水中懸浮顆粒物上痕量氧氟沙星萃取富集和定量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種水中懸浮顆粒物上痕量氧氟沙星萃取富集和定量的方法，將目標(biāo)水樣用微孔纖維膜過(guò)濾，收集過(guò)濾后的濾膜，將濾膜晾干后剪成碎片置于三角瓶中，加入萃取劑密封、振蕩、超聲波萃?。挥糜袡C(jī)濾膜過(guò)濾萃取液，同時(shí)將過(guò)濾后的萃取液轉(zhuǎn)移至K-D濃縮瓶中；加入脫水干燥劑到萃取過(guò)濾液，吸干水份后，將K-D濃縮瓶放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行濃縮；將濃縮后的液體用氮?dú)獯祾咧馏w積為1ml以下；將濃縮液萃取過(guò)濾液定容至1mL后轉(zhuǎn)移到安捷倫專用瓶中；采用內(nèi)標(biāo)法，用高效液相色譜串聯(lián)三級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用儀器進(jìn)行檢測(cè)；對(duì)色譜質(zhì)譜分析圖進(jìn)行分析，即完成檢測(cè)。本方法補(bǔ)充了水環(huán)境中懸浮顆粒物上吸附的氧氟沙星的含量，補(bǔ)充了抗生素檢測(cè)的空白。
【專利說(shuō)明】水中懸浮顆粒物上痕量氧氟沙星萃取富集和定量的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于環(huán)境監(jiān)測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種水環(huán)境中氧氟沙星的檢測(cè)方法，具體涉及一種水中顆粒物上氧氟沙星萃取富集的定量方法。

【背景技術(shù)】
[0002]氧氟沙星是一種人工合成、高效廣譜抗菌的氟喹諾酮類藥物，對(duì)格蘭氏陽(yáng)性菌(包括甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌在內(nèi))和格蘭氏陰性菌(包括綠膿桿菌)均有較強(qiáng)作用，對(duì)肺炎支原體、奈瑟菌、厭氧菌和結(jié)核桿菌也有一定活性。它通過(guò)作用于細(xì)菌DNA螺旋酶的A亞單位，抑制DNA的合成和復(fù)制而導(dǎo)致細(xì)菌死亡。
[0003]氧氟沙星合成于1982年，口服易吸收，快而完全，血藥濃度高而持久，藥物體內(nèi)分布廣，是公認(rèn)的喹諾酮藥物中較為優(yōu)秀的品種。由于使用頻率極高，細(xì)菌對(duì)其產(chǎn)生的耐藥現(xiàn)象也日漸增多，而且在人體內(nèi)未完全代謝的殘留氧氟沙星，通過(guò)排泄物流入水環(huán)境中。近些年，國(guó)內(nèi)外水環(huán)境中痕量氧氟沙星的報(bào)道很多，濃度由ng/L到μ g/L的量級(jí)，這些水環(huán)境中的氧氟沙星，最終通過(guò)取水進(jìn)入到飲用水系統(tǒng)中，有效降解水中氧氟沙星的技術(shù)需要開(kāi)發(fā)。因此，為了確保飲用水安全，準(zhǔn)確檢測(cè)出水環(huán)境中、水處理系統(tǒng)內(nèi)痕量氧氟沙星的方法是必備的前提。目前，國(guó)內(nèi)外在萃取富集和定量檢測(cè)水中痕量氧氟沙星的技術(shù)上也不斷發(fā)展，常見(jiàn)的報(bào)道有固相萃取協(xié)同高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的方法，在進(jìn)行固相萃取之前，所有水樣品需要經(jīng)過(guò)0.45 μ m的濾膜過(guò)濾，溶解態(tài)的氧氟沙星經(jīng)過(guò)固相萃取后，富集之后，檢測(cè)。這些方法局限在溶解態(tài)氧氟沙星的定量上。有研究報(bào)道，氧氟沙星屬于羧基酸物質(zhì)，很容易吸附在顆粒物表面，因此，顆粒物表面的氧氟沙星很有必要萃取下來(lái)，進(jìn)行定量，這樣，可以全方位的掌握水中氧氟沙星的污染現(xiàn)狀，為解析氧氟沙星在水環(huán)境中的遷移規(guī)律，在水處理系統(tǒng)中的衰減規(guī)律，都有重要的支撐作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種水中懸浮顆粒物上痕量氧氟沙星萃取富集和定量的方法。
