一種采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法，以綠原酸為質(zhì)量控制指標進行測定，對不同采收時期、加工方法和地質(zhì)條件的金銀花進行實驗，得出了符合綠原酸質(zhì)量指標的參考數(shù)據(jù)，為金銀花的品質(zhì)評價及質(zhì)量控制提供依據(jù)。本發(fā)明通過對不同采收時間和加工方法對金銀花品質(zhì)的影響進行系統(tǒng)研究，確立了金華金銀花的較優(yōu)采收時間和加工方法，提高了金華金銀花的品質(zhì)，從而提高其在醫(yī)藥市場競爭力，保證人類健康，同時增加農(nóng)民收益，促進了地方的經(jīng)濟發(fā)展，彌補了現(xiàn)有缺少關(guān)于采收與加工對金銀花品質(zhì)影響實驗方法，無法為金銀花的采收、加工提供參考依據(jù)的空白。
【專利說明】—種采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于金銀花研究【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法。
【背景技術(shù)】
[0002]金銀花始載《名醫(yī)別錄》，2005版中國藥典首次將金銀花與山銀花兩個品種分列，金銀花為忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或帶初開的花。山銀花是忍冬科植物灰租毛忍冬LoniceramaeranthoidesHandMazz、紅腺忍冬LonicerahypoglaucaMiq.或華南忍冬LoniceraconfusaDC.的干燥花蕾或帶初開的花。金銀花應(yīng)用歷史悠久，且應(yīng)用范圍極廣，據(jù)資料分析，中醫(yī)三分之一方劑中要用到金銀花。傳統(tǒng)醫(yī)學認為金銀花性味甘、寒，具有清熱解毒、涼散風熱的功能，用于癰腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱血毒痢、風熱感冒、瘟病發(fā)熱等癥，屬清熱解毒之要藥。金銀花對多種致病菌均有抑制作用，是一種廣譜抗菌中藥，有“中藥之中的青霉素”之美稱，在“非典”防治、抗擊禽流感及甲型HlNl病毒中都發(fā)揮著重要作用。
[0003]金銀花富含揮發(fā)油，此外，還含有黃酮類、有機酸、三萜類及無機元素等。現(xiàn)代藥理實驗研究證明金銀花具有抗菌、抗病毒、增強免疫功能、抗炎解熱、利膽保肝、降血脂、止血、抗氧化、抗生育等作用。金銀花為中藥購銷中實行國家管理的二類品種，產(chǎn)地集中，調(diào)劑面大，在市場上嚴禁非法倒賣、走私。是衛(wèi)生部和國家工商局關(guān)于30個貴重藥材通知中的品種，并列為出口創(chuàng)匯的主要品種之一。
[0004]金銀花在在金華的種植面積較大，產(chǎn)量高，經(jīng)濟效益可觀，但必須注重金銀花的的質(zhì)量，重視比較優(yōu)勢，以綠原酸為指標，評價金華金銀花質(zhì)量的品質(zhì)是非常關(guān)鍵的。
[0005]現(xiàn)有缺少關(guān)于采收與加工對金銀花品質(zhì)影響實驗方法，無法為金銀花的采收、力口工提供參考依據(jù)，限制了金銀花產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，同時也制約了種植地的經(jīng)濟發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明實施例的目的在于提供一種采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法，旨在解決現(xiàn)有缺少關(guān)于采收與加工對金銀花品質(zhì)影響實驗方法，無法為金銀花的采收、加工提供參考依據(jù)的問題。
[0007]本發(fā)明實施例是這樣實現(xiàn)的，一種采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法，該采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法包括:
[0008]用高效液相色譜法測定金銀花中氯原酸的含量，以超聲提取法提取金銀花中綠原酸；
