水中懸浮顆粒物上痕量吡哌酸萃取富集和定量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種水中懸浮顆粒物上痕量吡哌酸萃取富集和定量的方法，將目標(biāo)水樣用微孔纖維膜過濾，收集過濾后的濾膜，將濾膜晾干后剪成碎片置于三角瓶中，加入萃取劑密封、振蕩、超聲波萃?。挥糜袡C(jī)濾膜過濾萃取液，同時(shí)將過濾后的萃取液轉(zhuǎn)移至K-D濃縮瓶中；加入脫水干燥劑到萃取過濾液，吸干水份后，將K-D濃縮瓶放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行濃縮；將濃縮后的液體用氮?dú)獯祾咧馏w積為1ml以下；將濃縮液萃取過濾液定容至1mL后轉(zhuǎn)移到安捷倫專用瓶中；采用內(nèi)標(biāo)法，用高效液相色譜串聯(lián)三級質(zhì)譜聯(lián)用儀器進(jìn)行檢測；對色譜質(zhì)譜分析圖進(jìn)行分析，即完成檢測。本方法補(bǔ)充了水環(huán)境中懸浮顆粒物上吸附的吡哌酸的含量，補(bǔ)充了抗生素檢測的空白。
【專利說明】水中懸浮顆粒物上痕量卩比脈酸萃取富集和定量的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于環(huán)境監(jiān)測【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種水環(huán)境中吡哌酸的檢測方法，具體涉及一種水中顆粒物上吡哌酸萃取富集的定量方法。

【背景技術(shù)】
[0002]吡哌酸是第二代喹諾酮類抗生素藥物，抗菌活性和抗菌譜較萘啶酸(nalidixicacid)為強(qiáng)和廣，但不如氟喹諾酮類，對革蘭陰性桿菌，如大腸桿菌、綠膿桿菌、變形桿菌、克雷白桿菌、痢疾桿菌有較好的抗菌作用。與各種抗生素?zé)o交叉耐藥性。臨床主要用于敏感菌所致急性或慢性腎盂腎炎、尿路感染、膀胱炎、菌痢、中耳炎等。
[0003]吡哌酸口服后可部分被吸收，大部分未被代謝以原形經(jīng)腎臟排泄，給藥后24小時(shí)自尿液排出給藥量的58%-68%，約20%自糞便排泄，少量藥物在體內(nèi)代謝。因此，吡哌酸通過排泄物流入水環(huán)境中。近些年，國內(nèi)外水環(huán)境中痕量吡哌酸的報(bào)道很多,濃度由ng/L到μ g/L的量級，這些水環(huán)境中的吡哌酸，最終通過取水進(jìn)入到飲用水系統(tǒng)中，有效降解水中吡哌酸的技術(shù)需要開發(fā)。因此，為了確保飲用水安全，準(zhǔn)確檢測出水環(huán)境中、水處理系統(tǒng)內(nèi)痕量吡哌酸的方法是必備的前提。
[0004]目前，國內(nèi)外在萃取富集和定量檢測水中痕量吡哌酸的技術(shù)上也不斷發(fā)展，常見的報(bào)道有固相萃取協(xié)同高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的方法，在進(jìn)行固相萃取之前，所有水樣品需要經(jīng)過0.45 μ m的濾膜過濾，溶解態(tài)的吡哌酸經(jīng)過固相萃取后，富集之后，檢測。這些方法局限在溶解態(tài)吡哌酸的定量上。有研究報(bào)道，吡哌酸屬于羧基酸物質(zhì)，很容易吸附在顆粒物表面，因此，顆粒物表面的吡哌酸很有必要萃取下來，進(jìn)行定量，這樣，可以全方位的掌握水中吡哌酸的污染現(xiàn)狀，為解析吡哌酸在水環(huán)境中的遷移規(guī)律，在水處理系統(tǒng)中的衰減規(guī)律，都有重要的支撐作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種水中懸浮顆粒物上痕量吡哌酸萃取富集和定量的方法。
