一種古代絲織品的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種古代絲織品的檢測方法，采用間接酶聯免疫的方法對絲織品絲肽成分進行了檢測，即將絲織品文物洗脫液包被到酶標板上，然后添加兔抗絲素蛋白抗體與抗原結合形成抗原抗體復合物。洗滌后加入堿性磷酸酯酶標山羊抗兔IgG（H+L）抗體，形成抗體-抗原-抗體復合物，洗滌加入四甲基聯苯胺溶液，底物被酶催化為有色產物，根據產物顏色變化的深淺可進行定性分析。由于酶的催化效率極高，間接方法了免疫反應的結果，使測試具有較高的靈敏度。
【專利說明】 一種古代絲織品的檢測方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于古代絲織品的檢測領域，尤其涉及一種古代絲織品的檢測方法。

【背景技術】
[0002]絲織品由蠶絲編織而成，是中華民族智慧的結晶，是我國的寶貴遺產。但是蠶絲作為一種有機高分子材料，長期埋葬于墓葬環(huán)境中，必然會受到氧氣、水、微生物等因素的影響而發(fā)生降解，以至于外觀嚴重受到破壞而腐朽，肉眼根本無法識別。常規(guī)的檢測方法有紅外光譜分析，氨基酸分析，液相色譜分析等，但是由于糟朽絲織品雜質含量多，譜圖解析困難，耗時長，靈敏度低，并且不能排除其它蛋白質的干擾，給研究工作者帶來了一定的困難。


【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明要解決的技術問題是:針對上述現有技術存在的問題提供一種靈敏度高、簡單高效的古代絲織品的檢測方法。
[0004]為此采用如下的技術方案:一種古代絲織品的檢測方法，其特征在于采用如下步驟:
A)溶液的配制=PBS7.4 緩沖液配制=KCl 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g, Na2HPO41.42g，用800ml蒸餾水溶解并定容至1000ml，調節(jié)PH至7.4 ；PBS 9.6緩沖溶液配制=Na2CO3
0.15g，NaHCO3 0.29g，用800ml蒸餾水溶解并定容至1000ml，調節(jié)PH至9.6 ;
B)將0.0Olg-0.0lg絲素蛋白粉和0.0lg-0.1g文物樣分別溶解于1-1OOOml PH為9.6的PBS緩沖溶液中，混合攪拌均勻，靜置，分別取50-120 μ I上清液加入到酶標板中，形成陽性對照和實驗對照；取50-120 μ I PH為7.4的PBS緩沖溶液作為空白對照用；陰性對照為不加兔抗絲素蛋白一抗，其包被液和陽性對照設為一樣；然后將各陰性對照，陽性對照，實驗組各放置于4°C冰箱中12h ；
C)各孔中加入質量濃度1%牛血清白蛋白溶液100-300μ I ;37°C下封閉Uh ;然后將溶液吸出，用PH為7.4的PBS緩沖溶液洗滌3次，每次3min ；
D)取用質量濃度1%牛血清白蛋白溶液稀釋1000-12000倍的兔抗絲素蛋白抗體50-120 μ I,加入到酶標板中，保鮮膜封板，37°C下孵育Ih ;然后將溶液吸出，用PH為7.4的PBS緩沖溶液洗滌5次，每次3min ；
E)各孔中加入3000-10000倍稀釋的磷酸酯酶山羊抗兔IgG(H+L)抗體50-120 μ I ;37°C下孵育Ih ;然后將溶液吸出，用PH為7.4的PBS緩沖溶液洗滌5次，每次3min ；
F)各孔內加底物液1%的四甲基聯苯胺溶液100μ 1，置黑暗處使其反應1min ；
G)各孔內加Imol/L H2SO4溶液50-120 μ 1，終止反應；
H)將酶標板置于酶標儀中，讀取λ=450nm處的吸光度數值；比較陽性對照，陰性對照與實驗組測得的OD值；
若OD實驗組/OD陰性對照> 2.1，則證明所檢測的樣品呈現陽性，
若OD實驗組/OD_對照彡2.1，則證明所測得的樣品呈現陰性。
[0005]本發(fā)明的有益效果是:1本發(fā)明采用間接酶聯免疫的方法對絲織品中的絲素蛋白成分進行檢測，一方面靈敏度高、操作簡單。另一方面，避免了其它蛋白的干擾，特異性強。2與現有技術相比，本發(fā)明所采取的方法成本低、檢測簡單、快捷。

【具體實施方式】
[0006]本發(fā)明采用間接酶聯免疫的方法對絲織品絲肽成分進行了檢測，即將絲織品文物洗脫液包被到酶標板上，然后添加兔抗絲素蛋白抗體與抗原結合形成抗原抗體復合物。洗滌后加入堿性磷酸酯酶標山羊抗兔IgG (H+L)抗體，形成抗體-抗原-抗體復合物，洗滌加入四甲基聯苯胺溶液，底物被酶催化為有色產物，根據產物顏色變化的深淺可進行定性分析。由于酶的催化效率極高，間接方法了免疫反應的結果，使測試具有較高的靈敏度。
