一種淫羊藿生產(chǎn)中總黃酮的檢測(cè)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種淫羊藿生產(chǎn)中總黃酮的檢測(cè)方法，包括以下步驟：（1）制備淫羊藿提取液，取樣；（2）利用AOTF近紅外光譜儀采集與光譜相對(duì)應(yīng)的近紅外光譜；（3）紫外分光光度法離線檢測(cè)采集樣品的總黃酮含量；（4）利用數(shù)學(xué)計(jì)量軟件關(guān)聯(lián)近紅外光譜數(shù)據(jù)和離線檢測(cè)數(shù)據(jù)，建立校正模型；（5）利用建立的校正模型在線檢測(cè)生產(chǎn)過(guò)程中提取液中總黃酮含量。本發(fā)明采集提取工藝中的校正樣品集，采用紫外分光光度法檢測(cè)樣品總黃酮含量，利用TheUnscambler分析軟件建立校正模型，使用建立的好校正模型對(duì)生產(chǎn)過(guò)程中淫羊藿提取液總黃酮含量實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。本發(fā)明將近紅外光譜技術(shù)成功運(yùn)用于中藥生產(chǎn)過(guò)程中，實(shí)現(xiàn)中藥生產(chǎn)過(guò)程的實(shí)時(shí)、在線的質(zhì)量控制。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種淫羊藿生產(chǎn)中總黃酮的檢測(cè)方法 【技術(shù)領(lǐng)域】
[〇〇〇1] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種淫羊藿生產(chǎn)中總黃酮的檢測(cè)方法。 【背景技術(shù)】
[0002] 淫羊藿為小檗科植物，具有很高的藥用價(jià)值。味性歸經(jīng)：辛、甘，溫。歸肝、腎經(jīng)主 治功能：補(bǔ)腎陽(yáng)，強(qiáng)筋骨，祛風(fēng)濕。其提取液中主要有含黃酮類(lèi)化合物、木脂素、生物堿、揮 發(fā)油等。對(duì)淫羊藿提取液的評(píng)價(jià)主要以其中總黃酮的含量為標(biāo)準(zhǔn)，總黃酮的含量檢測(cè)以分 光光度法計(jì)算而得。如要進(jìn)一步得到其中淫羊藿苷的含量則需要使用高效液相色譜法，此 種方法需要消耗大量藥品及試劑，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，檢測(cè)結(jié)果滯后，不能滿足現(xiàn)代化大生產(chǎn)對(duì) 時(shí)效性的要求，及在線質(zhì)量控制的需求。近紅外光譜技術(shù)作為一種在線監(jiān)測(cè)技術(shù)，具有快 速無(wú)無(wú)損的特點(diǎn)，已在眾多領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，本實(shí)驗(yàn)以聲光可調(diào)濾光器（Acousto-Optic Tunable Filter，A0TF)近紅外光譜儀在線采集提取工藝階段管道中淫羊藿提取液的近紅 外光譜，建立定量模型并預(yù)測(cè)，實(shí)現(xiàn)近紅外對(duì)中藥質(zhì)控中快速檢測(cè)及保障中藥產(chǎn)品質(zhì)量的 穩(wěn)定。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種淫羊藿生產(chǎn)中總黃酮的檢測(cè)方 法，以實(shí)現(xiàn)淫羊藿生產(chǎn)過(guò)程中總黃酮含量的在線質(zhì)量控制。
[0004] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0005] -種淫羊藿生產(chǎn)中總黃酮的檢測(cè)方法，包括以下步驟：
[0006] (1)制備淫羊藿提取液，取樣；
[0007] (2)利用A0TF近紅外光譜儀采集與光譜相對(duì)應(yīng)的近紅外光譜；
[0008] (3)紫外分光光度法離線檢測(cè)采集樣品的總黃酮含量；
[0009] (4)利用數(shù)學(xué)計(jì)量軟件關(guān)聯(lián)近紅外光譜數(shù)據(jù)和離線檢測(cè)數(shù)據(jù)，建立校正模型； [〇〇1〇] (5)利用建立的校正模型在線檢測(cè)生產(chǎn)過(guò)程中提取液中總黃酮含量。
[0011] 在上述淫羊藿生產(chǎn)中總黃酮的檢測(cè)方法中，淫羊藿提取液的制備包括：將淫羊藿 25?50kg/罐投入多能提取罐，加水提取1?3次，第一次提取的加10?15倍體積量水， 第二、三次均加10倍體積量水，各沸騰1?2小時(shí)；提取液經(jīng)60?100目篩粗，冷卻至40? 60°C，離心液合并，備用。
[0012] 在上述淫羊藿生產(chǎn)中總黃酮的檢測(cè)方法中，取樣方法包括：在提取罐體的管道上 安裝的取樣閥取樣，記錄取樣時(shí)間，取樣方案為前40分鐘每分鐘取一次樣，后20分鐘每5 分鐘取一次樣，每次取樣50mL。