[0009]以大白期金銀花為材料對殺青干燥、蒸后烘干、直接曬干、硫熏干燥對金銀花外觀性狀和有效成分綠原酸的影響進行比較分析，確定金銀花的加工方法以殺青干燥為主，選擇殺青烘干法條件為殺青溫度120°C，時間90秒；
[0010]采摘五月下旬至六月下旬，以及九月中旬至十月中旬的金銀花，比較不同采收時間對金銀花中綠原酸含量的影響，確定金銀花中綠原酸的含量以五月底六月初時含量最聞;
[0011]通過比較不同產(chǎn)地不同品種金銀花中綠原酸的含量，是否高于1.5%，確定產(chǎn)地的物候條件是否適宜種植金銀花；
[0012]分別對金銀花王，湘蕾一號，湘蕾二號，大花金銀花不同品種金銀花進行綠原酸含量測定，以確定大面積適宜種植的產(chǎn)品。
[0013]進一步，通過比較不同提取方法對綠原酸含量影響的方法為:
[0014]步驟一，色譜條件及系統(tǒng)適用性實驗:
[0015]色譜柱:Z0BAXSB— C18 柱,250mmX 4.6mm, 5 μ m ;流動相:乙腈-0.4 % 磷酸溶液14:86 ;流速:1.0ml.mirT1 ;柱溫:35°C;檢測波長:327nm ;進樣體積:5μ L，理論塔板數(shù)按綠原酸峰計算大于3000，與相鄰色譜峰的達到基線分離，重復性好；
[0016]步驟二，供試品溶液的制備:
[0017]取金銀花樣品研成細粉，過四號篩，稱取細粉0.5g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻即得；
[0018]取金銀花樣品研成細粉，過四號篩，稱取細粉0.5g，置圓底燒瓶中，精密加入70%乙醇50ml,回流提取30min,過濾,藥洛重復上述操作,合并兩次濾液,濃縮,定容至50ml容量瓶中，搖勻，濾過，精密取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻即得；
[0019]取金銀花樣品研成細粉，過四號篩，稱取細粉0.5g，置圓底燒瓶中，精密加入水50ml，煮沸30min，過濾，藥渣重復上述操作，合并兩次濾液，濃縮，定容至50ml容量瓶中，搖勻，濾過，精密取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻即得；
[0020]步驟三，對照品溶液的制備:
[0021]稱取綠原酸對照品，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每ml含0.1096mg的溶液，SP得對照品溶液；
[0022]步驟四，線性關(guān)系考察:
[0023]吸取對照品溶液1.0ml, 2.0ml, 3.0ml, 4.0ml, 5.0ml，分別置棕色量瓶中加50%甲醇稀釋至10.0ml，搖勻，按色譜條件測定綠原酸的峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y=2.19X IO8X-L 52Χ105，r=0.9996，綠原酸進樣濃度在21.20 μ g.πι 1~106.0 μ g.πι 1內(nèi)峰面積積分值與濃度呈線性關(guān)系；
[0024]步驟五，進樣精密度實驗:
[0025]吸取對照品溶液2.0ml，置棕色量瓶中加50%甲醇稀釋至10.0ml，搖勻，作為對照液，連續(xù)進樣5次，進行測定，峰面積的RSD=0.71% ；
[0026]步驟六，穩(wěn)定性實驗:
[0027]吸取步驟四下對照液，分別在0h，2h，4h，8h，12h進樣，進行測定，綠原酸峰面積的RSD=0.77%，結(jié)果表明在12h內(nèi)穩(wěn)定性較好；
[0028]步驟七，重復性實驗:
[0029]稱取同一號樣品五份，按步驟二供試品項下操作，制得供試品溶液，進行測定，綠原酸平均質(zhì)量分數(shù)的RSD = 2.12% ；
[0030]步驟八，加樣回收實驗:[0031]稱取已知含量的樣品五份，精密加入對照品溶液2.0ml或0.212mg ^mr1,按步驟二的方法制備供試品溶液，測定并計算回收率，得平均加樣回收率為102.3%, RSD = 1.57% ；
[0032]步驟九，樣品測定:
[0033]按步驟二的供試品溶液制備方法制備3個樣品溶液，以0.45 μ m微孔濾膜過濾，分別進樣測定，用外標法計算樣品中綠原酸的百分含量。
[0034]進一步，比較不同加工方法對金銀花綠原酸含量影響的方法為:
[0035]步驟一，供試品溶液制備:分別取四種金銀花樣品研成細粉，過四號篩，稱取細粉各0.5g，置具塞錐形瓶中，加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻即得；
