本發(fā)明屬于中藥制劑分析技術領域，具體涉及一種補腎填精口服液的薄層色譜鑒別方法。

背景技術：

補腎填精口服液由人參、鹿茸(酥)、牛鞭(酥)、狗鞭(酥)、黃芪、當歸、肉蓯蓉、陽起石、枸杞子、杜仲、黑順片、菟絲子、熟地黃、淫羊藿、韭菜子等15味藥材制成，具有溫腎壯陽的功效，用于腎陽虧虛，腰膝痿軟或冷痛，手足不溫，陽事不舉，精冷，精神萎靡或乏力等。當歸是其重要藥味之一，來源于傘形科植物當歸Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根，具有補血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤腸通便的功效?，F(xiàn)代藥理研究表明，其主要物質(zhì)基礎為揮發(fā)性成分和有機酸類物質(zhì)。

不同的中藥復方在制劑過程中，各味藥經(jīng)配伍和不同制劑工藝所產(chǎn)生化學變化的不可預知性直接導致其物質(zhì)基礎的復雜性和不穩(wěn)定性，建立快速、簡單的鑒別方法，對中藥復方及其制劑有著重要意義。目前，補腎填精口服液的國家藥品標準中并無對當歸藥材進行質(zhì)量控制。但在升國標前的地方標準(標準編號：WS-10824(ZD-0824)-2002)中規(guī)定，當歸的鑒別采用薄層色譜法，具體方法如下：取本品50ml，加醋酸乙酯-甲酸(95∶5)混合溶液振搖提取2次，每次40ml，合并提取液，蒸干，殘渣加無水乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取阿魏酸對照品，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-氯仿-冰醋酸(6∶5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

上述薄層色譜鑒別方法通過鑒別處方中當歸藥材的有效成分阿魏酸來判斷補腎填精口服液的真?zhèn)?，存在以下問題：(1)供試品溶液的制備需用到兩種提取溶劑，三種展開溶劑，檢驗成本較高。(2)本處方中除當歸外，枸杞子也含有較多的阿魏酸，導致陰性干擾嚴重。(3)展開劑中含有苯，對實驗人員及環(huán)境造成很大的損害。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種改進的補腎填精口服液中當歸藥材的鑒別方法，本方法中供試品溶液制備簡單，降低檢驗成本，排除陰性干擾，對實驗人員和環(huán)境較為友好。本發(fā)明技術方案如下：

補腎填精口服液中當歸藥材的鑒別方法包括如下步驟：

(1)供試品溶液的制備：取補腎填精口服液30-40ml，加等量的石油醚(30～60℃)，振搖提取2次，合并石油醚液，揮干，殘渣加乙醇1-2ml使溶解，作為供試品溶液；

(2)對照藥材溶液的制備：取當歸對照藥材0.5-1g，加步驟(1)中等量的石油醚(30～60℃)，超聲提取30-60分鐘，濾過，濾液濃縮至1-2ml，作為對照藥材溶液；

(3)陰性樣品溶液的制備：按補腎填精口服液處方稱取除當歸外的其他藥材，制成缺當歸的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成缺當歸的陰性樣品溶液；

(4)展開及檢視：吸取步驟(1)、(2)、(3)所制得的供試品溶液、對照藥材溶液、陰性樣品溶液等體積量，各吸取5-20μl，分別點于同一薄層板上，以體積比為1-3:1的環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視。

本發(fā)明所述當歸成分的鑒別方法優(yōu)選為包括如下步驟：

(1)供試品溶液的制備：取補腎填精口服液30ml，加30ml石油醚(30～60℃)，振搖提取2次，合并石油醚液，揮干，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；

(2)對照藥材溶液的制備：取當歸對照藥材0.5g，加石油醚(30～60℃)30ml，超聲提取30分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為對照藥材溶液；

(3)陰性樣品溶液的制備：按補腎填精口服液處方稱取除當歸外的其他藥材，制成缺當歸的陰性樣品，按步驟(1)供試品溶液制備方法制成缺當歸的陰性樣品溶液；

(4)展開及檢視：吸取步驟(1)、(2)、(3)所制得的供試品溶液、對照藥材溶液、陰性樣品溶液各10μl，分別點于同一薄層板上，以體積比為1-3:1的環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視。

本發(fā)明所述薄層板優(yōu)選為硅膠G薄層板或硅膠GF₂₅₄薄層板。

本發(fā)明所述展開劑環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶液中環(huán)己烷-乙酸乙酯的體積比優(yōu)選為2-3:1，進一步優(yōu)選為2:1。

