一種抗干擾性強(qiáng)的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種抗干擾性強(qiáng)的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒，由體積比為240:65的組分1和組分2組成。通過(guò)在組分1中加入抗壞血酸氧化酶，有效地增強(qiáng)了試劑盒的抗干擾性，減小了丙酮酸等干擾物質(zhì)對(duì)試劑盒檢測(cè)的影響，從而增強(qiáng)了試劑檢測(cè)的準(zhǔn)確性，與化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果達(dá)到極高的一致性，比常規(guī)的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒靈敏度和準(zhǔn)確度高，增強(qiáng)了市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，有利于試劑的市場(chǎng)推廣。
【專利說(shuō)明】-種抗干擾性強(qiáng)的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒，屬臨床體外檢測(cè)試劑【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 同型半胱氨酸（又稱高半胱氨酸Homocysteine，HCY)是含硫氨基酸，在細(xì)胞 內(nèi)由蛋氨酸脫甲基生成。McCully于1969年最先將重度同型半胱氨酸血癥（tHCY濃度 100 - 450 μ mol/ L)與動(dòng)脈粥樣硬化疾病相聯(lián)系，重度同型半胱氨酸血癥是由于參與同 型半胱氨酸代謝的轉(zhuǎn)甲基或轉(zhuǎn)硫作用的酶缺陷所致，常見(jiàn)的有胱硫酶合成酶及亞甲基四氫 葉酸還原酶缺陷。重度同型半胱氨酸血癥病人有早發(fā)性動(dòng)脈粥樣硬化，動(dòng)靜脈栓塞及智力 障礙。近年來(lái)，人們開(kāi)始注意同型半胱氨酸與心血管疾病的聯(lián)系。同型半胱氨酸可使小動(dòng) 脈血管易于栓塞及促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖參與粥樣硬化形成。同型半胱氨酸活化形式 (Homocystein thiolactone)可促使血小板聚集，并可與載脂蛋白B形成致密的復(fù)合物易 于被血管壁巨噬細(xì)胞吞噬，引起血管壁脂肪堆積。同型半胱氨酸能增強(qiáng)其它心血管疾病危 險(xiǎn)因素如膽固醇、高血壓及吸煙對(duì)心血管的損害。通過(guò)上述機(jī)制，同型半胱氨酸促進(jìn)動(dòng)脈粥 樣硬化及血栓形成，使心血管疾病發(fā)病率及死亡率增加,血中同型半胱氨酸濃度升高（tHCY 彡12μπι〇1/ L)是冠心病、中風(fēng)、外周血管粥樣硬化及動(dòng)靜脈栓塞的危險(xiǎn)因子，血中同型半 胱氨酸升高使心血管疾病發(fā)病率及死亡率增加。
[0003] 有報(bào)告高同型半胱氨酸血癥是周圍強(qiáng)直性脊柱炎（As )疾病如間歇性跛行及深靜 脈血栓的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。近來(lái)的研究表明，高同型半胱氨酸血癥除與血管疾病有關(guān)外， 還與神經(jīng)管畸形、先兆子癇、帕金森氏病、老年癡呆、胎兒生長(zhǎng)遲緩、慢性腎功能衰竭等多種 疾病有關(guān)。因此測(cè)定血中tHCY濃度在臨床上意義十分重要。
[0004] 對(duì)于同型半胱氨酸檢測(cè)的方法主要有：同位素標(biāo)記檢測(cè)、HPLC液相色譜檢測(cè)、熒 光偏振法檢測(cè)、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)和酶法檢測(cè)。由于同位素標(biāo)記檢測(cè)和HPLC液相色譜檢測(cè)方 法，靈敏度較差，而且同位素標(biāo)記檢測(cè)方法有放射污染，因此這兩種方法已經(jīng)逐漸被淘汰。 熒光偏振法和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度都比較好，但是配套儀器和試劑盒成本較 高，影響了市場(chǎng)推廣?，F(xiàn)在醫(yī)院對(duì)于同型半胱氨酸檢測(cè)的試劑盒多采用酶法檢測(cè)，該方法操 作簡(jiǎn)單，應(yīng)用醫(yī)院常見(jiàn)的全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)，成本較低。
[0005] 酶法檢測(cè)的主要原理為基于小分子捕獲技術(shù)（SMT)的S-腺苷同型半胱氨酸水解 酶。Hey被轉(zhuǎn)化為游離型后，通過(guò)與共價(jià)底物反應(yīng)，循環(huán)放大，同時(shí)產(chǎn)生腺苷。腺苷在腺苷脫 氨酶作用下，立即水解成氨和次黃嘌呤，氨在谷氨酸脫氫酶的作用下，使NADH轉(zhuǎn)化為NAD， 樣本中的Hey濃度與NADH轉(zhuǎn)化速率成正比。
[0006] 具體的反應(yīng)流程為：

【權(quán)利要求】
1. 一種抗干擾性強(qiáng)的同型半胱氨酸檢測(cè)試劑盒，包括體積比為240 :65的組分1和組 分2 ;各組分的原料及含量如下： 組分1 : S-腺苷甲硫氨酸 0. 1-lmM NADH 0.3-lmM 三（2羧乙基）膦氯化氫 0. 5-5 mM α -酮戊二酸 1-lOmM 抗壞血酸氧化酶 1-5 KU/L ; 組分2 : Hey甲基轉(zhuǎn)移酶 1-10KU/L 谷氨酸脫氫酶 1-10KU/L S-腺苷同型半胱氨酸（SAH)水解酶 0. 5-5KU/L 腺苷脫氨酶 5-10KU/L 。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，組分2中還包含胱硫醚β-合成酶 20-50 KU/L。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，各組分的原料和含量如下： 組分1 : S-腺苷甲硫氨酸 0. ImM NADH 0. 3mM 三（2羧乙基）膦氯化氫 0. 5mM α -酮戊二酸 5mM 抗壞血酸氧化酶 2. 5KU/L ; 組分2 : Hey甲基轉(zhuǎn)移酶 5KU/L 谷氨酸脫氫酶 10KU/L S-腺苷同型半胱氨酸（SAH)水解酶 2. 5KU/L 腺苷脫氨酶 5 KU/L 胱硫醚β -合成酶 25 KU/L。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK104111338SQ201410190785
【公開(kāi)日】2014年10月22日 申請(qǐng)日期:2014年5月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月7日
【發(fā)明者】甘宜梧, 王進(jìn), 譚柏清, 李進(jìn) 申請(qǐng)人:山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司