紙張中溶劑綠7、2,4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽含量的測定方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種紙張中溶劑綠7、2,4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽含量的測定方法，包括樣品溶液的制備，液相色譜分析及測定結(jié)果的計算等步驟。經(jīng)優(yōu)化之后的檢測方法具有檢測時間短、操作簡便、靈敏度高、回收率高及重復(fù)性好等優(yōu)點，本發(fā)明方法的色譜條件使溶劑綠7、2,4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯的色譜峰與雜質(zhì)色譜峰分離較好，并且具有較好的相關(guān)性，檢出限在0.23~0.40μg/g之間，平均回收率分別為96.4％、88.9％和96.2％，樣品測試結(jié)果的平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.91%、2.06％和3.08％，說明本法的回收率較高，重復(fù)性較好。
【專利說明】紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及 其鈉鹽含量的測定方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽含量 的測定方法，屬于紙張材料的理化檢驗【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 溶劑綠7,中文別名：8_羥基-1,3, 6-芘三磺酸三鈉；8-羥基芘-1,3, 6-三磺酸 三鈉鹽；英文名稱：Solvent Green 7。主要用于油漆、塑料制品等的著色，還可以用于突 光筆，工業(yè)鍋爐的示蹤劑等。屬于刺激性物質(zhì)，對眼睛、呼吸道和皮膚有刺激作用。我國 GB7916-87《化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定了化妝品成分中暫用著色劑的種類、允許的使用范圍 及限制條件，其中就規(guī)定溶劑綠7為暫用著色劑。
[0003] 2, 4-二硝基苯酚（2, 4-Dinitrophenol，簡稱 DNP)，分子式 C6H4N205, CAS 號 51-28-5。常溫下為黃色固態(tài)結(jié)晶，具有香甜的發(fā)霉氣味。緩慢加熱時升華，并有揮發(fā)性。 DNP溶于乙酸乙酯、丙酮、氯仿、吡啶、四氯化碳、甲苯、乙醇、苯和堿的水溶液，微溶于冷水。 它的鈉鹽溶于水。吸入、吞入或接觸皮膚時有毒害，并有蓄積性危害。是一種細(xì)胞代謝毒素。 DNP能夠通過運送質(zhì)子通過線粒體膜使氧化磷酸化解偶聯(lián)化，使得能量被大量消耗卻不被 用來制造 ATP。DNP目前主要用于科學(xué)研究和工業(yè)生產(chǎn)。有時被用來制造染料，合成其他有 機物，以及木材的防腐。同時還被用作顯影劑、炸藥和殺蟲劑的中間體。DNP被美國國家環(huán) 境保護局認(rèn)為是一種較嚴(yán)重的環(huán)境污染物。它可以通過機動車廢氣、工業(yè)垃圾燃燒以及空 氣中氮氣和其他化學(xué)物質(zhì)反應(yīng)進入大氣。DNP主要在土壤中由微生物降解。
[0004] 對羥基苯甲酸丙酯又名尼泊金丙酯，對羥基安息香酸丙酯，常以其鈉鹽的形式存 在。無色小結(jié)晶或白色粉末。幾乎不溶于冷水。無臭、稍有澀味。由對羥基苯甲酸與正丙 醇在硫酸存在下酯化，然后經(jīng)中和、水洗、甩干、精制為成品。主要用作食品、化妝品、飼料等 的防腐劑。與對羥基苯甲酸乙酯合用可提高防腐能力和溶解性。對霉菌、酵母與細(xì)菌有廣 泛的抗菌作用，其抗菌作用大于尼泊金乙酯。曾用于醬油、醬菜生產(chǎn)中的食品防腐劑?；瘖y 品防腐劑。屬酚類防腐劑。添加量0. 1%-1.0%。通常與尼泊金丁酯混合使用，具有良好的加 成性和協(xié)同性。吸入、攝入或經(jīng)皮膚吸收對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽對身體有害。對眼、粘 膜和上呼吸道和皮膚有刺激作用。
[0005] 目前我國暫無紙制品中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽 的國標(biāo)檢測方法，關(guān)于單獨測定其它樣品中這三種物質(zhì)的檢測方法也較為缺少，分別詳述 如下。