[0005]本發(fā)明的目的是通過(guò)以下將數(shù)據(jù)方案實(shí)現(xiàn)的:
(I)取目標(biāo)水樣2000-4000ml，用微孔纖維膜過(guò)濾，收集過(guò)濾后的濾膜及表面截留的懸浮顆粒物，將濾膜晾干后剪成碎片置于三角瓶中，用量筒量取適量萃取劑倒入三角瓶中；用封口膜密封好后置于振蕩培養(yǎng)箱中，溫度設(shè)定為4-10°C，關(guān)閉光照使其黑暗，轉(zhuǎn)速設(shè)定為100-200次/min，振蕩8_12h后，將三角瓶取出，進(jìn)行超聲波萃取，萃取時(shí)間20_35min，得到萃取液。
[0006](2)用有機(jī)濾膜過(guò)濾步驟一得到的萃取液，同時(shí)將過(guò)濾后的萃取液轉(zhuǎn)移至K-D濃縮瓶中。
[0007](3)加入脫水干燥劑到步驟二 K-D濃縮瓶中的萃取過(guò)濾液，吸干水份后，將K-D濃縮瓶放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行濃縮，濃縮溫度30-45°C，時(shí)間為10-20min，濃縮后體積為l_2ml為宜。
[0008](4)將步驟三濃縮后的液體，用氮?dú)獯祾咧馏w積為Iml以下，停止氮?dú)獯祾摺?br> [0009](5)將步驟四得到的濃縮液萃取過(guò)濾液定容至lmL，將定容后的液體轉(zhuǎn)移到安捷倫專用瓶中。
[0010](6)在步驟五得到的待測(cè)液中加入0.5ml的內(nèi)標(biāo)物，然后在超高壓液相色譜串聯(lián)三級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用儀器中檢測(cè)，檢測(cè)參數(shù)如下:
液相條件:a)流動(dòng)相成分:A.0.2vol.%甲酸，B.甲醇；b)進(jìn)樣量:10yL ；c)流速:0.2mL/min ；d)柱溫:30°C；e)運(yùn)行時(shí)間:8min ；f)色譜柱:Acquity UPLC BEH ；g)梯度:如表I所示。
[0011]質(zhì)譜條件:a)脫溶劑氣溫度:350°C ;b)源溫度:150°C ;c)毛細(xì)管電壓:3000V ;d)脫溶劑氣流速:650L/h ;e)錐氣流速:50L/h。設(shè)置定性和定量離子見(jiàn)表2。
[0012](7)對(duì)色譜質(zhì)譜分析圖進(jìn)行分析，即完成檢測(cè)。
[0013]上述方法中，步驟(1)所述的微孔纖維膜的孔徑為0.45 μ m。
[0014]上述方法中，步驟(1)所述的懸浮顆粒物的質(zhì)量與萃取劑的體積比為Ig:15_20mlο
[0015]上述方法中，步驟(1)所述的萃取劑為甲醇。
[0016]上述方法中，步驟(1)所述的振蕩器為HDL公司的HZQ-F160型振蕩培養(yǎng)箱，轉(zhuǎn)速為100-200次/min ;超聲波萃取機(jī)為KQ-100DE型超聲波萃取機(jī)，超聲頻率為23_40kHz。
[0017]上述方法中，步驟(2)所述的有機(jī)濾膜的孔徑為0.22 μ m。
[0018]上述方法中，步驟(3)所述的脫水干燥劑為無(wú)水硫酸鈉。
[0019]上述方法中，步驟(5 )所述的定容有機(jī)溶劑為甲醇。
[0020]上述方法中，步驟(6)所述的內(nèi)標(biāo)物根據(jù)實(shí)際水體殘留情況選擇，本方法采用沙拉沙星或洛美沙星，結(jié)構(gòu)和氧氟沙星類似，在目標(biāo)水體未檢出的氟喹諾酮類物質(zhì)。內(nèi)標(biāo)物不僅僅局限于這兩種，只要是同類物質(zhì)，其結(jié)構(gòu)相似，且在所檢測(cè)的水樣中沒(méi)有檢出均可。
[0021]上述方法中，步驟(6)所述的超高壓液相色譜串聯(lián)三級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用儀器為WatersXevo TQ MS Acquity UPLC System,儀器自帶的超高壓液相色譜柱(Acquity UPLC BEH)?