[0006]本發(fā)明的目的是通過以下將數(shù)據(jù)方案實(shí)現(xiàn)的:
(I)取目標(biāo)水樣2000-4000ml，用微孔纖維膜過濾，收集過濾后的濾膜及表面截留的懸浮顆粒物，將濾膜晾干后剪成碎片置于三角瓶中，用量筒量取適量萃取劑倒入三角瓶中；用封口膜密封好后置于振蕩培養(yǎng)箱中，溫度設(shè)定為4-10°C，關(guān)閉光照使其黑暗，轉(zhuǎn)速設(shè)定為100-200次/min，振蕩8_12h后，將三角瓶取出，進(jìn)行超聲波萃取，萃取時(shí)間20_35min，得到萃取液。
[0007](2)用有機(jī)濾膜過濾步驟一得到的萃取液，同時(shí)將過濾后的萃取液轉(zhuǎn)移至K-D濃縮瓶中。
[0008](3)加入脫水干燥劑到步驟二 K-D濃縮瓶中的萃取過濾液，吸干水份后，將K-D濃縮瓶放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行濃縮，濃縮溫度30-45°C，時(shí)間為10-20min，濃縮后體積為l_2ml為宜。
[0009](4)將步驟三濃縮后的液體，用氮?dú)獯祾咧馏w積為Iml以下，停止氮?dú)獯祾摺?br> [0010](5)將步驟四得到的濃縮液萃取過濾液定容至lmL，將定容后的液體轉(zhuǎn)移到安捷倫專用瓶中。
[0011](6)在步驟五得到的待測液中加入0.5ml的內(nèi)標(biāo)物，然后在超高壓液相色譜串聯(lián)三級質(zhì)譜聯(lián)用儀器中檢測，檢測參數(shù)如下:
液相條件:a)流動相成分:A.0.2vol.%甲酸，B.甲醇；b)進(jìn)樣量:10yL ；c)流速:0.2mL/min ；d)柱溫:30°C；e)運(yùn)行時(shí)間:8min ；f)色譜柱:Acquity UPLC BEH ；g)梯度:如表I所示。
[0012]質(zhì)譜條件:a)脫溶劑氣溫度:350°C ；b)源溫度:150°C ；c)毛細(xì)管電壓:3000V ；d)脫溶劑氣流速:650L/h ;e)錐氣流速:50L/h。設(shè)置定性和定量離子見表2。
[0013](7)對色譜質(zhì)譜分析圖進(jìn)行分析，即完成檢測。
[0014]上述方法中，步驟(1)所述的微孔纖維膜的孔徑為0.45 μ m。
[0015]上述方法中，步驟(1)所述的懸浮顆粒物的質(zhì)量與萃取劑的體積比為Ig:15_20mlο
[0016]上述方法中，步驟(1)所述的萃取劑為甲醇。
[0017]上述方法中，步驟(1)所述的振蕩器為HDL公司的HZQ-F160型振蕩培養(yǎng)箱，轉(zhuǎn)速為100-200次/min ;超聲波萃取機(jī)為KQ-100DE型超聲波萃取機(jī)，超聲頻率為23_40kHz。
[0018]上述方法中，步驟(2)所述的有機(jī)濾膜的孔徑為0.22 μ m。
[0019]上述方法中，步驟(3)所述的脫水干燥劑為無水硫酸鈉。
[0020]上述方法中，步驟(5)所述的定容有機(jī)溶劑為甲醇。
[0021]上述方法中，步驟(6)所述的內(nèi)標(biāo)物根據(jù)實(shí)際水體殘留情況選擇，本方法采用沙拉沙星或洛美沙星，結(jié)構(gòu)和吡哌酸類似，在目標(biāo)水體未檢出的氟喹諾酮類物質(zhì)。內(nèi)標(biāo)物不僅僅局限于這兩種，只要是同類物質(zhì)，其結(jié)構(gòu)相似，且在所檢測的水樣中沒有檢出均可。
[0022]上述方法中，步驟(6)所述的超高壓液相色譜串聯(lián)三級質(zhì)譜聯(lián)用儀器為WatersXevo TQ MS Acquity UPLC System,儀器自帶的超高壓液相色譜柱(Acquity UPLC BEH)?