[0006] 文獻報道的C. I.溶劑綠7的分析方法主要有HPLC法。孫小穎等利用高效液相色 譜紫外法測定了化妝品中的9種水溶性著色劑，不同種類的化妝品采用不同的樣品前處理 方法提取后，用Diamonsil C18色譜柱分離，以乙腈-磷酸二氫鉀緩沖溶液（pH6)為流動相 進行梯度洗脫，檢測波長為240nm，15min內(nèi)可對9種目標(biāo)物同時進行檢測，且各化合物都達 到基線分離。經(jīng)測定，該方法的平均回收率（n=9)為85. 33%?100. 2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD) 為3. 68%?8. 20%，檢出限為0. 01?0. lmg/L。方法簡單、快速，能有效地提取、分離和測 定化妝品中9種水溶性著色劑。將該方法用于實際化妝品的檢測，結(jié)果令人滿意。
[0007] 2, 4-二硝基苯酚文獻報道的分析方法主要也是HPLC法。劉燕利用高效液相色譜 法建立了工業(yè)廢水中的2, 6-二硝基苯酚，2, 4-二硝基苯酚以及苦味酸同時測定的分析方 法，實驗證明該方法簡單快速、準(zhǔn)確實用。
[0008] 對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽是食品中常用的防腐劑成分之一。防腐劑的分析檢 測在國內(nèi)外受到高度關(guān)注，相關(guān)的檢測方法也很多，其中得到廣泛應(yīng)用的是高效液相色譜 法和氣相色譜法。趙孔祥等建立了乙腈超聲提取、高效液相色譜二極管陣列檢測快速測 定化妝品中的氫醌、水楊酸、苯酚、苯氧乙醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥 基苯甲酸丙酯，對羥基苯甲酸丁酯、雙氯酚、三氯生10種限用物質(zhì)含量的分析方法。對 提取方法、液相色譜條件和檢測條件進行了優(yōu)化，10種限用物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性范圍為 0. 01-0. lg/L，50、100、200mg/kg 3個加標(biāo)水平的回收率為80%?113%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD，n=7)為2. 2%-10. 0%，定量下限（L0Q)為10-50mg/kg。該方法簡便、高效、靈敏、準(zhǔn)確， 可滿足現(xiàn)有化妝品中相關(guān)限用物質(zhì)的檢測要求。劉奮等建立化妝品中常用防腐劑對羥基苯 甲酸酯類、苯甲酸、苯甲醇、卡松的測定方法。采用高效液相色譜法，以乙酸銨（0.02 mol/ L)-甲醇為流動相，采用梯度淋洗，同時測定化妝品中7種常用防腐劑。結(jié)果各防腐劑在 10?100μ g / mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（r) 0. 999)，平均回收率為91. 5%-95. 5%，相對 標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.3%-2. 5%。該法簡便，快速，靈敏，準(zhǔn)確，可用于化妝品中防腐劑的測定。氣相 色譜法也是用來檢測對羥基苯甲酸酯類的常用方法，其中李英等采用超聲抽提法對化妝品 中的苯甲醇、3甲基4異丙基苯酚、對羥基苯甲酸丁酯和2芐基4氯酚等18種防腐劑進行 了氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS)測定的研究。建立了一種簡單、快速、準(zhǔn)確測定化妝品中各種 防腐劑的測定方法。進行了樣品提取溶劑和超聲提取時間選擇以及線性、回收率、精密度試 驗。結(jié)果表明，該方法能夠有效地提取化妝品（口紅和香波）中的18種防腐劑，并可對 其進行GC-MS分離和鑒定。18種防腐劑的平均回收率為91. 66%?100. 6%(n=7)，相對標(biāo)準(zhǔn) 偏差為 〇· 46% ?6· 23%(n=7)，最低檢測限為 0· 05 ?0· 5 mg/L?！禛B/T 5009. 31-2003 食品 中對羥基苯甲酸酯類的測定》中規(guī)定試樣酸化后，對羥基苯甲酸酯類用乙醚提取濃縮后，用 具氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行分離測定，外標(biāo)法定量。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的旨在克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和 對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽含量的測定方法，本發(fā)明在梳理種類龐雜檢測方法的基礎(chǔ)上， 考察了紙張的萃取條件，優(yōu)化了色譜分離的條件，采用高效液相色譜紫外檢測器建立了紙 張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽的檢測方法，為煙用紙張中 有害物質(zhì)的測定提供相關(guān)技術(shù)支持。
