一種尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定方法
【專利摘要】一種尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定方法，其特征在于：包括樣品經(jīng)稀釋后直接引入液相色譜-電噴霧電離-串聯(lián)質(zhì)譜儀進行測定，可快速、準(zhǔn)確檢測出尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的含量水平。本發(fā)明為全新的尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸含量的測定方法，采用外表法定量分析物；串聯(lián)質(zhì)譜法更好的提高了方法的選擇性與準(zhǔn)確性。通過色譜柱以及洗脫條件的選擇與優(yōu)化，較好的提高了色譜分離過程，縮短了色譜分析的時間。
【專利說明】一種尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定方法
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】:
本發(fā)明屬于尿液樣本的理化檢驗【技術(shù)領(lǐng)域】，具體說是一種采用液相色譜-電噴霧電離-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸含量的方法。
[0002]【背景技術(shù)】:
苯乙烯是塑料橡膠工業(yè)的重要原料，用以制造各種塑料樹脂，合成橡膠，含有苯乙烯的塑料橡膠制品廣泛用于日常生活和工業(yè)生產(chǎn)，如各種包裝材料、隔熱材料、一次性飯盒、紙杯、管道、容器等。苯乙烯還存在于卷煙煙氣中。苯乙烯主要以氣體形式通過呼吸道，或通過皮膚接觸進入人體，短時間接觸高濃度苯乙烯可引起咳嗽、咽痛等呼吸道刺激癥狀；長時間接觸苯乙烯可引起肺組織結(jié)構(gòu)損害，從而使人易患肺炎、肺氣腫等疾病。國際癌癥研究組織將其列為Group 2A，即對人類為很可能致癌物，對動物則為確定之致癌物。吸入體內(nèi)的苯乙烯在CYP2B6和CYP2E酶的作用下代謝為苯乙烯7，8-氧化物，苯乙烯7，8-氧化物在環(huán)氧化物酶的作用下進一步代謝為苯乙醛酸和苯乙醇酸，苯乙醛酸和苯乙醇酸目前已經(jīng)被用作苯乙烯暴露的生物標(biāo)志物,苯乙醛酸和苯乙醇酸的結(jié)構(gòu)式如下:
【權(quán)利要求】
1.一種尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定方法，其特征在于:包括以下工藝步驟: a、收集志愿者尿液； b、樣品前處理:室溫下解凍尿液樣品，混合均勻后，經(jīng)過0.22 μ m的濾膜過濾，取200μ L的尿液,加入0.80 mL純水,取2 μ L濾液弓丨入LC-MS/MS分離分析； C、標(biāo)準(zhǔn)工作液配制:用純水配制不同濃度的苯乙醛酸和苯乙醇酸混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； d、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)測定，吸取配制好的不同濃度的苯乙醛酸和苯乙醇酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，注入LC-MS/MS系統(tǒng)，苯乙醛酸和苯乙醇酸的線性回歸方程分別為y=l.49X 104x+3.81 X IO3 和 y=l.35 Χ104χ_1.34X 104，其中 Y 代表分析物的峰面積，X 表示尿液中目標(biāo)分析物的濃度；相關(guān)系數(shù)大于0.999，對樣品待測液進行測定，測得分析物與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值，代入一元線性回歸方程，求得樣品待測液中分析物的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸含量的測定方法，其特征在于:苯乙醛酸和苯乙醇酸混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度分別為1，2，5，10，50和100 ng/mL和5，10，20，50 和 100 ng/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定方法，其特征在于:選取了 Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18 色譜柱,規(guī)格 150 mmX 2.1 mm, 3.5Mm,初始流動相體系選取50%溶劑A:水溶液和50%溶劑B:甲醇溶液，等度洗脫，流動相流速為400 μ L/min，分析時間為10 min，進樣量為2 μ L0
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定方法，其特征在于:串聯(lián)質(zhì)譜檢測器的條件:電噴霧離子源，多反應(yīng)監(jiān)測負(fù)離子掃描方式；電噴霧電壓:4500V，霧化氣:50 psi,氣簾氣:35 psi,輔助加熱氣:30 psi，射入電壓:9 V，駐留時間:100 ms ο
【文檔編號】G01N30/02GK103837624SQ201410094988
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2014年3月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月14日
【發(fā)明者】張小濤, 楊進, 王安, 劉勇, 侯宏衛(wèi), 胡清源, 陳歡, 劉彤, 韓書磊, 吳帥賓 申請人:國家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心, 中國科學(xué)院合肥物質(zhì)科學(xué)研究院