[0036]步驟二，樣品測定:
[0037]取制備后的4個樣品溶液，以0.45 μ m微孔濾膜過濾，分別進樣測定，用外標法計
算樣品中綠原酸的百分含量。
[0038]步驟三，采用正交實驗，確定殺青烘干最佳工藝，殺青時將溫度控制在120°C，時間在90秒,綠原酸含量最聞。
[0039]進一步，比較不同采收時間對金銀花綠原酸含量影響的方法為:
[0040]步驟一，第一次花期的采收時間集中在金銀花大量采摘的六月上旬，隔I~2天采摘一次，第二次花期的采摘時間集中在九月下旬，隔五天采摘一次，樣品采摘后，均采用殺青烘干法加工；
[0041]步驟二，分別取不同采收時間制得的各個樣品研成細粉，過四號篩，稱取細粉各
0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻即得；
[0042]步驟三，將取制得后的各樣品溶液，按綠原酸含量測定方法操作，分別進樣測定，用外標法計算樣品中綠原酸的百分含量。
[0043]進一步，九十月份的花蕾作為食品加工企業(yè)金銀花飲料、涼茶的原材料。
[0044]進一步，比較產(chǎn)地對金銀花綠原酸含量影響的方法:
[0045]步驟一，分別取金銀花不同產(chǎn)地樣品研成細粉，過四號篩，稱取細粉各0.5g，置具塞錐形瓶中，加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻即得；
[0046]步驟二，按照步驟一制備4個樣品溶液，以0.45 μ m微孔濾膜過濾，分別進樣測定，用外標法計算樣品中綠原酸的百分含量。
[0047]進一步，比較不同品種對金銀花綠原酸含量影響的方法:
[0048]步驟一，選擇金銀花王，湘蕾一號，湘蕾二號，大花金銀花，對不同品種的金銀花進行含量測定，以確定大面積適宜種植的產(chǎn)品；
[0049]步驟二，分別取金銀花不同品種樣品研成細粉，過四號篩，稱取細粉各0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲 醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻即得；
[0050]步驟三，按照步驟一制備4個樣品溶液，以0.45 μ m微孔濾膜過濾，分別進樣測定，用外標法計算樣品中綠原酸的百分含量。
[0051]進一步，金銀花王，湘蕾一號，湘蕾二號，大花金銀花四個品種的綠原酸含量在
4.282?6.498之間，大花金銀花的綠原酸含量最高。
[0052]本發(fā)明提供的采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法，以綠原酸為質(zhì)量控制指標進行測定，對不同采收時期、加工方法和地質(zhì)條件的金銀花進行實驗，得出了符合綠原酸質(zhì)量指標的參考數(shù)據(jù)，為金銀花的品質(zhì)評價及質(zhì)量控制提供依據(jù)。本發(fā)明通過對不同采收時間和加工方法對金銀花品質(zhì)的影響進行系統(tǒng)研究，確立了金華金銀花的較優(yōu)采收時間和加工方法，提高了金華金銀花的品質(zhì)，從而提高其在醫(yī)藥市場競爭力，保證人類健康，同時增加農(nóng)民收益，促進了地方的經(jīng)濟發(fā)展，彌補了現(xiàn)有缺少關(guān)于采收與加工對金銀花品質(zhì)影響實驗方法，無法為金銀花的采收、加工提供參考依據(jù)的空白。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0053]圖1是本發(fā)明實施例提供的采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法流程圖；
[0054]圖2是本發(fā)明實施例提供的綠原酸對照品HPLC圖譜示意圖；
[0055]圖3是本發(fā)明實施例提供的金銀花樣品HPLC圖譜示意圖。
【具體實施方式】
[0056]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應(yīng)當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0057]下面結(jié)合附圖及具體實施例對本發(fā)明的應(yīng)用原理作進一步描述。
