一種筋骨疼痛酒的薄層色譜鑒別方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種筋骨疼痛酒的薄層色譜鑒別方法，屬于藥物分析【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明提出的筋骨疼痛酒的薄層色譜鑒別方法能夠有效地對(duì)當(dāng)歸、虎杖、肉桂、紅花、木香、續(xù)斷進(jìn)行鑒別，提高了該藥酒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
【專利說(shuō)明】一種筋骨疼痛酒的薄層色譜鑒別方法
[0001]

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明公開一種筋骨疼痛酒的薄層色譜鑒別方法，屬于藥物分析【技術(shù)領(lǐng)域】。
[0003]

【背景技術(shù)】
[0004]筋骨疼痛酒，最早收載于《江蘇省藥品標(biāo)準(zhǔn)》1977年版，后轉(zhuǎn)收于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第五冊(cè)，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào):WS3-B-1045-91。該方是由當(dāng)歸、木香、玉竹、黃芪、黨參、重樓、虎枚、桂枝、枸杞子、秦艽、制川烏、制草烏、續(xù)斷、肉桂、紅花等在白酒中浸潰、滲漉所制得。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有乙醇量檢查。
[0005]


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明所需要解決的技術(shù)問題是筋骨疼痛酒中缺少鑒別檢測(cè)的問題，完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提出了一種筋骨疼痛酒的薄層色譜鑒別方法。
[0007]技術(shù)方案:
一種筋骨疼痛酒的薄層色譜鑒別方法，包括有對(duì)續(xù)斷鑒別步驟，所述的對(duì)續(xù)斷鑒別的方法包括如下步驟:
(1)供試品溶液的制備:取供試品200ml，水浴上蒸至無(wú)醇味，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，加在DlOl大孔吸附樹脂柱上，以水80ml洗脫，棄去水液，再用40%乙醇80ml洗脫，棄去40%乙醇洗脫液，繼續(xù)用70%乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；
(2)對(duì)照品溶液的制備:取川續(xù)斷皂苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液；
(3)薄層層析:吸取上述兩種溶液各5?10μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水按體積比13:5:1的混合溶液在10°C以下放置分層的下層溶液為展開劑，氨蒸汽預(yù)飽和20分鐘，展開后，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；
(4)將供試品色譜中與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上與對(duì)照品的斑點(diǎn)進(jìn)行比較。
[0008]進(jìn)一步地，還包括有對(duì)當(dāng)歸鑒別步驟，方法如下:
(O供試品溶液的制備:取供試品50ml，蒸至20 ml，加乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，低溫蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液；
(2)對(duì)照藥材溶液的制備:取當(dāng)歸對(duì)照藥材0.25g，加乙醚2ml，振搖10分鐘，靜置，取上清液作為對(duì)照藥材溶液；
(3)薄層層析:吸取上述兩種溶液各5μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯按體積比9:1的混合溶劑為展開劑，展開后，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視；
(4)將供試品色譜中與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上與對(duì)照品的斑點(diǎn)進(jìn)行比較。
[0009]進(jìn)一步地，還包括有對(duì)虎杖鑒別步驟，方法如下:
(1)供試品溶液的制備:取供試品50ml，加2.5mol/L硫酸溶液5ml，加熱水解30分鐘，放冷，用三氯甲烷提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷提取液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄镮ml使溶解，作為供試品溶液；
(2)對(duì)照品溶液的制備:取大黃素和大黃素甲醚對(duì)照品，分別加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；
(3)薄層層析:吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各2μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30?60°C)—甲酸乙酯一甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開后，取出，晾干，置氨蒸氣中熏；
(4)將供試品色譜中與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上與對(duì)照品的斑點(diǎn)進(jìn)行比較。