本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明建立了一種改進的補腎填精口服液中當歸藥材的鑒別方法，與升國標前的補腎填精口服液地方標準(標準編號：WS-10824(ZD-0824)-2002)提供的當歸藥材的鑒別方法相比，具有如下優(yōu)勢：(1)供試品溶液的制備僅用到一種溶劑，展開溶劑由三種減少為兩種，減少了供試品和試劑的用量，降低了檢驗成本。(2)將阿魏酸對照品改為當歸對照藥材，使用本發(fā)明的展開體系及檢視手段，能夠排除陰性的干擾，大大增強了處方中當歸藥材鑒別的專屬性。(3)實驗全過程使用毒性較低的溶劑，保證了實驗人員的安全，保護了環(huán)境。(4)本方法具有良好的重復性和穩(wěn)定性，適用于補腎填精口服液中當歸藥材的薄層色譜鑒別。

另外，本處方制劑工藝復雜，人參鹿茸醇提后，藥渣與其它味藥材經(jīng)水提，醇沉后，復方中化學成分復雜，當歸揮發(fā)性成分如藁本內(nèi)酯已無保留，有機酸類物質(zhì)如阿魏酸等，亦為本處方另一主要藥味枸杞子的物質(zhì)基礎，再加上其它藥物成分，造成陰性干擾嚴重；因此本 發(fā)明采用適宜的提取溶劑、展開劑等，并具有較好的重復性和穩(wěn)定性的鑒別方法有助于提高補腎填精口服液的質(zhì)量控制水平。

附圖說明

圖1是實施例1當歸薄層鑒別圖，其中1-陰性樣品；2-實施例1供試品溶液樣品；3-當歸對照藥材樣品。

圖2是對比例1當歸薄層鑒別圖，其中1-陰性樣品；2-對比例1供試品溶液樣品；3-當歸對照藥材樣品。

圖3是對比例2當歸薄層鑒別圖，其中1-陰性樣品；2-對比例2供試品溶液樣品；3-當歸對照藥材樣品。

圖4是對比例3當歸薄層鑒別圖，其中1-陰性樣品；2-當歸對照藥材樣品；3-對比例3供試品溶液樣品。

圖5是實施例2當歸薄層鑒別圖，其中1-陰性樣品，2-實施例2供試品溶液①，3-實施例2供試品溶液②，4-對照藥材樣品。

具體實施方式

實施例1

一種補腎填精口服液中當歸成分的鑒別包括如下步驟：

(1)供試品溶液的制備：取補腎填精口服液35ml，加35ml石油醚(30～60℃)，振搖提取2次，合并石油醚液，揮干，殘渣加乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液；

(2)對照藥材溶液的制備：取當歸對照藥材0.6g，加石油醚(30～60℃)35ml，超聲提取35分鐘，濾過，濾液濃縮至2ml，作為對照藥材溶液；

(3)陰性樣品溶液的制備：按補腎填精口服液處方稱取除當歸外的其他藥材，制成缺當歸的陰性樣品，按步驟(1)供試品溶液制備方法制成缺當歸的陰性樣品溶液；

(4)展開及檢視：吸取步驟(1)、(2)、(3)所制得的供試品溶液、對照藥材溶液、陰性樣品溶液各5μl，分別點于同一薄層板上，以體積比為3:1的環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視。

鑒別結果為：供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性樣品無干擾。

實施例2

一種補腎填精口服液中當歸成分的鑒別包括如下步驟：

(1)供試品溶液的制備：取補腎填精口服液30ml，加30ml石油醚(30～60℃)，振搖 提取2次，合并石油醚液，揮干，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；

(2)對照藥材溶液的制備：取當歸對照藥材0.5g，加石油醚(30～60℃)30ml，超聲提取30分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為對照藥材溶液；

(3)陰性樣品溶液的制備：按補腎填精口服液處方稱取除當歸外的其他藥材，制成缺當歸的陰性樣品，按步驟(1)供試品溶液制備方法制成缺當歸的陰性樣品溶液；

(4)展開及檢視：吸取步驟(1)、(2)、(3)所制得的供試品溶液、對照藥材溶液、陰性樣品溶液各10μl，分別點于同一薄層板上，以體積比為2:1的環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視。

鑒別結果為：3個供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，且斑點清晰、無拖尾現(xiàn)象，陰性樣品無干擾。

對比例1展開劑為體積比10:1的三氯甲烷-甲醇混合溶液，其余同實施例1。鑒別結果為：能較好分離目標斑點，但斑點Rf值偏高。

對比例2展開劑為體積比3:2:1的乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸混合溶液，其余同實施例1。鑒別結果為：能較好分離目標斑點，但斑點不圓潤且Rf值偏高。

對比例3展開劑為體積比為9:1的環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶液，其余同實施例1。鑒別結果為：供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，無相同顏色的熒光斑點，不能鑒別補腎填精口服液中的當歸藥材。