[0058]如圖1所示，本發(fā)明實施例的采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法包括:
[0059]SlOl:用高效液相色譜法測定金銀花中氯原酸的含量，以超聲提取法提取金銀花中綠原酸；
[0060]S102:以大白期金銀花為材料對殺青干燥、蒸后烘干、直接曬干、硫熏干燥對金銀花外觀性狀和主要有效成分綠原酸的影響進行比較分析，確定金銀花的加工方法以殺青干燥為主，選擇殺青烘干法條件為殺青溫度120°C，時間90秒；
[0061]S103:采摘五月下旬至六月下旬，以及九月中旬至十月中旬的金銀花，比較不同采收時間對金銀花中綠原酸含量的影響，確定金銀花中綠原酸的含量以五月底六月初時含量最聞;
[0062]S104:通過比較不同產(chǎn)地不同品種金銀花中綠原酸的含量，是否高于1.5%，確定產(chǎn)地的物候條件是否適宜種植金銀花；
[0063]S105:分別對金銀花王，湘蕾一號，湘蕾二號，大花金銀花不同品種金銀花進行綠原酸含量測定，以確定大面積適宜種植的產(chǎn)品。
[0064]通過以下的實驗對本發(fā)明的應(yīng)用效果做進一步的描述:
[0065]一、實驗樣品:
[0066]1.1 基原:[0067]忍冬為忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾或帶初開的花，山銀花為忍冬科植物灰租毛忍冬LoniceramacranthoidesHand.-Mazz.、紅腺忍冬LonicerahypoglaucaMiq或華南忍冬LoniceraconfuseDC.的干燥花蕾或帶初開的花,夏初花開放前米收，干燥；
[0068]1.2產(chǎn)地:金銀花(忍冬):主產(chǎn)山東、河南、河北，全國大部地區(qū)有分布，灰氈毛忍冬:主產(chǎn)湖南隆回、湖北、重慶、四川等地，華南忍冬:主產(chǎn)于廣東、海南和廣西，紅腺忍冬:主產(chǎn)浙江、江西、福建、湖南、廣東、廣西、四川等省區(qū)；
[0069]1.3原植物形態(tài):
[0070]忍冬，半常綠藤本；幼枝潔紅褐色，密被黃褐色、開展的硬直糙毛、腺毛和短柔毛，下部常無毛，葉紙質(zhì)，卵形至矩圓狀卵形，有時卵狀披針形，稀圓卵形或倒卵形，極少有I至數(shù)個鈍缺刻，長3-5 (-9.5)厘米，頂端尖或漸尖，少有鈍圓或微凹缺，基部圓或近心形，有糙緣毛，上面深綠色，下面淡綠色，小枝上部葉通常兩面均密被短糙毛，下部葉常平滑無毛而下面多少帶青灰色；葉柄長4-8毫米，密被短柔毛，總花梗通常單生于小枝上部葉腋，與葉柄等長或稍較短，下方者則長達2-4厘米，密被短柔后，并夾雜腺毛；苞片大，葉狀，卵形至橢圓形，長達2-3厘米，兩面均有短柔毛或有時近無毛；小苞片頂端圓形或截形，長約I毫米，為萼筒的1/2-4/5，有短糙毛和腺毛；萼筒長約2毫米，無毛，萼齒卵狀三角形或長三角形，頂端尖而有長毛，外面和邊緣都有密毛；花冠白色，有時基部向陽面呈微紅，后變黃色，長(2-) 3-4.5 (-6)厘米，唇形，筒稍長于唇瓣，很少近等長，外被多少倒生的開展或半開展糙毛和長腺毛，上唇裂片頂端鈍形，下唇帶狀而反曲；雄蕊和花柱均高出花冠，果實圓形，直徑6-7毫米，熟時藍黑色，有光澤；種子卵圓形或橢圓形，褐色，長約3毫米，中部有I凸起的脊，兩側(cè)有淺的橫溝紋，花期4-6月(秋季亦常開花)，果熟期10-11月；
[0071]1.4化學成分:
[0072]有關(guān)金銀花的化學成分研究表明，金銀花富含揮發(fā)油(芳樟醇、雙花醇等)，此外還含有機酸(綠原酸、異綠原酸、咖啡酸、棕櫚酸等)、黃酮類、皂苷類等化學成分，金銀花具有清熱解毒，涼散風熱之功效，綠原酸為其有效活性成分，具有抗菌、抗病毒、解熱、升高白細胞、保肝利膽、免役調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血脂、清除自由基等作用；
[0073]1.5藥材性狀:
[0074]忍冬呈棒狀，上粗下細，略彎曲，長2?3cm，上部直徑約3mm，下部直徑約1.5mm,表面黃白色或綠白色(貯久色漸深)，密被短柔毛，偶見葉狀苞片，花萼綠色，先端5裂，裂片有毛，長約2_，開放者花冠筒狀，先端二唇形；雄蕊5個，附于筒壁，黃色；雌蕊I個，子房無毛，氣清香，味淡、微苦；
[0075]山銀花:
[0076]灰氈毛忍冬呈棒狀而稍彎曲，長3?4.5cm,上部直徑約2mm，下部直徑約1mm，表面綠棕色至黃白色，總花梗集結(jié)成簇，開放者花冠裂片不及全長之半，質(zhì)稍硬，手捏之稍有彈性，氣清香，味微苦甘；
