多用途免疫組化筆在細(xì)胞爬片免疫組織化學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種多用途免疫組化筆在細(xì)胞爬片免疫組織化學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用，將細(xì)胞接種于載玻片式培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后進(jìn)行免疫細(xì)胞組織化學(xué)染色鑒定；所述載玻片式培養(yǎng)皿設(shè)有培養(yǎng)皿體和皿蓋，培養(yǎng)皿體型號(hào)分單孔室和多孔室兩種；各孔室面積大于載玻片，皿體底直接作為載玻片使用，皿體底外側(cè)面設(shè)有與載玻片尺寸對(duì)應(yīng)的長(zhǎng)方形框痕線凹溝，在外力作用下可將皿體的底部沿長(zhǎng)方形框痕線凹溝脫出。本發(fā)明適用于玻璃切片的各種免疫組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)，可顯著減少抗體和試劑用量，避免染色時(shí)液體流淌和擴(kuò)散，提高操作速度。尤其可適用于細(xì)胞爬片或細(xì)胞涂片的實(shí)驗(yàn)研究中進(jìn)行大規(guī)模，大樣本多組別的免疫組化染色。
【專利說(shuō)明】多用途免疫組化筆在細(xì)胞爬片免疫組織化學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種免疫組化筆在細(xì)胞爬片免疫組織化學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]用特異性抗體對(duì)組織切片及其細(xì)胞爬片中某些化學(xué)成分分布的標(biāo)記及其含量進(jìn)行組織和細(xì)胞原位定性、定位或定量研究，這種技術(shù)稱為免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistry)技術(shù)。
[0003]通常細(xì)胞爬片免疫組織化學(xué)檢測(cè)是對(duì)單張細(xì)胞爬片一片一片進(jìn)行染色操作，一般只能對(duì)單樣本做一種抗體，蛋白及基因的檢測(cè)，難以勝任大規(guī)模，多樣本及多組別的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)科學(xué)研究。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種適用于各種免疫組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)，可顯著減少抗體和試劑用量，避免染色時(shí)液體流淌和擴(kuò)散，提高操作速度的多用途免疫組化筆在細(xì)胞爬片免疫組織化學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:
一種多用途免疫組化筆在細(xì)胞爬片免疫組織化學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用，其特征是:將細(xì)胞接種于載玻片式培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后進(jìn)行免疫細(xì)胞組織化學(xué)染色鑒定；所述載玻片式培養(yǎng)皿設(shè)有培養(yǎng)皿體和皿蓋，培養(yǎng)皿體型號(hào)分單孔室和多孔室兩種；各孔室面積大于載玻片，皿體底直接作為載玻片使用，皿體底外側(cè)面設(shè)有與載玻片尺寸對(duì)應(yīng)的長(zhǎng)方形框痕線凹溝，在外力作用下可將皿體的底部沿長(zhǎng)方形框痕線凹溝脫出；
所述免疫細(xì)胞組織化學(xué)染色鑒定依次包括下列步驟:
(1)用冰丙酮固定15min或4%多聚甲醒固定；