[0010]進(jìn)一步地，還包括有對(duì)肉桂鑒別步驟，方法如下:
(1)供試品溶液:取供試品50ml，加石油醚提取2次，每次20ml，合并提取液，揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液；
(2)對(duì)照品溶液:取桂皮醛對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每Iml含Iμ I的溶液，作為對(duì)照品溶液；
(3)薄層層析:吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液2μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷一乙酸乙酯按照體積比17:3的混合溶劑為展開劑，展開后，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液；
(4)將供試品色譜中與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上與對(duì)照品的斑點(diǎn)進(jìn)行比較。
[0011]進(jìn)一步地，還包括有對(duì)紅花鑒別步驟，方法如下:
(1)供試品溶液的制備:取供試品50ml，蒸至約20ml，加乙醚振搖提取2次，每次20ml，棄去乙醚液，水層加水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次25ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20 ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液；
(2)對(duì)照藥材溶液的制備:取紅花對(duì)照藥材0.5g，加50%的乙醇溶液浸潰過夜，濾過，濾液蒸至無(wú)醇味，同法制成對(duì)照藥材溶液；
(3)薄層層析:吸取上述兩種溶液各5μ1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯一甲酸一水一甲醇(7:2:3:0.4)為展開劑，上行展開，取出，晾干；
(4)將供試品色譜中與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上與對(duì)照品的斑點(diǎn)進(jìn)行比較。
[0012]進(jìn)一步地，還包括有對(duì)木香鑒別步驟，方法如下:
(1)供試品溶液的制備:取供試品50ml,低溫蒸至無(wú)醇味,加乙醚萃取兩次(30min,20ml)，合并乙醚提取液，揮干，殘?jiān)尤燃淄镮ml使溶解，作為供試品溶液；
(2)對(duì)照藥材溶液的制備:取木香對(duì)照藥材0.2g，加乙醚20ml振搖提取15分鐘，提取液揮干，殘?jiān)尤燃淄镮ml使溶解，作為對(duì)照品溶液；
(3)薄層層析:吸取上述三種溶液各5μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-環(huán)已烷(5:1)為展開劑，上行展開約10cm，取出，晾干，噴以1%香醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；
(4)將供試品色譜中與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上與對(duì)照品的斑點(diǎn)進(jìn)行比較。
[0013]進(jìn)一步地，還包括有對(duì)烏頭堿限量檢查步驟，方法如下:
(O供試品溶液:取供試品250ml，蒸至約50 ml，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9?10 ;加三氯甲烷提取三次，合并三氯甲烷提取液，蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液；
(2)對(duì)照藥材溶液:取烏頭堿對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每Iml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；
(3)薄層層析:吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各5μ1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷一乙酸乙酯一乙醇按體積比6.4:3.6:1的混合溶劑為展開劑，置氨蒸氣飽和15分鐘的上行展開缸內(nèi)上行展開，取出，晾干，碘蒸氣熏至斑點(diǎn)清晰；
(4)將供試品色譜中與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上與對(duì)照品的斑點(diǎn)進(jìn)行比較。
[0014]有益效果
本發(fā)明提出的筋骨疼痛酒的薄層色譜鑒別方法能夠有效地對(duì)當(dāng)歸、虎杖、肉桂、紅花、木香、續(xù)斷進(jìn)行鑒別，提高了該藥酒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
[0015]

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0016]圖1是實(shí)施例1中續(xù)斷的薄層色譜鑒別比較圖。
[0017]圖2是對(duì)照例I中續(xù)斷的薄層色譜鑒別比較圖。
[0018]圖3是對(duì)照例2中續(xù)斷的薄層色譜鑒別比較圖。
[0019]圖4是實(shí)施例2中當(dāng)歸的薄層色譜鑒別比較圖。
[0020]圖5是實(shí)施例3中虎杖的薄層色譜鑒別比較圖。
[0021]圖6是實(shí)施例4中肉桂的薄層色譜鑒別比較圖。
[0022]圖7是實(shí)施例5中紅花的薄層色譜鑒別比較圖。
[0023]圖8是實(shí)施例6中木香的薄層色譜鑒別比較圖。
[0024]圖9是實(shí)施例7中烏頭堿的薄層色譜鑒別比較圖。