[0010] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下：本發(fā)明的紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯 甲酸丙酯及其鈉鹽含量的測定方法，包括以下步驟： (1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：分別配制具有濃度梯度的溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯 甲酸丙酯的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；具體配制方法如下：分別準(zhǔn)確稱取l〇〇mg(精確至0. OOOlg)的 溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯，用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，定容 至刻度并搖勻，作為一級母液；移取一級母液10 mL至100 mL容量瓶中，甲醇定容，作為二 級母液；分別準(zhǔn)確移取100 uL、500 yL、1000 yL、2500 yL、5000 yL二級母液至10mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，保存于2°C -6°C，現(xiàn)配現(xiàn)用。
[0011] (2)樣品溶液的制備：使用0. 5 m〇L/L的乙酸銨水溶液，并用乙酸調(diào)制pH=5,與甲 醇配制成體積比為1:1的溶液為萃取溶液；選取紙張樣品，裁剪成l-2cm2的碎片，稱取1 g 樣品碎片，精確至0.1 mg，將樣品碎片置于50 mL具塞三角瓶中，準(zhǔn)確加入30 mL萃取溶液， 50 °C萃取lh,靜置放置室溫，用0. 45 μ m有機濾膜過濾于色譜小瓶中上樣分析； 所述紙張樣品為接裝紙、內(nèi)襯紙、條與盒包裝紙中的任意一種，各紙張樣品的具體裁剪 方式如下：接裝紙的裁剪方式按照YC 171-2009的規(guī)定進行，即準(zhǔn)確裁切長200 mm，寬40 mm的接裝紙樣品（應(yīng)包含一個單邊）；內(nèi)襯紙的裁剪方式按照YC 264-2008的規(guī)定進行，即 裁剪面積約170cm2 (即相當(dāng)于普通卷煙軟盒包裝所采用的內(nèi)襯紙面積);卷煙條與盒包裝紙 的裁剪方式按照YC/T 207-2006的規(guī)定進行，即對硬盒包裝紙，參照印刷壓痕準(zhǔn)確裁取主 包裝面，面積為22. 0 cm X 5. 5 cm，對軟盒包裝紙，取一張軟盒包裝紙，面積為15. 5 cm X 10. 0 cm，對條包裝紙，在包裝正面中央?yún)^(qū)域，準(zhǔn)確裁取22. 0 cm X 5. 5 cm的樣品。
[0012] (3)液相色譜分析：利用液相色譜儀分別對標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液進行檢測分析； 色譜分析條件為色譜柱采用XBridge Amide液相色譜柱（4. 6 X 250mm，3. 5μηι粒徑)， 色譜柱溫度為30 °C，進樣量為5 μ L，流速為0.6 mL/min;檢測波長：溶劑綠7 :246 nm; 2,4-二硝基苯酚：362腹，對羥基苯甲酸丙酯：257腹，流動相4乙酸銨水溶液（？!1=5)，8為 甲醇，采用梯度洗脫程序，OminA 為 80%，0-5minA :80%-50%，5-10minA :50%-10%，10-13minA : 10%-80%，13-15minA :80%。以保留時間定性，峰面積外標(biāo)法定量。
[0013] (4)紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽含量的計算。 具體計算方法如下：首先以標(biāo)準(zhǔn)溶液所檢測出的目標(biāo)物的色譜峰面積對其相應(yīng)濃度進行回 歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線；然后將樣品溶液檢出的目標(biāo)物的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，即得 到樣品溶液中的溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽的濃度，由此即 可計算出紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽的含量。