(2)流水漂洗，用PBS清洗標(biāo)本3次；
(3)用0.5%Triton X-100 孵育 10 min ；
(4)0.3%H202 孵育 10 min ；
(5)用PBS清洗標(biāo)本3次后,熱風(fēng)充分干燥；
(7)用免疫組化筆將油墨在細(xì)胞爬片上畫分2-20個(gè)分隔染色區(qū)；
(8)空氣充分干燥；
(9)用正常二抗血清封閉孵育10min ；
(10)在各細(xì)胞染色區(qū)分別滴加小鼠或兔抗第一抗體孵育30?60min ；
(11)吸除各細(xì)胞染色區(qū)液體并用PBS清洗標(biāo)本3次；
(12)滴加酶聯(lián)小鼠或兔第二抗體工作液孵育30?60min ；
(13)PBS清洗標(biāo)本3次；
(14)DAB顯色，避光，鏡下觀察；
(15)蒸餾水洗； (16)蘇木素襯染；
(17)鹽酸酒精分化，自來(lái)水洗；
(18)水性封固劑封片。
[0006]所述油墨由下列重量百分比的組分混合組成:松香2?6%，蜂蠟18?26%，石蠟3?8%，異丙醚5?10%，二氯甲烷5?10%，汽油25?30%，二硫化碳12?17%，四氯化碳2?6%，氯仿2?6%，環(huán)已酮2?6% ;上述各組分用量之和為100% ；
或所述油墨由下列組分混合組成:聚苯乙烯2?4%，DMF9?11%，THF9?11%，松香2?4%，蜂蠟13?16%，石蠟2?4%，異丙醚4?6%，二氯甲烷4?6%，汽油18?22%，二硫化碳9?11%，四氯化碳9?11%，氯仿I?2%，環(huán)已酮I?2%，煤油2?4%，松節(jié)油I?2% ;上述各組分用量之和為100% ；或所述油墨由下列組分混合組成:硬脂酸30?36%，苯15?20%，46°C石蠟9?15%，異丙醚7?11%，二硫化碳15?20%，氯仿15?20%;上述各組分用量之和為100%。
[0007]在外力作用下可將皿體的底部沿長(zhǎng)方形框痕線凹溝脫出前，先用銳利刀具沿線凹溝劃、勾，然后在皿底面加用外力可將皿體的單孔槽底脫出。
[0008]所述免疫組化筆包括筆筒，筆筒內(nèi)設(shè)置海綿樣的圓柱體筆芯，筆筒內(nèi)灌注有油墨，海綿樣的圓柱體筆芯前端設(shè)置木質(zhì)筆芯；海綿樣的圓柱體筆芯放置在筆筒中，筆筒為長(zhǎng)方體或圓柱體，筆筒口外側(cè)有螺紋與內(nèi)筆帽的內(nèi)螺紋匹配吻合；筆筒中放置不銹鋼珠一個(gè)，搖晃筆筒時(shí)作攪和油墨的作用；所述內(nèi)筆帽起封閉筆筒口，防止油墨揮發(fā)保持其液相狀態(tài)和聯(lián)接外筆帽的作用，其內(nèi)表面有與筆筒口吻合的內(nèi)螺紋，可旋蓋筆筒口，內(nèi)筆帽的外表面設(shè)有與外筆帽內(nèi)口緣匹配吻合的鎖口凹，圓柱體筆芯末端一側(cè)設(shè)有油墨刷；外筆帽的內(nèi)口緣周設(shè)有鎖口凹，與內(nèi)筆帽外口緣匹配吻合，起封閉內(nèi)筆帽和固定內(nèi)筆帽為一體開(kāi)啟筆筒口，并起提出油墨刷的作用。
[0009]多孔室培養(yǎng)皿的一個(gè)角呈斜面形式，方便方位標(biāo)識(shí)；培養(yǎng)皿蓋的一個(gè)角呈與培養(yǎng)皿呈斜面的角配合的斜面形式；培養(yǎng)皿蓋與培養(yǎng)皿吻合口周緣的交錯(cuò)深度> 10mm。
[0010]本發(fā)明有利于免疫組化的染色，染色步驟與常規(guī)免疫組織化學(xué)相似，但樣本處理的溫度，時(shí)間，試劑濃度等標(biāo)準(zhǔn)一致，標(biāo)記的一抗種類多，可比性和可靠性均顯著提高！處理的樣本數(shù)量多，高效快捷。PBS清洗、血清孵育、標(biāo)記二抗，襯染(蘇木素)等不需要分隔的實(shí)驗(yàn)操作可同步進(jìn)行處理，方便快捷，實(shí)驗(yàn)條件標(biāo)準(zhǔn)一致且易控制。采用大面積細(xì)胞爬片進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)其處理的溫度，時(shí)間，試劑濃度等標(biāo)準(zhǔn)一致，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可比性和可靠性均顯著提高。