[0025]

【具體實(shí)施方式】
[0026]下面通過【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。但本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件(例如參考嚴(yán)拯宇編著的《中藥薄層色譜分析技術(shù)與應(yīng)用》，中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2009)或者按照產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購(gòu)獲得的常規(guī)產(chǎn)品。本發(fā)明中所述的溶液配比在無(wú)特殊說(shuō)明的條件下，都為體積比。
[0027]藥品與試劑
當(dāng)歸對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所，120927-200512);川續(xù)斷皂苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，111658-200401);木香對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所，120921-200506 );紅花對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所，120907-200408 );桂皮醛對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，710~200212);大黃素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，110756-200110);大黃素甲醚對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，110758-200509)。
[0028]筋骨疼痛酒由江蘇七O七天然制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為060204、060302、060401 ;陰性樣品均按處方工藝自制。
[0029]制法如下:
【處方】
當(dāng)歸 29.7g木香 23.9g玉竹 119.8g
黃芪44.9g黨參 44.9g重樓 59.9g
虎杖57.5g桂枝 44.9g枸杞子 44.9g
秦艽29.9g制川烏 23.9g制草烏 23.9g
續(xù)斷59.9g肉桂 29.9g紅花 59.9g
【制法】
以上十五味，酌予碎斷，用白酒10251g作溶劑，浸潰48小時(shí)后滲漉或循環(huán)提取，收集滲漉液或提取液，加入砂糖479g，攪拌溶化，并加白酒適量使成總量為10000ml，靜置二周，濾過，分裝，即得。
[0030]硅膠G薄層板(自制。硅膠G由青島海洋化工廠生產(chǎn)(供薄層層析用)，厚度0.6mm,黏合劑為0.05%羧甲基纖維素鈉。)。其它試劑均為分析純。
[0031]實(shí)施例1續(xù)斷的鑒別
①供試品溶液的制備:取供試品200ml，水浴上蒸至無(wú)醇味，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，加在DlOl大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm,長(zhǎng)約8cm)上，以水80ml洗脫，棄去水液,再用40%乙醇80ml洗脫，棄去40%乙醇洗脫液，繼續(xù)用70%乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。(水飽和的正丁醇的備制方法是:將正丁醇和蒸餾水混合(混合比例為體積比1:1)，振搖，混勻，放置過夜(可利用超聲，超聲時(shí)間為lOmin)。得到的混合液分層，上層為水飽和的正丁醇溶液，下層為正丁醇的飽和水溶液。)
②對(duì)照品溶液的制備:取川續(xù)斷皂苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液。
[0032]③陰性對(duì)照溶液的制備:取缺續(xù)斷的陰性樣品相當(dāng)于供試品200ml，同法制成陰性對(duì)照溶液。
[0033]④薄層層析:吸取上述三種溶液各5?10 μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13:5:1) 10°C以下放置分層的下層溶液為展開劑，氨蒸汽預(yù)飽和20分鐘，上行展開約15cm，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；而陰性對(duì)照溶液無(wú)此斑點(diǎn)，表明陰性無(wú)干擾(附圖1)，圖中從左至右依次為:批號(hào)為060204、060302、060401三個(gè)樣品、川續(xù)斷皂苷對(duì)照品、陰性對(duì)照。
[0034]對(duì)照例I
與實(shí)施例1的區(qū)別在于:供試品溶液未經(jīng)過大孔吸附樹脂柱的吸附除雜，具體的步驟是:取供試品200ml，水浴上蒸至無(wú)醇味，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。其它溶液及薄層展開方法同實(shí)施例1，展開圖如圖2所示，從圖中可以看出，當(dāng)未采用樹脂吸附時(shí)，在陰性對(duì)照品條帶上出現(xiàn)有斑點(diǎn)；且供試品溶液的條帶與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置的斑點(diǎn)不清晰。
[0035]對(duì)照例2