[0014] 本發(fā)明的檢測方法對樣品的處理方法和色譜條件進行了優(yōu)化，達到了以下效果： (1) 檢測時間短：采用本發(fā)明測定紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙 酯及其鈉鹽含量周期僅需要15分鐘； (2) 本發(fā)明具有操作簡便、靈敏度高、回收率高及重復(fù)性好的優(yōu)點：本發(fā)明方法的色譜 條件使紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯色譜峰與雜質(zhì)色譜峰分離較 好，并且具有較好的相關(guān)性，檢出限在0. 23、. 40 μ g/g之間，平均回收率分別為96. 4%、 88. 9%和96. 2%，樣品測試結(jié)果的平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2. 91%、2. 06%和3. 08%，說明 本法的回收率較高,重復(fù)性較好。
[0015]

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016] 圖1為本發(fā)明的測定方法的流程圖； 圖2為紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程及 線性回歸系數(shù)坐標(biāo)圖； 圖3為標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖； 圖4為樣品溶液的色譜圖。
[0017]

【具體實施方式】
[0018] 本發(fā)明以下結(jié)合實施例（附圖）做進一步描述： 實施例1 本實施例對紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽含量的測 定方法如下(所述檢測方法的流程圖如圖1所示） (1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：分別準(zhǔn)確稱取100mg(精確至0. OOOlg)的溶劑綠7、2, 4-二硝基 苯酚和對羥基苯甲酸丙酯，用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，定容至刻度并搖勻，作為 一級母液；移取一級母液10 mL至100 mL容量瓶中，甲醇定容，作為二級母液；分別準(zhǔn)確移 取100 yL、500 yL、1000 yL、2500 yL、5000 yL二級母液至10mL容量瓶中，用甲醇定 容至刻度，得到系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，保存于2°C -6°C，現(xiàn)配現(xiàn)用。
[0019] (2)樣品溶液的制備：選用煙用接裝紙為試樣進行裁剪，以剪刀剪成（1-2) cm2的 碎片，混合均勻并置于天平上稱量，稱取lg樣品，精確至0.1 mg，將碎片置于50 mL具塞三 角瓶中，準(zhǔn)確加入30 mL萃取溶液，50°C恒溫水浴60 min，用0. 45 μ m有機濾膜過濾于色譜 小瓶中通過高效液相色譜分析。
[0020] (3)色譜分析：所述的色譜分析條件為色譜柱采用XBridge Amide液相色譜柱 (4. 6 X 250mm，3. 5μπι粒徑)，色譜柱溫度為30 °C，進樣量為5 yL，流速為0. 6mL/min; 檢測波長：溶劑綠7 :246 nm ;2, 4-二硝基苯酚：362nm，對羥基苯甲酸丙酯：257nm，流動相： A乙酸銨水溶液（pH=5)，B為甲醇，采用梯度洗脫程序，OminA為80%，0-5minA :80%-50%， 5-10minA :50%-10%，10-13minA :10%-80%，13-15minA :80%。以保留時間定性，峰面積外標(biāo)法 定量，總洗脫時間為15min。標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜分析結(jié)果如圖3所示；樣品溶液的色譜分析結(jié) 果如圖4所示； (4)紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽含量的計算： 首先以標(biāo)準(zhǔn)溶液所檢測出的目標(biāo)物的色譜峰面積對其相應(yīng)濃度進行回歸分析，得到標(biāo) 準(zhǔn)曲線(如圖2所示）；與標(biāo)準(zhǔn)曲線相對應(yīng)的回歸方程、相關(guān)系數(shù)等數(shù)據(jù)如表1所示。
[0021] 表1紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

【權(quán)利要求】