細(xì)胞培養(yǎng)皿孔槽的數(shù)量減少，操作方便，高效快捷。特定的油墨配方充分保證了工作效果。適用于各種免疫組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)，包括；石蠟組織切片，冰凍組織切片和細(xì)胞爬片的免疫組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)，可顯著減少抗體和試劑用量，避免染色時(shí)液體流淌和擴(kuò)散，提高操作速度；尤其可適用于細(xì)胞爬片或細(xì)胞涂片的實(shí)驗(yàn)研究中進(jìn)行大規(guī)模，大樣本多組別的的免疫組化染色。
[0011]該組化筆適用于玻璃為載體的組織切片和聚苯乙烯材質(zhì)載體的細(xì)胞爬片上進(jìn)行各種免疫組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)，可顯著減少抗體和試劑用量，避免染色時(shí)液體流淌和擴(kuò)散，提高操作速度?？蛇M(jìn)行大規(guī)模，多樣本及多組別的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)科學(xué)研究。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0012]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
[0013]圖1是本發(fā)明培養(yǎng)皿的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0014]圖2是免疫組化筆的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0015]圖3是皿體底脫出示意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0016]一種多用途免疫組化筆在細(xì)胞爬片免疫組織化學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用，將細(xì)胞接種于載玻片式培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后進(jìn)行免疫細(xì)胞組織化學(xué)染色鑒定；所述載玻片式培養(yǎng)皿設(shè)有培養(yǎng)皿體I和皿蓋2，培養(yǎng)皿體型號(hào)分單孔室和多孔室兩種；各孔室面積大于載玻片，皿體底3直接作為載玻片使用，皿體底外側(cè)面設(shè)有與載玻片尺寸對(duì)應(yīng)的長(zhǎng)方形框痕線凹溝4，在外力作用下可將皿體的底部沿長(zhǎng)方形框痕線凹溝脫出；
所述免疫細(xì)胞組織化學(xué)染色鑒定依次包括下列步驟:
(1)用冰丙酮固定15min或4%多聚甲醒固定；
(2)流水漂洗，用PBS清洗標(biāo)本3次；
(3)用0.5%Triton X-100 孵育 10 min ；
(4)0.3%H202 孵育 10 min ；
(5)用PBS清洗標(biāo)本3次后,熱風(fēng)充分干燥；
(7)用免疫組化筆將油墨在細(xì)胞爬片上畫分2-20個(gè)分隔染色區(qū)；
(8)空氣充分干燥；
(9)用正常二抗血清封閉孵育10min ；
(10)在各細(xì)胞染色區(qū)分別滴加小鼠或兔抗第一抗體孵育30?60min ；
(11)吸除各細(xì)胞染色區(qū)液體并用PBS清洗標(biāo)本3次；
(12)滴加酶聯(lián)小鼠或兔第二抗體工作液孵育30?60min ；
(13)PBS清洗標(biāo)本3次；
(14)DAB顯色，避光，鏡下觀察；
(15)蒸餾水洗；
(16)蘇木素襯染；