與實(shí)施例1的區(qū)別在于:在用大孔吸附樹脂柱的吸附除雜之后，未采用40%乙醇80ml洗脫，具體的步驟是:取供試品200ml，水浴上蒸至無(wú)醇味，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，加在DlOl大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm,長(zhǎng)約8cm)上，以水80ml洗脫，棄去水液，繼續(xù)用70%乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。其它溶液及薄層展開方法同實(shí)施例1，展開圖如圖3所示,從圖中可以看出，當(dāng)未采用40%乙醇80ml洗脫時(shí),供試品溶液的條帶與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置的斑點(diǎn)不清晰。
[0036]對(duì)照例3
與實(shí)施例1的區(qū)別在于:在用大孔吸附樹脂柱的吸附除雜之后，未水洗脫，具體的步驟是:取供試品200ml，水浴上蒸至無(wú)醇味，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，殘洛加水5ml使溶解,加在DlOl大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm,長(zhǎng)約8cm)上,用40%乙醇80ml洗脫，棄去40%乙醇洗脫液，繼續(xù)用70%乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。其它溶液及薄層展開方法同實(shí)施例1，當(dāng)未采用水洗脫時(shí)，供試品溶液的條帶與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置的斑點(diǎn)不清晰。
[0037]由于本處方中黃芪也含有皂苷成分，特別是黃芪甲苷與川續(xù)斷皂苷互相干擾，曾使用展開劑:三氯甲烷-甲醇-水(13:7:2) 10°C以下放置分層的下層溶液、1，2_ 二氯乙烷-正丁醇-甲醇-水(6: 8: 3: 5)的下層溶液、正丁醇-乙酸-水(4: I: 5)的上層溶液、正丁醇-乙酸乙酯-水(4: I: 5)的上層溶液(氨蒸氣飽和上行展開)，均不容易將兩者分開，供試品溶液的條帶與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置的斑點(diǎn)不清晰。
[0038]實(shí)施例2當(dāng)歸的鑒別
①供試品溶液的制備:取供試品50ml，蒸至約20 ml，加乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，低溫蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液。
[0039]②對(duì)照藥材溶液的制備:取當(dāng)歸對(duì)照藥材0.25g，加乙醚2ml，振搖10分鐘，靜置，取上清液作為對(duì)照藥材溶液。
[0040]③陰性對(duì)照溶液的制備:取缺當(dāng)歸的陰性樣品相當(dāng)于供試品50ml，同法制成陰性對(duì)照溶液。
[0041]④薄層層析:吸取上述三種溶液各5μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(9:1)為展開劑，上行展開約10cm，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)；而陰性對(duì)照溶液無(wú)此斑點(diǎn)，表明陰性無(wú)干擾(圖4)。(從左至右依次為:陰性對(duì)照、批號(hào)為060204、060302、060401三個(gè)樣品、當(dāng)歸對(duì)照藥材)，Rf值約0.4。
[0042]曾選擇正己烷-乙酸乙酯(7:2)作為展開劑，，其它條件同上，Rf值約0.1，且斑點(diǎn)不清晰。
[0043]另外，使用石油醚(60?90°C)_醋酸乙醋(9:1 )、石油醚(30?60°C )_醋酸乙醋(9:1)、苯-正己烷-乙酸乙酯(3:14:3)、甲苯-乙酸乙酯(9:1)作為展開劑時(shí)，都出現(xiàn)條帶斑點(diǎn)不清晰的問題。
[0044]實(shí)施例3虎杖的鑒別
以大黃素、大黃素甲醚作為虎杖的鑒別成分。
[0045]①供試品溶液的制備:取供試品50ml，加2.5mol/L硫酸溶液5ml，加熱水解30分鐘，放冷，用三氯甲烷提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷提取液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄镮ml使溶解，作為供試品溶液。
[0046]②對(duì)照品溶液的制備:取大黃素和大黃素甲醚對(duì)照品，分別加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
[0047]③陰性對(duì)照溶液的制備:取缺虎杖的陰性樣品相當(dāng)于供試品50ml，同法制成陰性對(duì)照溶液。
[0048]④薄層層析:吸取供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各4 μ 1、對(duì)照品溶液各2 μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30?60°C ) 一甲酸乙酯一甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，上行展開約10cm，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色斑點(diǎn)；置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。而陰性對(duì)照溶液無(wú)此斑點(diǎn)，表明陰性無(wú)干擾(附圖5)。(從左至右依次為:陰性對(duì)照、批號(hào)為060204、060302、060401三個(gè)樣品、大黃素、大黃素甲醚對(duì)照品)
實(shí)施例4肉桂的鑒別
以桂皮醒作為肉桂的鑒別成分。本方中桂枝亦含有桂皮醒，但含量較少，在本方法取樣量、點(diǎn)樣量下無(wú)干擾。