[0077]紅腺忍冬長2.5?4.5cm,直徑0.8?2mm,表面黃白至黃棕色,無毛或疏被毛,萼筒無毛，先端5裂，裂片長三角形，被毛，開放者花冠下唇反轉(zhuǎn)，花柱無毛；
[0078]華南忍冬長1.6?3.5cm，直徑0.5?2mm，萼筒和花冠密被灰白色毛，子房有毛。
[0079]二、實驗方法:[0080](一)不同提取方法對綠原酸含量的影響:
[0081]為了避免不同提取、測定方法對金銀花的含量產(chǎn)生影響，本發(fā)明考察了水提法、乙醇回流提取法、超聲提取法中金銀花綠原酸的含量，優(yōu)選合適的綠原酸提取方法；
[0082]1.樣品制備:
[0083]1.1 儀器:
[0084]Agilentl200 液相色譜儀；電子天平(MettlerToledoAL104);超聲儀 HS3120,
[0085]1.2試劑與試藥:
[0086]甲醇與磷酸為分析純；乙腈為色譜純；水為重蒸水；綠原酸對照品(批號:110753-200413)；
[0087]金銀花藥材為忍冬科植物灰租毛忍冬LoniceramaeranthoidesHandMazz干燥花雷;
[0088]2.方法與結(jié)果:
[0089]2.1色譜條件及系統(tǒng)適用性實驗:
[0090]色譜柱:Z0BAXSB— C18 柱(250_Χ4.6mm, 5 μ m);流動相:乙腈-0.4%磷酸溶液(14:86);流速:1.0ml.mirT1 ;柱溫:35°C ;檢測波長:327nm ;進樣體積:5μ L，理論塔板數(shù)按綠原酸峰計算不低于3000，與其相鄰色譜峰的達到基線分離，重復性好，對照品和供試品的高效液相色譜圖見圖2和圖3 ;
[0091]2.2供試品溶液的制備:
[0092]①號樣品制備:取金銀花樣品研成細粉，過四號篩，稱取細粉約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻即得；
[0093]②號樣品制備:取金銀花樣品研成細粉，過四號篩，稱取細粉約0.5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入70%乙醇50ml，回流提取30min，過濾，藥渣重復上述操作，合并兩次濾液，濃縮，定容至50ml容量瓶中，搖勻，濾過，精密取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻即得；
[0094]③號樣品制備:取金銀花樣品研成細粉，過四號篩，稱取細粉約0.5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入水50ml，煮沸30min，過濾，藥渣重復上述操作，合并兩次濾液，濃縮，定容至50ml容量瓶中，搖勻，濾過，精密取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻即得；
[0095]2.3對照品溶液的制備:
[0096]精密稱取綠原酸對照品適量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每ml含0.1096mg的溶液，即得對照品溶液；
[0097]2.4線性關(guān)系考察:
[0098]精密吸取對照品溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml，分別置棕色量瓶中加50%甲醇稀釋至10.0ml，搖勻，按上述色譜條件測定綠原酸的峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y=2.19X IO8X-L 52Χ105, r=0.9996，綠原酸進樣濃度在21.20~106.0 μ g.ml-1內(nèi)峰面積積分值與濃度呈線性關(guān)系；
[0099]2.5進樣精密度實驗:[0100]精密吸取對照品溶液2.0ml，置棕色量瓶中加50%甲醇稀釋至10.0ml，搖勻，作為對照液，連續(xù)進樣5次，進行測定，峰面積的RSD=0.71% ；
[0101]2.6穩(wěn)定性實驗:
[0102]精密吸取2.4項下對照液，分別在0，2，4，8，12h進樣，進行測定，綠原酸峰面積的RSD=0.77%，結(jié)果表明在12h內(nèi)穩(wěn)定性較好；
[0103]2.7重復性實驗:
[0104]精密稱取同一號樣品五份，按2.2供試品項下操作，制得供試品溶液，進行測定，綠原酸平均質(zhì)量分數(shù)的RSD = 2.12% ；