(17)鹽酸酒精分化，自來(lái)水洗；
(18)水性封固劑封片。
[0017]所述油墨由下列重量百分比的組分混合組成:松香2飛％，蜂蠟18?26%，石蠟:Γ8%，異丙醚5?10%，二氯甲烷5?10%，汽油25?30%，二硫化碳12?17%，四氯化碳2?6%，氯仿2?6%，環(huán)已酮2?6% ;上述各組分用量之和為100% ；
或所述油墨由下列組分混合組成:聚苯乙烯2?4%，DMF9?11%，THF9?11%，松香2?4%，蜂蠟13?16%，石蠟2?4%，異丙醚4?6%，二氯甲烷4?6%，汽油18?22%，二硫化碳9?11%，四氯化碳9?11%，氯仿I?2%，環(huán)已酮I?2%，煤油2?4%，松節(jié)油I?2% ;上述各組分用量之和為100% ；或所述油墨由下列組分混合組成:硬脂酸30?36%，苯15?20%，461:石蠟9?15%，異丙醚7?11%，二硫化碳15?20%，氯仿15?20% ;上述各組分用量之和為100%。
[0018]在外力作用下可將皿體的底部沿長(zhǎng)方形框痕線凹溝脫出前，先用銳利刀具沿線凹溝劃、勾，然后在皿底面加用外力可將皿體的單孔槽底脫出。
[0019]所述免疫組化筆包括筆筒5，筆筒內(nèi)設(shè)置海綿樣的圓柱體筆芯6，筆筒內(nèi)灌注有油墨，海綿樣的圓柱體筆芯前端設(shè)置木質(zhì)筆芯10 ;海綿樣的圓柱體筆芯放置在筆筒中，筆筒為長(zhǎng)方體或圓柱體，筆筒口外側(cè)有螺紋與內(nèi)筆帽7的內(nèi)螺紋匹配吻合；筆筒中放置不銹鋼珠8—個(gè)，搖晃筆筒時(shí)作攪和油墨的作用；所述內(nèi)筆帽起封閉筆筒口，防止油墨揮發(fā)保持其液相狀態(tài)和聯(lián)接外筆帽的作用，其內(nèi)表面有與筆筒口吻合的內(nèi)螺紋，可旋蓋筆筒口，內(nèi)筆帽的外表面設(shè)有與外筆帽9內(nèi)口緣匹配吻合的鎖口凹，圓柱體筆芯末端一側(cè)設(shè)有油墨刷11 ；外筆帽的內(nèi)口緣周設(shè)有鎖口凹，與內(nèi)筆帽外口緣匹配吻合，起封閉內(nèi)筆帽和固定內(nèi)筆帽為一體開(kāi)啟筆筒口，并起提出油墨刷的作用。內(nèi)筆帽上設(shè)置油墨交流孔12。
[0020]多孔室培養(yǎng)皿的一個(gè)角呈斜面形式，方便方位標(biāo)識(shí)；培養(yǎng)皿蓋的一個(gè)角呈與培養(yǎng)皿呈斜面的角配合的斜面形式；培養(yǎng)皿蓋與培養(yǎng)皿吻合口周緣的交錯(cuò)深度> 10mm。
【權(quán)利要求】
1.一種多用途免疫組化筆在細(xì)胞爬片免疫組織化學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用，其特征是:將細(xì)胞接種于載玻片式培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后進(jìn)行免疫細(xì)胞組織化學(xué)染色鑒定；所述載玻片式培養(yǎng)皿設(shè)有培養(yǎng)皿體和皿蓋，培養(yǎng)皿體型號(hào)分單孔室和多孔室兩種；各孔室面積大于載玻片，皿體底直接作為載玻片使用，皿體底外側(cè)面設(shè)有與載玻片尺寸對(duì)應(yīng)的長(zhǎng)方形框痕線凹溝，在外力作用下可將皿體的底部沿長(zhǎng)方形框痕線凹溝脫出，獲得有培養(yǎng)細(xì)胞面形同載玻片的皿底，備用于各種免疫組織化學(xué)檢測(cè)； 所述免疫細(xì)胞組織化學(xué)染色鑒定依次包括下列步驟: (1)用冰丙酮固定15min或4%多聚甲醒固定； (2)流水漂洗，用PBS清洗標(biāo)本3次；
(3)用0.5%Triton X-1OO 孵育 10 min ；