[0049]①供試品溶液:取供試品50ml，加石油醚(30?60°C )提取2次，每次20ml，合并提取液，揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液。
[0050]②對(duì)照品溶液:取桂皮醛對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每Iml含I μ I的溶液，作為對(duì)照品溶液。
[0051]③陰性對(duì)照溶液:取缺肉桂的陰性樣品相當(dāng)于供試品50ml，同法制成陰性對(duì)照溶液。
[0052]④薄層層析:吸取供試品溶液、陰性對(duì)照溶液2?5 μ 1，對(duì)照品溶液2 μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷一乙酸乙酯(17:3)為展開劑，上行展開約10cm，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照溶液無(wú)此斑點(diǎn)，表明陰性無(wú)干擾(圖6)。(從左至右依次為:陰性對(duì)照、批號(hào)為060204、060302、060401三個(gè)樣品、桂皮醛對(duì)照品)
實(shí)施例5紅花的鑒別以紅花藥材作為對(duì)照進(jìn)行鑒別。
[0053]①供試品溶液的制備:取供試品50ml，蒸至約20ml，加乙醚振搖提取2次，每次20ml，棄去乙醚液，水層加水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次25ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20 ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液。
[0054]②對(duì)照藥材溶液的制備:取紅花對(duì)照藥材0.5g，加50%的乙醇溶液浸潰過夜，濾過，濾液蒸至無(wú)醇味，同法制成對(duì)照藥材溶液。
[0055]③陰性對(duì)照溶液的制備:取缺紅花的陰性樣品相當(dāng)于供試品50ml，同法制成陰性對(duì)照溶液。
[0056]④薄層層析:吸取上述兩種溶液各5μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯一甲酸一水一甲醇(7:2:3:0.4)為展開劑，上行展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；而陰性對(duì)照溶液無(wú)此斑點(diǎn)，表明陰性無(wú)干擾(圖7)。(從左至右依次為:陰性對(duì)照、批號(hào)為060204、060302、060401三個(gè)樣品、紅花對(duì)照藥材)
曾選擇乙酸乙酯一丁酮一甲酸一水一甲醇(5:3:1:1)、正丁醇一甲醇一水(4:1:5)的上層溶液為展開劑，以上述的乙酸乙酯一甲酸一水一甲醇(7:2:3:0.4)得到的斑點(diǎn)最為清晰。
[0057]另外，曾采用比較硅膠G、硅膠H、4%醋酸鈉制備的硅膠G板，以上述的羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板得到的斑點(diǎn)最為清晰。
[0058]實(shí)施例6木香的鑒別
①供試品溶液的制備:取供試品50ml,低溫蒸至無(wú)醇味，加乙醚萃取兩次(30min,20ml)，合并乙醚提取液，揮干，殘?jiān)尤燃淄镮ml使溶解，作為供試品溶液。
[0059]②對(duì)照藥材溶液的制備:取木香對(duì)照藥材0.2g，加乙醚20ml振搖提取15分鐘，提取液揮干，殘?jiān)尤燃淄镮ml使溶解，作為對(duì)照品溶液。
[0060]③陰性對(duì)照溶液的制備:取缺木香的陰性樣品相當(dāng)于供試品50ml，同法制成陰性對(duì)照溶液。
[0061]④薄層層析:吸取上述三種溶液各5μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-環(huán)已烷(5:1)為展開劑，上行展開約10cm，取出，晾干，噴以1%香醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；而陰性對(duì)照溶液無(wú)此斑點(diǎn)，表明陰性無(wú)干擾(圖8)。(從左至右依次為:陰性對(duì)照、批號(hào)為060204、060302、060401三個(gè)樣品、木香對(duì)照藥材)
實(shí)施例7烏頭堿限量檢查 I)藥品與試劑
烏頭堿對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，110720-200410)。
[0062]筋骨疼痛酒由江蘇七O七天然制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為060204、060302、060401 ;陰性樣品按處方工藝自制。
[0063]硅膠G薄層板(自制。硅膠G由青島海洋化工廠生產(chǎn)(供薄層層析用)，厚度0.6mm,黏合劑為0.05%羧甲基纖維素鈉。)。其它試劑均為分析純。
[0064]2)方法與結(jié)果
①供試品溶液:取供試品250ml,蒸至約50 ml,加氨水調(diào)節(jié)pH值為9?10 ;加三氯甲烷提取三次(30、25、20!111)，合并三氯甲烷提取液，蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液。
[0065]②對(duì)照藥材溶液:取烏頭堿對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每Iml含2mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。
[0066]③陰性對(duì)照溶液:取缺制川烏、制草烏的陰性樣品(按藥品的處方工藝自制)相當(dāng)于供試品200m同法制成陰性對(duì)照溶液。