[0013] 在上述淫羊藿生產(chǎn)中總黃酮的檢測(cè)方法中，步驟（2)采集近紅外光譜所使用的是 Brimrose公司的Luminar3060型近紅外光譜儀，加裝流體探頭。步驟（2)生產(chǎn)全程采集光 譜，光譜采集采用"Ratio mode"通過(guò)連接于流體測(cè)樣器的光纖探頭以透視的方式對(duì)管道內(nèi) 的淫羊藿水提液進(jìn)行光譜采集。波長(zhǎng)范圍1100?2300 ;波長(zhǎng)增量：2. Onm，掃描次數(shù)：200。 采用透射檢測(cè)方式，光程為5nm。
[0014] 在上述淫羊藿生產(chǎn)中總黃酮的檢測(cè)方法中，步驟（4)所述的數(shù)學(xué)計(jì)量軟件是CAMA 公司The Unscrambler分析軟件。
[0015] 在上述淫羊藿生產(chǎn)中總黃酮的檢測(cè)方法中，步驟（3)紫外分光光度法為精密量取 淫羊藿水提液〇.5mL，置50mL容量瓶中。加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取淫羊 藿苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每lmL含10 μ g的溶液，作為對(duì)照品溶液。分別取 供試品溶液和對(duì)照品溶液，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在270nm波長(zhǎng)處 測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。
[0016] 在上述淫羊藿生產(chǎn)中總黃酮的檢測(cè)方法中，步驟（4)光譜采用一階微分9點(diǎn)平滑 (Savitzy-golay)對(duì)原始光譜進(jìn)行預(yù)處理。將經(jīng)過(guò)處理的光譜數(shù)據(jù)和離線的檢測(cè)數(shù)據(jù)相關(guān) 聯(lián)，米用偏最小二乘法（PLS1)，交叉-驗(yàn)證法（Cross-validation)，用The Uscrambler定 量分析軟件建立模型。
[0017] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了淫羊藿生產(chǎn)過(guò)程中對(duì) 總黃酮含量的實(shí)時(shí)在線檢測(cè)。包括采集提取工藝中的校正樣品集，采用紫外分光光度法檢 測(cè)樣品總黃酮含量，利用The Unscambler分析軟件建立校正模型，使用建立的好校正模型 對(duì)生產(chǎn)過(guò)程中淫羊藿提取液總黃酮含量實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。本發(fā)明將近紅外光譜技術(shù)成功運(yùn)用于中 藥生產(chǎn)過(guò)程中，實(shí)現(xiàn)中藥生產(chǎn)過(guò)程的實(shí)時(shí)、在線的質(zhì)量控制。 【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】：
[0018] 圖1為提取第一次煎煮原始光譜圖；
[0019] 圖2為提取第二次原始光譜圖；
[0020] 圖3為提取三煎煮原始光譜圖；
[0021] 圖4為提取一煎PLS1回歸模型圖；
[0022] 圖5為提取二煎PLS1回歸模型圖；
[0023] 圖6為提取三煎PLS1回歸模型圖。 【具體實(shí)施方式】：
[0024] 實(shí)施例1 :
[0025] 1、制備淫羊藿提取液
[0026] 將淫羊藿25kg/罐投入多能提取罐，加水提取3次，第一次提取的加15倍量水，第 二、三次均加10倍體積量水，各沸騰1小時(shí)。提取液經(jīng)60?100目篩粗，冷卻至40?60°C， 離心液合并，備用。
[0027] 2、取樣方法
[0028] 水提前40分鐘每分鐘去一次樣，后20分鐘每5分鐘取一次樣。每次取樣50mL
[0029] 3、總黃酮檢測(cè)方法
[0030] 精密量取淫羊藿水提液0. 5mL，置50mL容量瓶中。加甲醇至刻度，搖勻，作為供試 品溶液。另取淫羊藿苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每lmL含10 μ g的溶液，作為對(duì)照 品溶液。分別取供試品溶液和對(duì)照品溶液，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見(jiàn)分光光度法， 在270nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。
[0031] 4、光譜采集與處理
[0032] 光譜采集采用"Ratio mode"通過(guò)連接于流體測(cè)樣器的光纖探頭以透視的方式對(duì) 管道內(nèi)的淫羊藿水提液進(jìn)行光譜采集。波長(zhǎng)范圍1100?2300 ;波長(zhǎng)增量：2. Onm掃描次數(shù)： 200。采用透射檢測(cè)方式，光程為5nm，
