一種穩(wěn)定的同型半胱氨酸檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定的同型半胱氨酸檢測試劑盒，由試劑1和試劑2組成，本發(fā)明提供的試劑盒改善了先前的三試劑甚者更多試劑，在使用之前需要現(xiàn)場將試劑手工按比例混合的麻煩，對試劑在全自動生化分析儀器上的使用和推廣起到了很好的作用；同時，對試劑的組分進行了改進，使本試劑具有更好的穩(wěn)定性。
【專利說明】一種穩(wěn)定的同型半胱氨酸檢測試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定的同型半胱氨酸檢測試劑盒，屬于臨床體外檢測【技術(shù)領(lǐng)域】?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]同型半胱氨酸(Homocysteine，Hcy)又稱高半胱氨酸，是一種與半胱氨酸同系的、含硫含氨酸分解代謝的重要中間產(chǎn)物，不參與體蛋白質(zhì)合成。血漿Hcy是一個總稱，指血漿中所有形式的Hcy,包括還原型Hey,雙硫Hcy,混合雙硫半胱氨酸一 Hcy和混合雙硫蛋白質(zhì)-Hey:正常情況下游離Hey很少，主要以蛋白質(zhì)形式存在。很多因素如遺傳、營養(yǎng)、腎功能不全、藥物、激素等因素均可能影響體內(nèi)同型半胱氨酸的代謝，造成高Hey血癥。大量研究證明，高Hey是引起心、腦、外周血管病的一個新的、重要的獨立性危險因素，Hcy和高血壓之間有一定的相關(guān)性，提不聞Hcy水平可能是聞血壓的一個相對危險因素。有效控制Hcy水平對高血壓病例意義重大。
[0003]當(dāng)前同型半胱氨酸的檢測方法多種多樣，其中常見的方法有HPLc法、HPLC法、mA法、EUSA法和循環(huán)酶法等，其中HPLc法是經(jīng)典的方法，循環(huán)酶法是最近推出的新的檢測方法，HPLC法和mA法都具有較高的靈敏度和精密度，是應(yīng)用最廣泛的兩種方法。而mA法操作更加簡單速度也較快，但兩者成本相對較高。EUSA法和循環(huán)酶法操作較簡單并且成本也較低，而循環(huán)酶法在全自動生化分析儀上用，具操作簡單和更快的檢測速度，并有著較好的靈敏度和精密度，具有更加廣泛的應(yīng)用前景。樣本中的氧化型同型半胱氨酸(Hcy)經(jīng)還原劑還原后，在同型半胱氨酸轉(zhuǎn)甲基酶(HcyMetase)的催化作用下，與S-腺苷-L-蛋氨酸(AdoMet)反應(yīng),生成S-腺苷-L-同型半胱氨酸(AdoHcy)和L-蛋氨酸(Met)。S-腺苷-L-同型半胱氨酸在腺香同型半胱氨酸酶(AdoHcyase)的作用下水解為L-同型半胱氨酸和腺苷(Ado )。反應(yīng)生成的蛋氨酸與試劑中的三磷酸腺苷(ATP )在蛋氨酸轉(zhuǎn)腺苷酶(MAT)的作用下生成S-腺華-L-蛋氨酸(AdoMet)。樣本中的L-同型半胱氨酸反復(fù)循環(huán)反應(yīng)，不斷產(chǎn)生腺苷，腺普的生成速率與樣本中同型半胱氨酸的含量成正比，通過測定腺苦的生成速率，就可以達到測定體液樣本中同型半胱氨酸含量的目的。
[0004]現(xiàn)在市面上生產(chǎn)的同型半胱氨酸檢測試劑為了提高其穩(wěn)定性，多將其檢測試劑設(shè)置為四試劑或者三試劑，甚至更多的試劑，當(dāng)遇到只能做雙試劑的生化分析儀器的時候，需要現(xiàn)場手工將試劑按比例混勻，并盡快用完，這樣既增加了操作的繁瑣性，又不利于試劑的長期保存，非常不利于檢測試劑在全自動生化儀器上的推廣。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種穩(wěn)定性好的同型半胱氨酸檢測試劑。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:一種穩(wěn)定的同型半胱氨酸檢測試劑盒，包括體積比為240:65的試劑I和試劑2，試劑I和試劑2的組成及含量如下:
試劑I (Rl)
TRIS (三羥甲基氨基甲烷)緩沖液，PH 7.1EDTA.2Na (乙二胺四乙酸二鈉)0.1~20mM
ATP0.r90mM
S-腺苷甲硫氨酸(SAM)0.rimM
NADH0.3~ImM
三(2羧乙基)膦氯化氫(TCEP)0.5~1mM
α 一酮戊二酸5~IOmM
牛血清白蛋白0.flg/L
疊氮鈉0.1~1 g/L ；
試劑2 (R2)
TRIS (三羥甲基氨基甲烷)緩沖液，Ph7.8
Hcy 甲基轉(zhuǎn)移酶(HMTase )0.5~5.0KU/L
谷氨酸脫氫酶(GLDH)1-5.0KU/L
