本發(fā)明涉及一種克倫特羅快速檢測(cè)方法，具體涉及一種基于脂質(zhì)體和血糖儀的克倫特羅快速檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
克倫特羅為腎上腺素類神經(jīng)興奮劑，常用于治療支氣管哮喘、慢性支氣管炎和肺氣腫等疾病?？藖鎏亓_能夠改變動(dòng)物體內(nèi)的代謝途徑，促進(jìn)肌肉，特別是骨骼肌中蛋白質(zhì)的合成，抑制脂肪的合成，加快生長(zhǎng)速度，提高瘦肉的含量?？藗愄亓_化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，高溫難以分解，難以代謝清除，會(huì)影響肌肉蛋白質(zhì)代謝、脂肪代謝及肝臟中的糖代謝，嚴(yán)重影響動(dòng)物正常的生長(zhǎng)發(fā)育。食用含有克倫特羅殘留的肉，會(huì)引起血壓升高、血管擴(kuò)張、心跳加快、呼吸加劇，產(chǎn)生惡心、嘔吐、頭暈、乏力和肌肉顫抖甚至不能站立等現(xiàn)象，給患者的精神、健康及正常生活造成嚴(yán)重危害。近年來現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)裝置由于能及時(shí)反應(yīng)檢測(cè)信息而被廣泛應(yīng)用于醫(yī)療和環(huán)境的快速實(shí)時(shí)檢測(cè)?，F(xiàn)有技術(shù)中檢測(cè)克倫特羅的方法有液相色譜法、比色法、表面增強(qiáng)拉曼散射法、電化學(xué)法、ELISA法、表面等離子體共振法等。這些方法中，有些靈敏度不高，有些需要依賴昂貴的儀器、專業(yè)的操作人員，有些過程很繁瑣。因此，發(fā)展一種簡(jiǎn)單、快速、廉價(jià)、高靈敏的克倫特羅檢測(cè)方法具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種克倫特羅快速檢測(cè)方法，本方法中的傳感器構(gòu)建過程和檢測(cè)過程不需要昂貴的儀器和試劑，操作簡(jiǎn)單，靈敏度很高。本發(fā)明通過以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：
本發(fā)明還提供了一種克倫特羅快速檢測(cè)方法，包括如下的步驟：
（1）在Fe3O4@Au表面修飾上三聚氰胺；
（2）在脂質(zhì)體合成的過程中原位包裹葡萄糖，同時(shí)通過衍生化反應(yīng)將三聚氰胺修飾到脂質(zhì)體的表面；
（3）將第一步和第二步中制得的材料混合，加入克倫特羅樣品，由于三聚氰胺與克倫特羅之間的作用，形成三明治的夾心結(jié)構(gòu)；
（4）第四步，加入表面活性劑，使脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)裂解，葡萄糖得以釋放，借助血糖儀檢測(cè)上清液完成定量檢測(cè)。
優(yōu)選的，具體包括如下的步驟：
1）將200 mL三聚氰胺溶液加入2 mL Fe3O4@Au中，攪拌均勻后，室溫孵育6 h；
2）15.9 mmol/L氫化大豆磷脂，6.4 mmol/L膽固醇，0.2 mmol/L衍生化處理的三聚氰胺依次溶解到氯仿、異丙醇醚和甲醇的混合溶劑中；然后將0.5 mL的5.0 mg/mL葡萄糖溶液加入5 mL上述合成脂質(zhì)體的混合物中，超聲5 min后，在氮?dú)鈿夥毡Ｗo(hù)下，以45oC的溫度蒸發(fā)溶劑，制得凝膠狀的懸浮液；用200 nm的聚碳酸酯過濾膜過濾，得到尺寸均一的脂質(zhì)體；未包裹的葡萄糖用純水透析1.5-5 h，制得包裹有葡萄糖的、同時(shí)表面修飾了三聚氰胺的功能化脂質(zhì)體；
3）將50 mL 步驟一中制得的Fe3O4@Au與pH 7.0的克倫特羅溶液在室溫條件下，孵育30 min，PBS溶液洗滌2次后，加入50 mL步驟二中制得的功能化脂質(zhì)體，繼續(xù)孵育30 min，PBS溶液洗滌2次；
4）在步驟三制得的溶液中加入20 mL表面活性劑，反應(yīng)15 min，葡萄糖從破裂的脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)中釋放；取3 mL上清液用于血糖儀的檢測(cè)。
優(yōu)選的，所述三聚氰胺溶液濃度為1 mmol/L；所述氫化大豆磷脂和膽固醇的濃度分別為15.9 mmol/L和6.4 mmol/L。
優(yōu)選的，所述氯仿、異丙醇醚和甲醇的混合溶劑中各組分的體積比為6：6：1。
優(yōu)選的，所述表面活性劑PBSTw-1X。