[0105]2.8加樣回收實驗:
[0106]精密稱取已知含量的樣品五份，精密加入對照品溶液2.0ml (0.212mg.ml-1)，按2.2項下方法制備供試品溶液，測定并計算回收率，如表1所示，得平均加樣回收率為102.3%, RSD = 1.57% ；
[0107]表1.金銀花中綠原酸加樣回收率試驗(η=5)
[0108]
【權(quán)利要求】
1.一種采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法，其特征在于，該采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法包括: 用高效液相色譜法測定金銀花中氯原酸的含量，以超聲提取法提取金銀花中綠原酸；以大白期金銀花為材料對殺青干燥、蒸后烘干、直接曬干、硫熏干燥對金銀花外觀性狀和有效成分綠原酸的影響進行比較分析，確定金銀花的加工方法以殺青干燥為主，選擇殺青烘干法條件為殺青溫度120°c，時間90秒； 采摘五月下旬至六月下旬，以及九月中旬至十月中旬的金銀花，比較不同采收時間對金銀花中綠原酸含量的影響，確定金銀花中綠原酸的含量以五月底六月初時含量最高； 通過比較不同產(chǎn)地不同品種金銀花中綠原酸的含量，是否高于1.5%，確定產(chǎn)地的物候條件是否適宜種植金銀花； 分別對金銀花王，湘蕾一號，湘蕾二號，大花金銀花不同品種金銀花進行綠原酸含量測定，以確定大面積適宜種植的產(chǎn)品。
2.如權(quán)利要求1所述的采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法，其特征在于，通過比較不同提取方法對綠原酸含量影響的方法為: 步驟一，色譜條件及系統(tǒng)適用性實驗: 色譜柱:ZOBAXSB — C18 柱,250mmX 4.6mm, 5 μ m ;流動相:乙腈-0.4%磷酸溶液 14:86 ；流速:1.0ml.min-1 ;柱溫:35°C ;檢測波長:327nm ;進樣體積:5μ L,理論塔板數(shù)按綠原酸峰計算大于3000，與相鄰色譜峰的達到基線分離，重復性好； 步驟二，供試品溶液的制備: 取金銀花樣品研成細粉，過四號篩，稱取細粉0.5g，置具塞錐形瓶中，加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻即得； 取金銀花樣品研成細粉，過四號篩，稱取細粉0.5g，置圓底燒瓶中，加入70%乙醇50ml，回流提取30min，過濾，藥渣重復上述操作，合并兩次濾液，濃縮，定容至50ml容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻即得； 取金銀花樣品研成細粉，過四號篩，稱取細粉0.5g，置圓底燒瓶中，加入水50ml，煮沸30min,過濾，藥渣重復上述操作，合并兩次濾液，濃縮，定容至50ml容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻即得； 步驟三，對照品溶液的制備: 稱取綠原酸對照品，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每ml含0.1096mg的溶液，即得對照品溶液； 步驟四，線性關(guān)系考察: 吸取對照品溶液1.0ml, 2.0ml, 3.0ml, 4.0ml, 5.0ml，分別置棕色量瓶中加50%甲醇稀釋至10.0ml，搖勻，按色譜條件測定綠原酸的峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y=2.19X IO8X-L 52Χ105, r=0.9996，綠原酸進樣濃度在21.20 μ g.ml-1~106.0 μ g.ml-1內(nèi)峰面積積分值與濃度呈線性關(guān)系； 步驟五，進樣精密度實驗: 吸取對照品溶液2.0ml，置棕色量瓶中加50%甲醇稀釋至10.0ml，搖勻，作為對照液，連續(xù)進樣5次，進行測定，峰面積的RSD=0.71% ；步驟六，穩(wěn)定性實驗: 吸取步驟四下對照液，分別在011，211，411，811，1211進樣，進行測定，綠原酸峰面積的RSD=0.77%，結(jié)果表明在12h內(nèi)穩(wěn)定性較好； 步驟七，重復性實驗: 稱取同一號樣品五份，按步驟二供試品項下操作，制得供試品溶液，進行測定，綠原酸平均質(zhì)量分數(shù)的RSD = 2.12% ； 步驟八，加樣回收實驗: 稱取已知含量的樣品五份，加入對照品溶液2.0ml或0.212mg.ml-1，按步驟二的方法制備供試品溶液，測定并計算回收率，得平均加樣回收率為102.3%, RSD = 1.57% ； 步驟九，樣品測定: 按步驟二的供試品溶液制備方法制備3個樣品溶液，以0.45 μ m微孔濾膜過濾，分別進樣測定，用外標法計算樣品中綠原酸的百分含量。
