xì)胞沉降劑。實(shí)施例3：改性淀粉的制備：1.稱取7g經(jīng)干燥過(guò)的馬鈴薯淀粉溶于50mL蒸餾水中，攪拌均勻后倒入100mL三頸瓶中，水浴恒溫35℃，攪拌器攪拌，再分別加入5g順丁烯二酸和30mg四水氯化亞鐵，然后滴加5mL30％雙氧水；2.充分?jǐn)嚢璺磻?yīng)8h后，將三頸瓶放冷至室溫，其中混合物倒入250mL燒杯中用95％乙醇洗滌至白色沉淀完全析出且上層清液pH試紙不變色；3.靜置過(guò)濾沉淀，干燥得到粉末；紅細(xì)胞沉降劑的制備：取7g改性淀粉加入0.75mol/L的堿液中，充分溶解，再添加適量的氯化鈉制成7％的改性淀粉+0.9％氯化鈉的溶液，在30℃下攪拌40min，高壓蒸汽滅菌（121℃，20min）后得到羧甲基淀粉納/氯化鈉紅細(xì)胞沉降劑。實(shí)施例4：改性淀粉的制備：1.稱取5g經(jīng)干燥過(guò)的馬鈴薯淀粉溶于35mL蒸餾水中，攪拌均勻后倒入100mL三頸瓶中，水浴恒溫40℃，攪拌器攪拌，再分別加入5g順丁烯二酸和24mg四水氯化亞鐵，然后滴加7mL30％雙氧水；2.充分?jǐn)嚢璺磻?yīng)8.5h后，將三頸瓶放冷至室溫，其中混合物倒入250mL燒杯中用無(wú)水乙醇洗滌至白色沉淀完全析出且上層清液pH試紙不變色；3.靜置過(guò)濾沉淀，干燥得到粉末；紅細(xì)胞沉降劑的制備：取8g改性淀粉加入0.85mol/L的堿液中，充分溶解，再添加適量的氯化鈉制成8％的改性淀粉+0.9％氯化鈉的溶液，在35℃下攪拌50min，高壓蒸汽滅菌（121℃，20min）后得到羧甲基淀粉納/氯化鈉紅細(xì)胞沉降劑。實(shí)施例5：改性淀粉的制備：1.稱取5.5g經(jīng)干燥過(guò)的馬鈴薯淀粉溶于40mL蒸餾水中，攪拌均勻后倒入100mL三頸瓶中，水浴恒溫45℃，攪拌器攪拌，再分別加入5g順丁烯二酸和35mg四水氯化亞鐵，然后滴加10mL30％雙氧水；2.充分?jǐn)嚢璺磻?yīng)10h后，將三頸瓶放冷至室溫，其中混合物倒入250mL燒杯中用95％乙醇洗滌至白色沉淀完全析出且上層清液pH試紙不變色；3.靜置過(guò)濾沉淀，干燥得到粉末；紅細(xì)胞沉降劑的制備：取9g改性淀粉加入1.0mol/L的堿液中，充分溶解，再添加適量的氯化鈉制成9％的改性淀粉+0.9％氯化鈉的溶液，在40℃下攪拌60min，高壓蒸汽滅菌（121℃，20min）后得到羧甲基淀粉納/氯化鈉紅細(xì)胞沉降劑。實(shí)施例6：紅細(xì)胞沉降劑從全血中分離紅細(xì)胞效果驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)前先在紅細(xì)胞沉降劑中加入滅菌后的0.5％乙二胺四乙酸二鈉，并將全血與紅細(xì)胞沉降劑分別按照1:1.0、1:1.5、1:2.0、1:2.5的體積比加入到試管中，充分混勻后垂直置于試管架上，自然沉降后分別吸取上層細(xì)胞懸液，進(jìn)行白細(xì)胞及血小板計(jì)數(shù)，并按下式計(jì)算分離效果，結(jié)果見下表1；；表1不同配比下的紅細(xì)胞沉降劑的分離效果紅細(xì)胞沉降劑：血液次數(shù)（n）白細(xì)胞分離率（％）血小板分離率（％）1:1.08102.5104.31:1.5891.293.51:2.0873.470.11:2.5855.351.7由表1可見，紅細(xì)胞沉降劑與血液配比為1:1.0時(shí)，白細(xì)胞的分離率達(dá)102.5％，血小板的分離率為104.3％，說(shuō)明分離效果較好，該沉降劑對(duì)全血中紅細(xì)胞的分離性能較佳。對(duì)比以上實(shí)施例，發(fā)現(xiàn)不同配比和不同的反應(yīng)條件在制備改性淀粉和沉降劑的過(guò)程中產(chǎn)率、質(zhì)量及產(chǎn)物特征等有所不同，因此在具體實(shí)施過(guò)程中應(yīng)選擇合適的配比和條件。上述實(shí)施例均為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，任何其他的未背離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性操作或工藝方法與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化等，均應(yīng)為本發(fā)明的等效置換，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明高效快速紅細(xì)胞沉降劑，制備方法簡(jiǎn)便易行，分離效果佳，原料廣泛易得，經(jīng)濟(jì)安全，具有極高的臨床及科研應(yīng)用價(jià)值。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3