本發(fā)明旨在通過脂質(zhì)體原位包裹葡萄糖進(jìn)行信號(hào)放大，利用克倫特羅與三聚氰胺間的特殊作用，結(jié)合磁性富集的優(yōu)勢(shì)，構(gòu)建一種可以現(xiàn)場(chǎng)快速、高靈敏檢測(cè)克倫特羅的新型血糖儀平臺(tái)，其檢測(cè)限可低至5 pM；小分子物質(zhì)檢測(cè)使用了直觀性強(qiáng)、檢測(cè)靈敏度高的夾心法；傳感器的構(gòu)建過程中無需使用抗體等昂貴試劑，使用特定化學(xué)反應(yīng)代替抗體抗原之間的反應(yīng)，降低了傳感器構(gòu)建成本，同時(shí)保證了較高的特異性和選擇性。此外，本發(fā)明中磁珠的使用，簡(jiǎn)化了材料的洗滌過程，利用其富集作用，也在一定程度上提高檢測(cè)的靈敏度；利用脂質(zhì)體良好的生物相容性、高負(fù)載效率、尺寸可調(diào)和易功能化的特點(diǎn)，起到信號(hào)放大的效果。本發(fā)明中提供的檢測(cè)方法具有操作簡(jiǎn)單、成本低、靈敏度高等特點(diǎn)；同時(shí)傳感器的構(gòu)建和使用過程中不需要依賴大型儀器以及專業(yè)的操作人員，可廣泛用于資源匱乏的農(nóng)村以及發(fā)展中國(guó)家的現(xiàn)場(chǎng)定量檢測(cè)。
具體實(shí)施方式
下面通過具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)的說明，但是本發(fā)明的范圍不受這些實(shí)施例的限制。
實(shí)施例1
本實(shí)施例提供了一種克倫特羅快速檢測(cè)方法，包括如下的步驟：
1）將200 mL三聚氰胺溶液加入2 mL Fe3O4@Au中，攪拌均勻后，室溫孵育6 h；
2）15.9 mmol/L氫化大豆磷脂，6.4 mmol/L膽固醇，0.2 mmol/L衍生化處理的三聚氰胺依次溶解到氯仿、異丙醇醚和甲醇的混合溶劑中；然后將0.5 mL的5.0 mg/mL葡萄糖溶液加入5 mL上述合成脂質(zhì)體的混合物中，超聲5 min后，在氮?dú)鈿夥毡Ｗo(hù)下，以45oC的溫度蒸發(fā)溶劑，制得凝膠狀的懸浮液；用200 nm的聚碳酸酯過濾膜過濾，得到尺寸均一的脂質(zhì)體；未包裹的葡萄糖用純水透析1.5-5 h，制得包裹有葡萄糖的、同時(shí)表面修飾了三聚氰胺的功能化脂質(zhì)體；
3）將50 mL 步驟一中制得的Fe3O4@Au與pH 7.0的克倫特羅溶液在室溫條件下，孵育30 min，PBS溶液洗滌2次后，加入50 mL步驟二中制得的功能化脂質(zhì)體，繼續(xù)孵育30 min，PBS溶液洗滌2次；
4）在步驟三中制得的溶液中加入20 mL表面活性劑，反應(yīng)15 min，葡萄糖從破裂的脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)中釋放；取3 mL上清液用于血糖儀的檢測(cè)。
實(shí)施例2
本實(shí)施例提供了一種克倫特羅快速檢測(cè)方法，包括如下的步驟：
1）將200 mL三聚氰胺溶液加入2 mL Fe3O4@Au中，攪拌均勻后，室溫孵育6 h；
2）15.9 mmol/L氫化大豆磷脂，6.4 mmol/L膽固醇，0.2 mmol/L衍生化處理的三聚氰胺依次溶解到體積比6：6：1氯仿、異丙醇醚和甲醇的混合溶劑中；然后將0.5 mL的5.0 mg/mL葡萄糖溶液加入5 mL上述合成脂質(zhì)體的混合物中，超聲5 min后，在氮?dú)鈿夥毡Ｗo(hù)下，以45oC的溫度蒸發(fā)溶劑，制得凝膠狀的懸浮液；用200 nm的聚碳酸酯過濾膜過濾，得到尺寸均一的脂質(zhì)體；未包裹的葡萄糖用純水透析1.5-5 h，制得包裹有葡萄糖的、同時(shí)表面修飾了三聚氰胺的功能化脂質(zhì)體；
3）將50 mL 步驟一中制得的Fe3O4@Au與pH 7.0的克倫特羅溶液在室溫條件下，孵育30 min，PBS溶液洗滌2次后，加入50 mL步驟二中制得的功能化脂質(zhì)體，繼續(xù)孵育30 min，PBS溶液洗滌2次；
4）在步驟三中制得的溶液中加入20 mL表面活性劑，反應(yīng)15 min，葡萄糖從破裂的脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)中釋放；取3 mL上清液用于血糖儀的檢測(cè)。
需要指出的是，以上的兩個(gè)實(shí)施例只是對(duì)本發(fā)明的解釋，并非是對(duì)發(fā)明的限定，在不違背本發(fā)明的精神的情況下，本發(fā)明可以作任何形式的修改，例如簡(jiǎn)單的加熱系統(tǒng)的更換或者反應(yīng)釜的變化都應(yīng)在本發(fā)明技術(shù)方案保護(hù)范圍之內(nèi)。