[0023]表1流動相梯度洗脫程序

【權(quán)利要求】
1.一種水中懸浮顆粒物上痕量吡哌酸萃取富集和定量的方法，其特征在于所述方法步驟如下: (1)取目標(biāo)水樣2000-4000ml，用微孔纖維膜過濾，收集過濾后的濾膜及表面截留的懸浮顆粒物，將濾膜晾干后剪成碎片置于三角瓶中，用量筒量取適量萃取劑倒入三角瓶中，控制懸浮顆粒物的質(zhì)量與萃取劑的體積比為Ig:15-20ml ;用封口膜密封好后置于振蕩培養(yǎng)箱中，溫度設(shè)定為4-10°C，關(guān)閉光照使其黑暗，轉(zhuǎn)速設(shè)定為100-200次/min，振蕩8_12h后，將三角瓶取出，進(jìn)行超聲波萃取，萃取時(shí)間20-35min，得到萃取液； (2)用有機(jī)濾膜過濾步驟一得到的萃取液，同時(shí)將過濾后的萃取液轉(zhuǎn)移至K-D濃縮瓶中； (3)加入脫水干燥劑到步驟二K-D濃縮瓶中的萃取過濾液，吸干水份后，將K-D濃縮瓶放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行濃縮，濃縮溫度30-45°C，時(shí)間為10-20min ； (4)將步驟三濃縮后的液體，用氮?dú)獯祾咧馏w積為Iml以下，停止氮?dú)獯祾撸? (5)加入有機(jī)溶劑，將步驟四得到的濃縮液萃取過濾液定容至lmL，將定容后的液體轉(zhuǎn)移到安捷倫專用瓶中； (6)在步驟五得到的待測液中加入0.5ml的內(nèi)標(biāo)物，然后在超高壓液相色譜串聯(lián)三級質(zhì)譜聯(lián)用儀器中檢測； (7)對色譜質(zhì)譜分析圖進(jìn)行分析，即完成檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量吡哌酸萃取富集和定量的方法，其特征在于步驟(I)所述的微孔纖維膜的孔徑為0.45 μ m。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量吡哌酸萃取富集和定量的方法，其特征在于步驟(I)所述的萃取劑為甲醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量吡哌酸萃取富集和定量的方法，其特征在于步驟(I)所述的超聲頻率為23-40kHz。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量吡哌酸萃取富集和定量的方法，其特征在于步驟(2)所述的有機(jī)濾膜的孔徑為0.22 μ m。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量吡哌酸萃取富集和定量的方法，其特征在于步驟(3)所述的脫水干燥劑為無水硫酸鈉。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量吡哌酸萃取富集和定量的方法，其特征在于步驟(3)所述的濃縮后的液體體積為l-2ml。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量吡哌酸萃取富集和定量的方法，其特征在于步驟(5)所述的定容有機(jī)溶劑為甲醇。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量吡哌酸萃取富集和定量的方法，其特征在于步驟(6)所述的內(nèi)標(biāo)物為沙拉沙星或者洛美沙星。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水中懸浮顆粒物上痕量吡哌酸萃取富集和定量的方法，其特征在于步驟(6)所述的超高壓液相色譜串串聯(lián)三級質(zhì)譜聯(lián)用儀器為Waters Xevo TQ MSAcquity UPLC System,檢測參數(shù)如下: 液相條件:a)流動相成分:A.0.2vol.%甲酸，B.甲醇；b)進(jìn)樣量=1yL5C)流速:0.2 mL/min ；d)柱溫:30°C ;e)運(yùn)行時(shí)間:8min ;f)色譜柱:Acquity UPLC BEH ；g)梯度:0min:V(A)%-80, V (B) %-20, 5min:V(A)%-30, V(B)%-70,5.1min:V(A)%-0, V(B)%-100,.6.5min:V(A)%-0, V(B)%-100,6.6min:V(A)%-80, V(B)%-20, 8min:V(A)%-80, V(B)%-20 ； 質(zhì)譜條件:a)脫溶劑氣溫度:350°C ；b)源溫度:150°C ；c)毛細(xì)管電壓:3000V ；d)脫溶劑氣流速:650L/h ；e)錐氣流速:50L/h。
【文檔編號】G01N30/06GK104133033SQ201410416629
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2014年8月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月22日
【發(fā)明者】徐勇鵬, 崔福義, 時(shí)文歆, 田家宇, 沈吉敏, 齊宏, 趙晟鋅 申請人:哈爾濱工業(yè)大學(xué)