[0033] 光譜采用一階微分9點(diǎn)平滑（Savitzy-golay)對(duì)原始光譜進(jìn)行預(yù)處理。將經(jīng) 過(guò)處理的光譜數(shù)據(jù)和離線的檢測(cè)數(shù)據(jù)相關(guān)聯(lián)，采用偏最小二乘法（PLS1)，交叉-驗(yàn)證法 (Cross-validation)，用The Uscrambler定量分析軟件建立模型。
[0034] 5、預(yù)測(cè)
[0035] 本次共建立三個(gè)模型，分別為提取第一次煎煮、提取第二次煎煮、提取第三次煎 煮，分別對(duì)參與建模樣品和隨機(jī)抽取的樣品進(jìn)行預(yù)測(cè)結(jié)果如表1、2、3、4。通過(guò)模型的內(nèi)部 驗(yàn)證和外部驗(yàn)證，A0TF近紅外光譜在線檢測(cè)預(yù)測(cè)淫羊藿生產(chǎn)過(guò)程中總黃酮含量的相對(duì)偏差 在10%左右，在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中可有效的實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)在線的質(zhì)量控制。在后期的研究中，將 投料的原料批次、產(chǎn)地等因素綜合考慮建模，減小系統(tǒng)誤差。后期模型維護(hù)需要加大數(shù)據(jù)采 集量，以豐富模型梯度，使得模型更加豐滿，梯度得以展開(kāi)，使模型適應(yīng)性更好更加準(zhǔn)確。圖 1為提取第一次煎煮原始光譜圖；圖2為提取第二次原始光譜圖；圖3為提取三煎煮原始光 譜圖；圖4為提取一煎PLS1回歸模型圖；圖5為提取二煎PLS1回歸模型圖；圖6為提取三 煎PLS1回歸模型圖。
[〇〇36] 表1第一次煎煮模型的內(nèi)部驗(yàn)證結(jié)果
[0037]
【權(quán)利要求】
1. 一種淫羊藿生產(chǎn)中總黃酮的檢測(cè)方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 制備淫羊藿提取液，取樣； (2) 利用AOTF近紅外光譜儀采集與光譜相對(duì)應(yīng)的近紅外光譜； (3) 紫外分光光度法離線檢測(cè)采集樣品的總黃酮含量； (4) 利用數(shù)學(xué)計(jì)量軟件關(guān)聯(lián)近紅外光譜數(shù)據(jù)和離線檢測(cè)數(shù)據(jù)，建立校正模型； (5) 利用建立的校正模型在線檢測(cè)生產(chǎn)過(guò)程中提取液中總黃酮含量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的淫羊藿生產(chǎn)中總黃酮的檢測(cè)方法，其特征在于淫羊藿提取 液的制備包括：將淫羊藿25飛0 kg/罐投入多能提取罐，加水提取1~3次，第一次提取的加 ΚΓ15倍體積量水，第二、三次均加10倍體積量水，各沸騰廣2小時(shí)；提取液經(jīng)60?100目 篩粗，冷卻至40?60 °C，離心液合并，備用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的淫羊藿生產(chǎn)中總黃酮的檢測(cè)方法，其特征在于取樣方法包 括：在提取罐體的管道上安裝的取樣閥取樣，記錄取樣時(shí)間，取樣方案為前40分鐘每分鐘 取一次樣，后20分鐘每5分鐘取一次樣，每次取樣50 mL。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的淫羊藿生產(chǎn)中總黃酮的檢測(cè)方法，其特征在于：步驟（2)采集 近紅外光譜所使用的是Brimrose公司的Luminar3060型近紅外光譜儀，加裝流體探頭。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的淫羊藿生產(chǎn)中總黃酮的檢測(cè)方法，其特征在于：步驟（2)所述 采集的光譜的波長(zhǎng)范圍1100?2300 ;波長(zhǎng)增量：2. 0 nm，掃描次數(shù)：200 ;采用透射檢測(cè)方 式，光程為5nm。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的淫羊藿生產(chǎn)中總黃酮的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟（4)所述 的數(shù)學(xué)計(jì)量軟件是CAMA公司The Unscrambler分析軟件。
【文檔編號(hào)】G01N21/33GK104089915SQ201410339050
【公開(kāi)日】2014年10月8日 申請(qǐng)日期:2014年7月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月16日
【發(fā)明者】許定舟, 李菁, 劉翠紅, 楊麗, 李宇, 鐘鳴 申請(qǐng)人:廣州白云山漢方現(xiàn)代藥業(yè)有限公司