(4)0.3%H202 孵育 10 min ； (5)用PBS清洗標(biāo)本3次后,熱風(fēng)充分干燥； (7)用免疫組化筆將油墨在細(xì)胞爬片上畫分2-20個(gè)分隔染色區(qū)； (8)空氣充分干燥； (9)用正常二抗血清封閉孵育10min ； (10)在各細(xì)胞染色區(qū)分別滴加小鼠或兔抗第一抗體孵育30?60min ； (11)吸除各細(xì)胞染色區(qū)液體并用PBS清洗標(biāo)本3次； (12)滴加酶聯(lián)小鼠或兔第二抗體工作液孵育30?60min ； (13)PBS清洗標(biāo)本3次； (14)DAB顯色，避光，鏡下觀察； (15)蒸餾水洗； (16)蘇木素襯染； (17)鹽酸酒精分化，自來(lái)水洗； (18)水性封固劑封片。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多用途免疫組化筆在細(xì)胞爬片免疫組織化學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用，其特征是:所述油墨由下列重量百分比的組分混合組成:松香2飛％，蜂蠟If 26%，石蠟3?8%，異丙醚5?10%，二氯甲烷5?10%，汽油25?30%，二硫化碳12?17%，四氯化碳2?6%，氯仿2?6%，環(huán)已酮2?6% ;上述各組分用量之和為100% ； 或所述油墨由下列組分混合組成:聚苯乙烯2?4%，DMF9?11%，THF9?11%，松香2?4%，蜂蠟13?16%，石蠟2?4%，異丙醚4?6%，二氯甲烷4?6%，汽油18?22%，二硫化碳9?11%，四氯化碳9?11%，氯仿I?2%，環(huán)已酮I?2%，煤油2?4%，松節(jié)油I?2% ;上述各組分用量之和為100% ； 或所述油墨由下列組分混合組成:硬脂酸30?36%，苯15?20%，461:石蠟9?15%，異丙醚7?11%，二硫化碳15?20%，氯仿15?20% ;上述各組分用量之和為100%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的多用途免疫組化筆在細(xì)胞爬片免疫組織化學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用，其特征是:在外力作用下可將皿體的底部沿長(zhǎng)方形框痕線凹溝脫出前，先用銳利刀具沿線凹溝劃、勾，然后在皿底面稍加用外力可將皿體的單孔槽底脫出。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的免疫組化筆在細(xì)胞爬片免疫組織化學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用，其特征是:所述免疫組化筆包括筆筒，筆筒內(nèi)設(shè)置海綿樣的圓柱體筆芯，筆筒內(nèi)灌注有油墨，海綿樣的圓柱體筆芯前端設(shè)置木質(zhì)筆芯；海綿樣的圓柱體筆芯放置在筆筒中，筆筒為長(zhǎng)方體或圓柱體，筆筒口外側(cè)有螺紋與內(nèi)筆帽的內(nèi)螺紋匹配吻合；筆筒中放置不銹鋼珠一個(gè)，搖晃筆筒時(shí)作攪和油墨的作用；所述內(nèi)筆帽起封閉筆筒口，防止油墨揮發(fā)保持其液相狀態(tài)和聯(lián)接外筆帽的作用，其內(nèi)表面有與筆筒口吻合的內(nèi)螺紋，可旋蓋筆筒口，內(nèi)筆帽的外表面設(shè)有與外筆帽內(nèi)口緣匹配吻合的鎖口凹，圓柱體筆芯末端一側(cè)設(shè)有油墨刷；外筆帽的內(nèi)口緣周設(shè)有鎖口凸，與內(nèi)筆帽的鎖口凹匹配吻合，起封閉內(nèi)筆帽和固定內(nèi)筆帽為一體開(kāi)啟筆筒口，并起提出油墨刷的作用。
【文檔編號(hào)】G01N1/30GK104359741SQ201410500701
【公開(kāi)日】2015年2月18日 申請(qǐng)日期:2014年9月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月26日
【發(fā)明者】鄂群, 江明, 田 健, 王海英, 王東林, 李春筍, 陸錦標(biāo), 蔣春峰, 朱順星, 儲(chǔ)成存, 劉小飛, 焦麗燕, 劉麗麗, 曹靖晨, 張沖, 顏民, 鄔迪, 張小川, 唐妙 申請(qǐng)人:南通大學(xué)