[0007]實施例1具體實施步驟如下:
A)溶液的配制=PBS7.4 緩沖液配制=KCl 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g, Na2HPO41.42g，用800ml蒸餾水溶解并定容至1000ml，調節(jié)PH至7.4 ；PBS 9.6緩沖溶液配制=Na2CO3
0.15g，NaHCO3 0.29g，用800ml蒸餾水溶解并定容至1000ml，調節(jié)PH至9.6 ;
B)將0.0Olg絲素蛋白粉和0.0lg文物樣分別溶解于1ml PH為9.6的PBS緩沖溶液中，混合攪拌均勻，靜置，分別取50μ I上清液加入到酶標板中，形成陽性對照和實驗對照；取50 μ I PH為7.4的PBS緩沖溶液作為空白對照用；陰性對照為不加兔抗絲素蛋白一抗，其包被液和陽性對照設為一樣；然后將各陰性對照，陽性對照，實驗組各放置于4°C冰箱中12h ；
C)各孔中加入質量濃度1%牛血清白蛋白溶液100μ I ;37°C下封閉Ih ;然后將溶液吸出，用PH為7.4的PBS緩沖溶液洗滌3次，每次3min ；
D)取用質量濃度1%牛血清白蛋白溶液稀釋1000倍的兔抗絲素蛋白抗體50μ1，加入到酶標板中，保鮮膜封板，37°C下孵育Ih ;然后將溶液吸出，用PH為7.4的PBS緩沖溶液洗漆5次,每次3min ；
E)各孔中加入3000倍稀釋的磷酸酯酶山羊抗兔IgG(肝1^抗體5(^1 ;37°C下孵育Ih ;然后將溶液吸出，用PH為7.4的PBS緩沖溶液洗滌5次，每次3min ；
F)各孔內加底物液1%的四甲基聯苯胺溶液100μ 1，置黑暗處使其反應1min ；
G)各孔內加Imol/L H2SO4溶液50 μ 1，終止反應；
H)將酶標板置于酶標儀中，讀取λ=450nm處的吸光度數值；比較陽性對照，陰性對照與實驗組測得的OD值；
若OD實驗組/OD陰性對照> 2.1，則證明所檢測的樣品呈現陽性，
若OD實驗組/OD_對照彡2.1，則證明所測得的樣品呈現陰性。
[0008]實施例2具體實施步驟如下:
A)溶液的配制=PBS7.4 緩沖液配制=KCl 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g, Na2HPO4
1.42g，用800ml蒸餾水溶解并定容至1000ml，調節(jié)PH至7.4 ；PBS 9.6緩沖溶液配制=Na2CO3
0.15g，NaHCO3 0.29g，用800ml蒸餾水溶解并定容至1000ml，調節(jié)PH至9.6 ;
B)將0.005g絲素蛋白粉和0.05g文物樣分別溶解于500ml PH為9.6的PBS緩沖溶液中，混合攪拌均勻，靜置，分別取80μ I上清液加入到酶標板中，形成陽性對照和實驗對照；取80 μ I PH為7.4的PBS緩沖溶液作為空白對照用；陰性對照為不加兔抗絲素蛋白一抗，其包被液和陽性對照設為一樣；然后將各陰性對照，陽性對照，實驗組各放置于4°C冰箱中12h ；
C)各孔中加入質量濃度1%牛血清白蛋白溶液200μ I ;37°C下封閉1.5h ;然后將溶液吸出，用PH為7.4的PBS緩沖溶液洗滌3次，每次3min ；
D)取用質量濃度1%牛血清白蛋白溶液稀釋7000倍的兔抗絲素蛋白抗體80μ 1，加入到酶標板中，保鮮膜封板，37°C下孵育Ih ;然后將溶液吸出，用PH為7.4的PBS緩沖溶液洗漆5次,每次3min ；
E)各孔中加入8000倍稀釋的磷酸酯酶山羊抗兔IgG(肝1^抗體8(^1 ;37°C下孵育Ih ;然后將溶液吸出，用PH為7.4的PBS緩沖溶液洗滌5次，每次3min ；
F)各孔內加底物液1%的四甲基聯苯胺溶液100μ 1，置黑暗處使其反應1min ；
G)各孔內加Imol/L H2SO4溶液80μ 1，終止反應；
H)將酶標板置于酶標儀中，讀取λ=450nm處的吸光度數值；比較陽性對照，陰性對照與實驗組測得的OD值；
若OD實驗組/OD陰性對照> 2.1，則證明所檢測的樣品呈現陽性，
若OD實驗組/OD_對照彡2.1，則證明所測得的樣品呈現陰性。
[0009]實施例3具體實施步驟如下:
A)溶液的配制=PBS7.4 緩沖液配制=KCl 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g, Na2HPO4
1.42g，用800ml蒸餾水溶解并定容至1000ml，調節(jié)PH至7.4 ；PBS 9.6緩沖溶液配制=Na2CO3
0.15g，NaHCO3 0.29g，用800ml蒸餾水溶解并定容至1000ml，調節(jié)PH至9.6 ;
B)將0.0lg絲素蛋白粉和0.1g文物樣分別溶解于1000ml PH為9.6的PBS緩沖溶液中，混合攪拌均勻，靜置，分別取120μ I上清液加入到酶標板中，形成陽性對照和實驗對照；取12011 I PH為7.4的PBS緩沖溶液作為空白對照用；陰性對照為不加兔抗絲素蛋白一抗，其包被液和陽性對照設為一樣；然后將各陰性對照，陽性對照，實驗組各放置于4°C冰箱中12h ;
C)各孔中加入質量濃度1%牛血清白蛋白溶液300μI ;37°C下封閉2h ;然后將溶液吸出，用PH為7.4的PBS緩沖溶液洗滌3次，每次3min ；
D)取用質量濃度1%牛血清白蛋白溶液稀釋12000倍的兔抗絲素蛋白抗體120μ 1，加入到酶標板中，保鮮膜封板，37°C下孵育Ih ;然后將溶液吸出，用PH為7.4的PBS緩沖溶液洗漆5次，每次3min ；
E)各孔中加入10000倍稀釋的磷酸酯酶山羊抗兔IgG(H+L)抗體120 μ I ;37°C下孵育Ih ;然后將溶液吸出，用PH為7.4的PBS緩沖溶液洗滌5次，每次3min ；
F)各孔內加底物液1%的四甲基聯苯胺溶液100μ 1，置黑暗處使其反應1min ；
G)各孔內加Imol/L H2SO4溶液120 μ 1，終止反應；
H)將酶標板置于酶標儀中，讀取λ=450nm處的吸光度數值；比較陽性對照，陰性對照與實驗組測得的OD值；
若OD實驗組/OD陰性對照> 2.1，則證明所檢測的樣品呈現陽性，
若OD實驗組/OD_對照彡2.1，則證明所測得的樣品呈現陰性。
【權利要求】
1.一種古代絲織品的檢測方法，其特征在于采用如下步驟: A)溶液的配制:PBS7.4 緩沖液配制:KC1 0.2g，KH2P04 0.27g，NaCl 8.0g, Na2HP04.1.42g，用800ml蒸餾水溶解并定容至1000ml，調節(jié)PH至7.4 ；PBS 9.6緩沖溶液配制:Na2C03.0.15g，NaHC03 0.29g，用800ml蒸餾水溶解并定容至1000ml，調節(jié)PH至9.6 ; B)將0.001g-0.0lg絲素蛋白粉和0.01g-0.lg文物樣分別溶解于10-1000ml PH為9.6的PBS緩沖溶液中，混合攪拌均勻，靜置，分別取50-120 μ 1上清液加入到酶標板中，形成陽性對照和實驗對照；取50-120 μ 1 PH為7.4的PBS緩沖溶液作為空白對照用；陰性對照為不加兔抗絲素蛋白一抗，其包被液和陽性對照設為一樣；然后將各陰性對照，陽性對照，實驗組各放置于4°C冰箱中12h ； C)各孔中加入質量濃度1%牛血清白蛋白溶液100-300μ 1 ;37°C下封閉1-? ;然后將溶液吸出，用PH為7.4的PBS緩沖溶液洗滌3次，每次3min ； D)取用質量濃度1%牛血清白蛋白溶液稀釋1000-12000倍的兔抗絲素蛋白抗體50-120 μ 1,加入到酶標板中，保鮮膜封板,37°C下孵育lh ;然后將溶液吸出，用PH為7.4的PBS緩沖溶液洗滌5次，每次3min ； E)各孔中加入3000-10000倍稀釋的磷酸酯酶山羊抗兔IgG(H+L)抗體50-120 μ 1 ;37°C下孵育lh ;然后將溶液吸出，用PH為7.4的PBS緩沖溶液洗滌5次，每次3min ； F)各孔內加底物液1%的四甲基聯苯胺溶液100μ 1，置黑暗處使其反應lOmin ； G)各孔內加1mol/L H2S04溶液50-120 μ 1，終止反應； Η)將酶標板置于酶標儀中，讀取λ =450nm處的吸光度數值；比較陽性對照，陰性對照與實驗組測得的0D值； 若0D實驗組/0D陰性對照> 2.1，則證明所檢測的樣品呈現陽性， 若0D實驗組/0D_對照彡2.1，則證明所測得的樣品呈現陰性。
【文檔編號】G01N33/531GK104459163SQ201410848078
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月31日 優(yōu)先權日:2014年12月31日
【發(fā)明者】劉苗苗, 楊穎超, 王秉 申請人:浙江理工大學