[0067]④薄層層析:吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各5μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷一乙酸乙酯一乙醇(6.4:3.6:1)為展開齊U，置氨蒸氣飽和15分鐘的上行展開缸內(nèi)上行展開，取出，晾干，碘蒸氣熏至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置未出現(xiàn)斑點(diǎn)。而陰性對(duì)照溶液無(wú)此斑點(diǎn)，表明陰性無(wú)干擾(附圖9)。(從左至右依次為:陰性對(duì)照、批號(hào)為060204、060302、060401三個(gè)樣品、烏頭喊對(duì)照品)。
[0068]方中制川烏、制草烏可能含有毒性很強(qiáng)的烏頭堿。參考文獻(xiàn)，制川烏、制草烏一日安全劑量為1.5?3g，烏頭堿含量不得過0.15%。該制劑一日服用量為45ml，本方法取樣量遠(yuǎn)大于一日服用量，而且點(diǎn)樣量增至1y I時(shí)，出現(xiàn)的斑點(diǎn)仍小于對(duì)照品所現(xiàn)斑點(diǎn)(5μ I)。
[0069]對(duì)于顯色方法，曾采用噴改良碘化鉍鉀試液、稀碘化鉍鉀試液、碘化鉍鉀試液一碘化鉀碘試液(1:1)，以上述的碘蒸氣熏的顯色斑點(diǎn)最為清晰。
[0070]對(duì)于薄層板，曾使用硅膠G、堿性氧化鋁薄層板，以上述的采用羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板得到的斑點(diǎn)最為清晰。
[0071]對(duì)于展開劑，曾使用正己烷一乙酸乙酯(1:1)、乙酸乙酯一丙酮一氨水(17:2:1)等，以上班的正己烷一乙酸乙酯一乙醇(6.4:3.6:1)得到的斑點(diǎn)最為清晰。
【權(quán)利要求】
1.一種筋骨疼痛酒的薄層色譜鑒別方法，其特征在于，包括對(duì)續(xù)斷鑒別的步驟，所述的對(duì)續(xù)斷鑒別的步驟如下: 第I步、供試品溶液的制備:取供試品200ml，水浴上蒸至無(wú)醇味，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，加在DlOl大孔吸附樹脂柱上，以水80ml洗脫，棄去水液，再用40%乙醇80ml洗脫，棄去40%乙醇洗脫液，繼續(xù)用70%乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液； 第2步、對(duì)照品溶液的制備:取川續(xù)斷皂苷對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液； 第3步、薄層層析:吸取上述兩種溶液各5?10 μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水按體積比13:5:1的混合溶液在10C以下放置分層的下層溶液為展開劑，氨蒸汽預(yù)飽和20分鐘，展開后，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°c加熱至斑點(diǎn)顯色清晰； 第4步、將供試品色譜中與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上與對(duì)照品的斑點(diǎn)進(jìn)行比較。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的筋骨疼痛酒的薄層色譜鑒別方法，其特征在于，還包括有對(duì)當(dāng)歸鑒別的步驟，步驟如下: 第I步、供試品溶液的制備:取供試品50ml，蒸至20 ml，加乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，低溫蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液； 第2步、對(duì)照藥材溶液的制備:取當(dāng)歸對(duì)照藥材0.25g，加乙醚2ml，振搖10分鐘，靜置，取上清液作為對(duì)照藥材溶液； 第3步、薄層層析:吸取上述兩種溶液各5μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯按體積比9:1的混合溶劑為展開劑，展開后，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視； 第4步、將供試品色譜中與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上與對(duì)照品的斑點(diǎn)進(jìn)行比較。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的筋骨疼痛酒的薄層色譜鑒別方法，其特征在于，還包括有對(duì)虎杖鑒別的步驟，步驟如下: 第I步、供試品溶液的制備:取供試品50ml，加2.5mol/L硫酸溶液5ml，加熱水解30分鐘，放冷，用三氯甲烷提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷提取液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄镮ml使溶解，作為供試品溶液； 第2步、對(duì)照品溶液的制備:取大黃素和大黃素甲醚對(duì)照品，分別加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液； 第3步、薄層層析:吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各2 μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30?60°C) —甲酸乙酯一甲酸(15:5:1)的上層溶液為展開劑，展開后，取出，晾干，置氨蒸氣中熏； 第4步、將供試品色譜中與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上與對(duì)照品的斑點(diǎn)進(jìn)行比較。