S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)水解酶(SAHase )2.5~5.0KU/L
腺苷脫氨酶(ADA)1-5.0KU/L
牛血清白蛋白0.flg/L
聚乙二醇1~5g/L
亞鐵氰化鉀15~25umol/L 。
[0007]配制方法:把組分放入緩沖溶液中，混勻，使成對應(yīng)濃度。
[0008]本發(fā)明的有益效果如下:
1)本發(fā)明為雙試劑，改善了先前的的三試劑甚者更多試劑，在使用之前需要現(xiàn)場將試劑手工按比例混合的麻煩，對試劑在全自動生化分析儀器上的使用和推廣起到了很好的作用；
2)本發(fā)明優(yōu)先選擇了Trise (三羥甲基氨基甲烷)緩沖液，做為檢測試劑的緩沖體系，在保證檢測試劑檢測性能不變的情況下，大大提高了檢測試劑的穩(wěn)定性；
3)本發(fā)明在檢測試劑Rl和R2中添加了0.Ι-lg/L的牛血清白蛋白，能夠更好地模擬生物環(huán)境，保護所添加酶，延長酶的活性；
4)本發(fā)明在檢測試劑R2中添加了0.Ι-lg/L的熱穩(wěn)定劑聚乙二醇，聚乙二醇能夠很好的提高試劑R2中所添加酶的熱穩(wěn)定性,能夠延長檢測試劑的高溫條件下的壽命；
5)本發(fā)明還在試劑R2中添加了亞鐵氰化鉀，有效地提高了檢測試劑的抗氧化性。
【具體實施方式】
[0009]實施例1 (對比例)
本實施例描述的是一種市面現(xiàn)有的同型半胱氨酸檢測試劑的配方，下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
[0010]一、試劑組成:
試劑I (Rl):
EDTA.2Na (乙二胺四乙酸二鈉)0.5mM
ATP80mM
S-腺苷甲硫氨酸(SAM)0.1mMNADH0.3mM
三(2羧乙基)膦氯化氫(TCEP )0.5mM
α 一酮戊二酸5.0mM
疊氮鈉0.1 g/L
溶劑為磷酸鹽緩沖液PH7.1，37° C ；
試劑2 (R2):
試劑2a
磷酸鹽緩沖液PH7.8，37° C
Hcy 甲基轉(zhuǎn)移酶(HMTase )5.0KU/L
谷氨酸脫氫酶(GLDH)10KU/L
試劑2b
磷酸鹽緩沖液PH7.8，37° C
S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)水解酶(SAHase) 2.5KU/L 腺苷脫氨酶(ADA)5.0KU/L
使用時:
試劑 2 (R2):按 R2a:R2b=8:5 混勻
二、操作方法:
本實施例描述的是一種市面現(xiàn)有的同型半胱氨酸檢測試劑，在使用時，首先將試劑2中試劑2a和試劑2b按R2a:R2b=8:5混勻，采用具有雙試劑功能的自動生化分析儀，如東芝120全自動分析儀(操作如表1)，將相同的試劑分別分成a、b兩組，a組開瓶放置在儀器的試劑盤中，每天分別檢測高中低值的三種質(zhì)控品，連續(xù)檢測15天，b組封口放置在37°C恒溫箱中，同樣每天分別檢測高中低值的三種質(zhì)控品，檢測完封好放回恒溫箱中，連續(xù)檢測7天，并記錄統(tǒng)計數(shù)據(jù)(表2、表3、)。
[0011]表1同型半胱氨酸檢測試劑檢測方法
【權(quán)利要求】
1.一種穩(wěn)定的同型半胱氨酸檢測試劑盒，其特征在于，包括體積比為240:65的試劑I和試劑2，試劑I和試劑2的組成及含量如下: 試劑I EDTA.2Na0.f20mMATP0.r90mM S-腺苷甲硫氨酸0.flmMNADH0.3~ImM 三(2羧乙基)膦氯化氫0.5~ImM α 一酮戊二酸5~IOmM 牛血清白蛋白0.廣lg/L疊氮鈉0.1~I g/L所用溶劑為PH 7.1的TRIS緩沖液； 試劑2 Hcy甲基轉(zhuǎn)移酶0.5~5.0KU/L 谷氨酸脫氫酶I~5.0KU/L S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)水解酶2.5^5.0KU/L 腺苷脫氨酶I~5.0KU/L 牛血清白蛋白0.廣lg/L聚乙二醇I~5g/L 亞鐵氰化鉀15~25umol/L 所用溶劑為PH7.8的TRIS緩沖液。
【文檔編號】G01N33/535GK103954774SQ201410195095
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年5月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月9日
【發(fā)明者】譚柏清, 羅維曉, 甘宜梧, 王綺 申請人:山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司