3.如權(quán)利要求1所述的采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法，其特征在于，比較不同加工方法對金銀花綠原酸含量影響的方法為: 步驟一，供試品溶液制備:分別取四種金銀花樣品研成細粉，過四號篩，稱取細粉各0.5g，置具塞錐形瓶中，加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻即得； 步驟二，樣品測定: 取制備后的4個樣品溶液，以0.45 μ m微孔濾膜過濾，分別進樣測定，用外標法計算樣品中綠原酸的百分含量， 步驟三，采用正交實驗，確定殺青烘干最佳工藝，殺青時將溫度控制在120°C，時間在90秒,綠原酸含量最聞。
4.如權(quán)利要求1所述的采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法，其特征在于，比較不同采收時間對金銀花綠原酸含量影響的方法為: 步驟一，第一次花期的采收時間集中在金銀花大量采摘的六月上旬，隔I~2天采摘一次，第二次花期的采摘時間集中在九月下旬，隔五天采摘一次，樣品采摘后，均采用殺青烘干法加工； 步驟二，分別取不同采收時間制得的各個樣品研成細粉，過四號篩，稱取細粉各0.5g，稱定，置具塞錐形瓶中，加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻即得； 步驟三，將取制得后的各樣品溶液，按綠原酸含量測定方法操作，分別進樣測定，用外標法計算樣品中綠原酸的百分含量。
5.如權(quán)利要求4所述的采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法，其特征在于，九十月份的花蕾作為食品加工企業(yè)金銀花飲料、涼茶的原材料。
6.如權(quán)利要求1述的采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法，其特征在于，比較產(chǎn)地對金銀花綠原酸含量影響的方法: 步驟一，分別取金銀花不同產(chǎn)地樣品研成細粉，過四號篩，稱取細粉各0.5g，置具塞錐形瓶中，加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻即得； 步驟二，按照步驟一制備4個樣品溶液，以0.45 μ m微孔濾膜過濾，分別進樣測定，用外標法計算樣品中綠原酸的百分含量。
7.如權(quán)利要求1述的采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法，其特征在于，比較不同品種對金銀花綠原酸含量影響的方法: 步驟一，選擇金銀花王，湘蕾一號，湘蕾二號，大花金銀花，對不同品種的金銀花進行含量測定，以確定大面積適宜種植的產(chǎn)品； 步驟二，分別取金銀花不同品種樣品研成細粉，過四號篩，稱取細粉各0.5g，稱定，置具塞錐形瓶中，加入50%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻即得; 步驟三，按照步驟一制備4個樣品溶液，以0.45 μ m微孔濾膜過濾，分別進樣測定，用外標法計算樣品中綠原酸的百分含量。
8.如權(quán)利要求7所述的采收與加工對金銀花品質(zhì)影響的實驗方法，其特征在于，金銀花王，湘蕾一號，湘 蕾二號，大花金銀花四個品種的綠原酸含量在4.282~6.498之間，大花金銀花的綠原酸含量最高。
【文檔編號】G01N30/02GK103808823SQ201410063999
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2014年2月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月25日
【發(fā)明者】張慧芳, 羅國海, 邱嬌英, 歐陽燕梅, 楊奕, 包衛(wèi)華 申請人:金華職業(yè)技術(shù)學院