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的筋骨疼痛酒的薄層色譜鑒別方法，其特征在于，還包括有對(duì)肉桂鑒別的步驟，步驟如下: 第I步、供試品溶液:取供試品50ml，加石油醚提取2次，每次20ml，合并提取液，揮干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液； 第2步、對(duì)照品溶液:取桂皮醛對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每Iml含I μ I的溶液，作為對(duì)照品溶液； 第3步、薄層層析:吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液2 μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷一乙酸乙酯按照體積比17:3的混合溶劑為展開劑，展開后，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液； 第4步、將供試品色譜中與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上與對(duì)照品的斑點(diǎn)進(jìn)行比較。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的筋骨疼痛酒的薄層色譜鑒別方法，其特征在于，還包括有對(duì)紅花鑒別的步驟，步驟如下: 第1步、供試品溶液的制備:取供試品50ml，蒸至約20ml，加乙醚振搖提取2次，每次20ml，棄去乙醚液，水層加水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次25ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20 ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液； 第2步、對(duì)照藥材溶液的制備:取紅花對(duì)照藥材0.5g，加50%的乙醇溶液浸潰過夜，濾過，濾液蒸至無(wú)醇味，同法制成對(duì)照藥材溶液； 第3步、薄層層析:吸取上述兩種溶液各5μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯按體積比9:1的混合溶劑為展開劑，展開后，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視； 第4步、將供試品色譜中與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上與對(duì)照品的斑點(diǎn)進(jìn)行比較。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的筋骨疼痛酒的薄層色譜鑒別方法，其特征在于，還包括有對(duì)木香鑒別的步驟，步驟如下: 第1步、供試品溶液的制備:取供試品50ml，低溫蒸至無(wú)醇味，加乙醚萃取兩次，合并乙醚提取液，揮干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液； 第2步、對(duì)照藥材溶液的制備:取木香對(duì)照藥材0.2g，加乙醚20ml振搖提取15分鐘，提取液揮干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為對(duì)照品溶液； 第3步、薄層層析:吸取上述三種溶液各5μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-環(huán)已烷(5:1)為展開劑，上行展開約10cm，取出，晾干，噴以1%香醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰； 第4步、將供試品色譜中與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上與對(duì)照品的斑點(diǎn)進(jìn)行比較。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的筋骨疼痛酒的薄層色譜鑒別方法，其特征在于，還包括有對(duì)烏頭堿限量檢查的步驟，步驟如下: 第1步、供試品溶液:取供試品250ml，蒸至約50 ml，加氨水調(diào)節(jié)pH值為9?10 ;加三氯甲烷提取三次，合并三氯甲烷提取液，蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液； 第2步、對(duì)照藥材溶液:取烏頭堿對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液； 第3步、薄層層析:吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液各5μ 1，分別接觸式點(diǎn)樣于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷一乙酸乙酯一乙醇按體積比6.4:3.6:1的混合溶劑為展開劑，置氨蒸氣飽和15分鐘的上行展開缸內(nèi)上行展開，取出，晾干，碘蒸氣熏至斑點(diǎn)清晰； 第4步、將供試品色譜中與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上與對(duì)照品的斑點(diǎn)進(jìn)行比較。
【文檔編號(hào)】G01N30/90GK104280507SQ201410487015
【公開日】2015年1月14日 申請(qǐng)日期:2014年9月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月22日
【發(fā)明者】陳清華 申請(qǐng)人:江蘇七○七天然制藥有限公司