[0022]表1流動(dòng)相梯度洗脫程序

【權(quán)利要求】
1.一種水中懸浮顆粒物上痕量氧氟沙星萃取富集和定量的方法，其特征在于所述方法步驟如下: (1)取目標(biāo)水樣2000-4000ml，用微孔纖維膜過(guò)濾，收集過(guò)濾后的濾膜及表面截留的懸浮顆粒物，將濾膜晾干后剪成碎片置于三角瓶中，用量筒量取適量萃取劑倒入三角瓶中，控制懸浮顆粒物的質(zhì)量與萃取劑的體積比為Ig:15-20ml ;用封口膜密封好后置于振蕩培養(yǎng)箱中，溫度設(shè)定為4-10°C，關(guān)閉光照使其黑暗，轉(zhuǎn)速設(shè)定為100-200次/min，振蕩8_12h后，將三角瓶取出，進(jìn)行超聲波萃取，萃取時(shí)間20-35min，得到萃取液； (2)用有機(jī)濾膜過(guò)濾步驟一得到的萃取液，同時(shí)將過(guò)濾后的萃取液轉(zhuǎn)移至K-D濃縮瓶中； (3)加入脫水干燥劑到步驟二K-D濃縮瓶中的萃取過(guò)濾液，吸干水份后，將K-D濃縮瓶放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行濃縮，濃縮溫度30-45°C，時(shí)間為10-20min ； (4)將步驟三濃縮后的液體，用氮?dú)獯祾咧馏w積為Iml以下，停止氮?dú)獯祾撸? (5)加入有機(jī)溶劑，將步驟四得到的濃縮液萃取過(guò)濾液定容至lmL，將定容后的液體轉(zhuǎn)移到安捷倫專用瓶中； (6)在步驟五得到的待測(cè)液中加入0.5ml的內(nèi)標(biāo)物，然后在超高壓液相色譜串聯(lián)三級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用儀器中檢測(cè)； (7)對(duì)色譜質(zhì)譜分析圖進(jìn)行分析，即完成檢測(cè)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量氧氟沙星萃取富集和定量的方法，其特征在于步驟(I)所述的微孔纖維膜的孔徑為0.45 μ m。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量氧氟沙星萃取富集和定量的方法，其特征在于步驟(I)所述的萃取劑為甲醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量氧氟沙星萃取富集和定量的方法，其特征在于步驟(I)所述的超聲頻率為23-40kHz。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量氧氟沙星萃取富集和定量的方法，其特征在于步驟(2)所述的有機(jī)濾膜的孔徑為0.22 μ m。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量氧氟沙星萃取富集和定量的方法，其特征在于步驟(3)所述的脫水干燥劑為無(wú)水硫酸鈉。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量氧氟沙星萃取富集和定量的方法，其特征在于步驟(3)所述的濃縮后的液體體積為l_2ml。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量氧氟沙星萃取富集和定量的方法，其特征在于步驟(5)所述的定容有機(jī)溶劑為甲醇。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量氧氟沙星萃取富集和定量的方法，其特征在于步驟(6)所述的內(nèi)標(biāo)物為沙拉沙星或者洛美沙星。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量氧氟沙星萃取富集和定量的方法，其特征在于步驟(6)所述的超高壓液相色譜串串聯(lián)三級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用儀器為Waters Xevo TQMS Acquity UPLC System,檢測(cè)參數(shù)如下: 液相條件:a)流動(dòng)相成分:A.0.2vol.%甲酸，B.甲醇；b)進(jìn)樣量JOyL5C)流速:.0.2 mL/min ；d)柱溫:30°C ;e)運(yùn)行時(shí)間:8min ;f)色譜柱:Acquity UPLC BEH ；g)梯度:0min:V(A)%-80, V (B) %-20, 5min:V(A)%-30, V(B)%-70,5.1min:V(A)%-0, V(B)%-100,.6.5min:V(A)%-0, V(B)%-100,6.6min:V(A)%-80, V(B)%-20, 8min:V(A)%-80, V(B)%-20 ； 質(zhì)譜條件:a)脫溶劑氣溫度:350°C ；b)源溫度:150°C ；c)毛細(xì)管電壓:3000V ；d)脫溶劑氣流速:650L/h ；e)錐氣流速:50L/h。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104133022SQ201410416658
【公開(kāi)日】2014年11月5日 申請(qǐng)日期:2014年8月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月22日
【發(fā)明者】徐勇鵬, 崔福義 申請(qǐng)人:哈爾濱工業(yè)大學(xué)