1. 一種紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽含量的測定方 法，其特征在于：包括以下步驟： (1) 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：配制具有濃度梯度的溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸 丙酯的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； (2) 樣品溶液的制備：使用0. 5 m〇L/L的乙酸銨水溶液，并用乙酸調(diào)制pH=5,與甲醇配 制成體積比為1:1的溶液為萃取溶液；選取紙張樣品，裁剪成l-2cm 2碎片，稱取1 g樣品碎 片，精確至0.1 mg，將樣品碎片置于50 mL具塞三角瓶中，準(zhǔn)確加入30 mL萃取溶液，50 °C 萃取lh，靜置放置室溫，用0. 45 μ m有機濾膜過濾于色譜小瓶中上樣分析； (3) 液相色譜分析：利用液相色譜儀分別對標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液進行檢測分析；色 譜分析條件為色譜柱采用XBridge Amide液相色譜柱，規(guī)格4. 6 X 250mm，3. 5 μ m粒徑， 色譜柱溫度為301：，進樣量為5 1^，流速為0.6 111171^11;檢測波長：溶劑綠7:246 11111; 2, 4-二硝基苯酚：362nm，對羥基苯甲酸丙酯：257nm，流動相：A乙酸銨水溶液（pH=5)，B為 甲醇，采用梯度洗脫程序，OminA 為 80%，0-5minA :80%-50%，5-10minA :50%-10%，10-13minA : 10%-80%，13-15minA :80%，以保留時間定性，峰面積外標(biāo)法定量； (4) 紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽含量的計算。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其 鈉鹽含量的測定方法，其特征在于：所述標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制方法如下：分別準(zhǔn)確稱取l〇〇mg的 溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯，用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，定容 至刻度并搖勻，作為一級母液；移取一級母液10 mL至100 mL容量瓶中，甲醇定容，作為二 級母液；分別準(zhǔn)確移取100 uL、500 yL、1000 yL、2500 yL、5000 yL二級母液至10mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其 鈉鹽含量的測定方法，其特征在于：所述紙張樣品為接裝紙、內(nèi)襯紙、條與盒包裝紙中的任 意一種，各紙張樣品的具體裁剪方式如下：接裝紙的裁剪方式按照YC 171-2009的規(guī)定進 行，即準(zhǔn)確裁切長200 mm，寬40 mm的接裝紙樣品，應(yīng)包含一個單邊；內(nèi)襯紙的裁剪方式按 照YC 264-2008的規(guī)定進行，即裁剪面積約170cm2即相當(dāng)于普通卷煙軟盒包裝所采用的內(nèi) 襯紙面積；條與盒包裝紙的裁剪方式按照YC/T 207-2006的規(guī)定進行，即對硬盒包裝紙，參 照印刷壓痕準(zhǔn)確裁取主包裝面，面積為22.0 cm X 5. 5 cm，對軟盒包裝紙，取一張軟盒包 裝紙，面積為15. 5 cm X 10. 0 cm，對條包裝紙，在包裝正面中央?yún)^(qū)域，準(zhǔn)確裁取22.0 cm X 5. 5 cm的樣品。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其 鈉鹽含量的測定方法，其特征在于：所述的紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲 酸丙酯及其鈉鹽含量的計算方法如下：首先以標(biāo)準(zhǔn)溶液所檢測出的目標(biāo)物的色譜峰面積對 其相應(yīng)濃度進行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線；然后將樣品溶液檢出的目標(biāo)物的色譜峰面積，代 入標(biāo)準(zhǔn)曲線，即得到樣品溶液中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽 的濃度，由此即可計算出紙張中溶劑綠7、2, 4-二硝基苯酚和對羥基苯甲酸丙酯及其鈉鹽 的含量。
【文檔編號】G01N30/88GK104122362SQ201410380094
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2014年7月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月31日
【發(fā)明者】張洪非, 楊飛, 邊照陽, 唐綱嶺, 劉珊珊, 范子彥, 李中皓, 王穎, 張艷革 申請人:國家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心